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Techniques de numération de suspensions bactérienne. Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse. Numération sur milieu solide ensemencement.

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1 Techniques de numération de suspensions bactérienne. Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse. Numération sur milieu solide ensemencement en surface. Numération sur milieu liquide Détermination du NPP. Etablissement de la courbe de croissance.

2 Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse Au fait, comment on détermine la gamme de dilution? On évalue la concentration initiale grâce à la valeur dabsorbance lue, sachant que 0,1 UA correspond à bact.mL -1 La concentration cible doit être voisine de 300 bact.mL -1 On prépare en plus les deux dilutions qui encadrent la cible. t = 30 mn

3 Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse. On évalue la concentration initiale grâce à la valeur dabsorbance lue, sachant que 0,1 UA correspond à bact.mL -1 La concentration cible doit être comprise entre 30 et 300 bact.mL -1 On prépare en plus les deux dilutions qui encadrent la cible. Technique densemencement. 2 variantes: On verse linoculum dans 9 mL de gélose en surfusion. On mélange et on verse dans une boîte de Pétri t = 30 mn

4 Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse. Technique densemencement. 2 variantes: On verse linoculum dans la boîte de Pétri. On verse la gélose en surfusion et on mélange doucement Comment choisir entre les deux ? t = 30 mn

5 Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse. Calculs trop On compte les colonies. On analyse les résultats. On calcule la moyenne. n = [( )/ ]/3 = 23,1 bact.mL -1 N 30mn = n / D = 23, bact.mL t = 30 mn

6 Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse. Calculs. trop trop On compte les colonies. On analyse les résultats. On calcule la moyenne. n = [( )/10 + ( )]/4 = 55,4 bact.mL -1 N 150mn = n / D = bact.mL t = 150 mn RETOUR Je suis désolée de te le dire, mais la dilution a été mal choisie !

7 Numération sur milieu solide ensemencement en surface Au fait, comment on détermine la gamme de dilution? On évalue la concentration initiale grâce à la valeur dabsorbance lue, sachant que 0,1 UA correspond à bact.mL -1 La concentration cible doit être comprise entre 300 et 3000 bact.mL -1 On prépare en plus les deux dilutions qui encadrent la cible. t = 60 mn

8 Numération sur milieu solide ensemencement en surface Technique densemencement. On dépose linoculum sur la gélose dune boîte de Pétri. On étale au râteau. t = 60 mn

9 Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse. Calculs On compte les colonies. On analyse les résultats. On calcule la moyenne. n = [( )/10 + ( )]/4 = 38,3 bact.mL -1 N 150mn = n / D = 38, bact.mL -1 t = 60 mn

10 Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse. Calculs On compte les colonies. On analyse les résultats. On calcule la moyenne. n = (72+ 76)/2 = 74 bact.mL -1 N 150mn = n / D = bact.mL -1 t = 120 mn RETOUR

11 On évalue la concentration initiale grâce à la valeur dabsorbance lue, sachant que 0,1 UA correspond à bact.mL -1 La concentration cible doit être voisine de 1 bact.mL -1 On prépare en plus les 4 dilutions qui encadrent la cible. t = 90 mn Numération sur milieu liquide Détermination du NPP Au fait, comment on détermine la gamme de dilution?

12 Technique densemencement. t = 90 mn Numération sur milieu liquide Détermination du NPP

13 Calculs t = 90 mn Numération sur milieu liquide Détermination du NPP Mac Grady : NPP = 7Mac Grady : NPP = 0,7 N 90mn = n / D = bact.mL -1 N 90mn = n / D = 0, bact.mL -1 On note le code. On consulte Mc Grady. On calcule la concentration. RETOUR

14 Etablissement de la courbe de croissance. DtAbs 00, , , , , , , , , , , , , ,369 tAbs 00, , , , , , , , , , , , , ,380 tAbsC 00, , ,2072, , ,3963, , ,7597, , ,45414, , , , , ,380 Pour établir le graphe, on établit les absorbance théorique avant dilution. On reporte les valeurs calculées. On compare les deux courbes. Les deux courbes sont superposables (a = 0,021). k = 1, / 0,108 = 1, bact.UA RETOUR


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