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Sérogroupage des Salmonella 1 Réalisation par Christiane JOFFIN.

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1 Sérogroupage des Salmonella 1 Réalisation par Christiane JOFFIN

2 2 POURQUOI ? Obtenir la formule antigénique qui désigne le SÉROVAR, seul moyen de préciser lidentification dune Salmonella

3 3 QUE RECHERCHE TON ? Ag O de paroi Ag H du flagelle pour les souches mobiles Ag Vi de la micro-capsule

4 1- Les antigènes des Salmonella (et des bactéries Gram négatives) 4

5 5 Voir dictionnaire des techniques

6 6

7 2- Le principe du sérogroupage des Salmonella 7

8 8 COMMENT ? Après lidentification biochimique du genre Salmonella Avec une culture pure sur une gélose non sélective (Kligler par exemple) Par une identification des Ag O, H (et Vi) en utilisant des Ac connus par une technique dagglutination directe sur lame.

9 Principe du sérogroupage Identifier : -dabord les Ag O de paroi, -puis les Ag H de flagelle -et éventuellement lAg Vi en utilisant des Ac connus spécifiques des Ag O (Ac anti O), des Ag H (Ac anti H) et de lAg Vi. Si les bactéries ont des Ag spécifiques des Ac utilisés connus, il va y avoir union Ag / Ac avec formation dun réseau volumineux visible sous forme dun agglutinat. 9

10 10

11 11 Agglutination des Salmonella par suite réaction Ag O/ Ac anti O Agglutination des Salmonella par suite dune réaction Ag H / Ac anti H

12 3- Les réactifs pour le sérogroupage des Salmonella 12 Voir dictionnaire des techniques

13 Origine des Ac : Ac fabriqués par des lapins et obtenus en recueillant leur sérum Prix des sérums : 30 les 3 mL soit 10 par mL et par L (un lingot dor (1 kg) =

14 3-1- Les Ac anti Ag O Des sérums O mélange (OMx) Sérums (contenant un grand nombre dAc de sortes différentes) : 6 sérums mélange (Omx : OMA, OMB, OMC, OMD, OMF, OMG) Des sérums O monovalents Sérums ne contenant quun seul type dAc : 1,2 / 4,5 / 6,7,8 / 7 / 8 / 9 / 3,10,15 / 10 / 15 / 1,3,19 / 11 / 13,22,23 / 6,14,24. 14

15 15 Sérum O mélangeAg spécifiques des Ac du sérum Groupes agglutinés OMA1,2,3,4,5,9,10,12,19,21,46A,B,D,E,L OMB6,7,8,11,13,14,20,22,23,24C,F,G,H OMC16,17,18,28,30,35,38I,J,K,L,M,N,O,P OMD39,40,41,42,43,44,45Q,R,S,T,U,V,W OMF47,48,50,51,52,53X,Y,Z,51,52,53 OMG60,61,62,63,65,66,67

16 Les Ac anti Ag O monovalents Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMA ? Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMB ? 16 Ac anti 0 1, 2 pour le groupe A Ac anti 0 4, 5 pour le groupe B Ac anti 0 9 pour le groupe D Ac anti 0 3, 10, 15 pour le groupe E Le groupe le plus fréquent : groupe C à tester avec Ac anti

17 3-2- Les Ac anti Ag H Des sérums H mélange –Sérum contenant un mélange dAc anti Ag H Des sérums H monovalents –Sérum ne contenant quun seul type dAc 17

18 3-3- Les Ac anti Ag Vi Une seule valence Trois sérovars concernés Attention : dautres Entérobactéries possèdent cet antigène (Klebsiella…) 18

19 4- La technique du sérogroupage 19 Voir dictionnaire des techniques

20 4-1- Les étapes du sérogroupage Premières étapes 1- Sassurer que la bactérie est bien une Salmonella 2- Vérifier que la souche nest pas auto-agglutinable (réalisation dun témoin de non auto-agglutinabilité en mettant les bactéries en présence deau physiologique) 20

21 Les étapes du sérogroupage (suite) Etapes suivantes : identification du (ou des) groupe(s) O 3- Identifier les groupes auxquels la bactérie appartient grâce à des sérums mélanges dAc anti-O –OMA = agglutinines groupes A, B, D, E, L (contient Ag 1, 2, 3, 4, 5, 9, 10, 12, 19, 21, et 46) –OMB = agglutinines groupes C, F, G, H (contient Ag 6, 7, 8, 11, 13, 14, 20, 22, 23, 24) Remarque : si pas dagglutination avec OMA et OMB, il faudra recherher si la souche a lAg Vi en utilisant des AC anti Vi 4- Préciser lidentification des Ag O en utilisant des sérums Anti O (sérums monovalents) en les choisissant par ordre de fréquence de groupe. 21

22 Les étapes du sérogroupage (suite) Dernières étapes : identification du sérogroupe précis par identification des Ag H. 5- Identifier SI POSSIBLE les Ag H parmi ceux possibles (en fonction du résultat de lidentification de lAg O) grâce à des Ac anti H (mélange et monovalent). Respecter lordre des fréquences de groupe. 22

23 Sérum OMA Anti O 4, 5 Anti O 9 Anti H g, mAnti H l, v 7 Anti H 1, Exemple de résultats dun sérogroupage Pas dagglutination avec leau physiologique : Agglutination avec OMA : Agglutination avec Anti O9 : Agglutination avec Anti H1 et H5 Les bactéries testées ne sont pas auto-agglutinables, les autres résultats peuvent être interprétés les Salmonella appartiennent aux groupes A, B, D, E, L les Salmonella appartiennent au groupe D les Salmonella sont Salmonella Panama La bactérie nappartient pas au groupe B


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