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Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune : utilisation de critères morphométriques et de nouvelles approches protéomiques Encadrants: Pascal.

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1 Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune : utilisation de critères morphométriques et de nouvelles approches protéomiques Encadrants: Pascal Fontaine, Jean-Noël Gardeur, Bérénice Schaerlinger Castets Marie-Dorothée

2 1 Géniteurs Œufs Ovocytes Spermatozoïdes Larves Domestication de nouvelles espèces Maîtrise du cycle de vie Besoin dindicateurs de qualité – morphométriques/moléculaires Approche générique Perca fluviatilis Modification des performances de reproduction

3 Collecte dovocytes Ovocytes non fécondés Congélation Analyse protéomique Protéines dintérêt ? Mise au point du protocole F. Silvestre, Namur Ovocytes fécondés Incubation (laboratoire) Suivi : mesure des caractéristiques Base de données œufs/paramètres Classification des œufs / qualité (ACP-CAH) 1. Protocole expérimental 2 Site expérimental de La Bouzule

4 -Géniteurs poids, date de ponte -Ovocytes diamètre et poids ovocytaire, fragmentation des pontes -Œufs fécondés Taux de fécondation à 3 jours, Durée dincubation, Durée déclosion, Taux déclosion -Larves Taux de malformation larvaire, Taille des larves à léclosion, Taux de survie à 7 jours, Taux de résistance au jeûne OD jc l 2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes 3

5 Starvation tolerance Axis 1 Female weight Egg weight Fragmentation rate Oocyte diameter Fertilization rate Hatching rate Incubation duration Hatching duration Malformation rate Larval size at hatching Survival rate after 7 days Axis 2 Spawning date Résultats : Analyse en Composantes Principales – Cercle des corrélations Axe 1 Axe 2 Axe 3 Variables non impliquées dans des axes Variables actives Variables illustratives Taux de survie larvaire à 7 jours Taux de résistance au jeûne Taux de fécondation Taux déclosion Taux de malformation larvaire 2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes 4

6 Mr Hr Fer Lz Sm s7d Ew Hd Sf OdOd Frr Id Sw Classe A Classe B Axis 1 Axis 2 2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes Résultats : ACP + CAH – Classification des pontes 5

7 Classe A Bonne qualité Classe B Qualité moyenne Taux de survie à 7jours (%)9339 Taux de résistance au jeûne (dl50; jour)126 Taille des larves à l'éclosion (mm)55 Taux de malformation larvaire (%)14 Mise en évidence de 2 catégories de pontes selon lACP 5 à 6 pontes de chaque classe sélectionnée pour une étude protéomique 2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes Résultats : Caractéristiques des classes Ajout d1 catégorie de pontes sans aucune fécondation 6 Classe C Non Fécondées

8 Std. interne Ech. 1 Ech. 2 Std. interne Ech. 3 Ech. 4 Electrophorèse 2D Std. interneEch. 1 Ech. 2 Std. interneEch. 3Ech. 4 25µg 3. Etude protéomique des ovocytes Technologie 2D-DIGE : Principe 27.5µg 7

9 Mr (kDal) 4 7 pI (pH units) Etude protéomique des ovocytes Résultats : spots dintérêt (variation dabondance intergroupe – p<0.05) 34 spots dont lexpression varie selon les groupes de pontes 8

10 BQ MQ NF AB C D Bonne Qualité Non Fécondés Qualité Moyenne 3. Etude protéomique des ovocytes Résultats : Classification spots/oocytes 9 2 Groupe C Groupe A Groupe DGroupe B Qualité Moyenne Non Fécondés Bonne Qualité + 4 groupes : QMNF BQ

11 Groupe A Groupe DGroupe BGroupe C QMNFBQ Inhibition de lexpression Activation de lexpression - Classification des fonctions biologiques 10 QMNFBQNF 3. Etude protéomique des ovocytes Résultats : Identification des spots par spectrométrie de masse MS/MS - 19 spots identifiés / 34

12 Protéines du Stress oxydatif Groupe A Protection cellulaire contre les espèces réactives de loxygène Protéines du Stress Groupe B Protéines chaperonnes + protection des protéines lors dun stress 3. Etude protéomique des ovocytes Perspectives : Protéines/fonctions potentiellement intéressantes Biomarqueurs potentiels de qualité 11 Ovocytes Non Fécondés Ovocytes Qualité Moyenne

13 Merci de votre attention. 12 Remerciements : Equipes de lUniversité de Notre Dame de la Paix (Namur) : -Frédéric Silvestre, Patric Kestemont, URBO -Edouard Delaive, Marc Dieu, URBC Equipe de lUR.AFPA : -Yannick Ledoré, Alain Iuretig, Awatef Trabelsi, Kevin Debes


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