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Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune : utilisation de critères morphométriques et de nouvelles approches protéomiques Encadrants: Pascal.

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1 Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune : utilisation de critères morphométriques et de nouvelles approches protéomiques Encadrants: Pascal Fontaine, Jean-Noël Gardeur, Bérénice Schaerlinger Castets Marie-Dorothée

2 1 Géniteurs Œufs Ovocytes Spermatozoïdes Larves Domestication de nouvelles espèces Maîtrise du cycle de vie Besoin dindicateurs de qualité – morphométriques/moléculaires Approche générique Perca fluviatilis Modification des performances de reproduction

3 Collecte dovocytes Ovocytes non fécondés Congélation Analyse protéomique Protéines dintérêt ? Mise au point du protocole F. Silvestre, Namur Ovocytes fécondés Incubation (laboratoire) Suivi : mesure des caractéristiques Base de données œufs/paramètres Classification des œufs / qualité (ACP-CAH) 1. Protocole expérimental 2 Site expérimental de La Bouzule

4 -Géniteurs poids, date de ponte -Ovocytes diamètre et poids ovocytaire, fragmentation des pontes -Œufs fécondés Taux de fécondation à 3 jours, Durée dincubation, Durée déclosion, Taux déclosion -Larves Taux de malformation larvaire, Taille des larves à léclosion, Taux de survie à 7 jours, Taux de résistance au jeûne OD jc l 2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes 3

5 Starvation tolerance 0.80.40 -0.4 - 0.8 Axis 1 Female weight Egg weight Fragmentation rate Oocyte diameter Fertilization rate Hatching rate Incubation duration Hatching duration Malformation rate Larval size at hatching Survival rate after 7 days 0. 8 0. 4 0 - 0.4 -0.8 Axis 2 Spawning date Résultats : Analyse en Composantes Principales – Cercle des corrélations Axe 1 Axe 2 Axe 3 Variables non impliquées dans des axes Variables actives Variables illustratives Taux de survie larvaire à 7 jours Taux de résistance au jeûne Taux de fécondation Taux déclosion Taux de malformation larvaire 2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes 4

6 2.25 0.75 0 -0.75 -1.50 15-3 1.50 15-2 15-1 28-1 34-1 37-2 34-3 36-2 34-2 36-1 36-3 39-1 39-2 37-3 35-3 35-2 35-1 28-3 22-3 22-1 6-3 21-2 16-3 16-2 21-3 16-1 27-1 28-2 37-1 21-1 22-2 6-1 6-2 42-2 42-3 25-1 25-2 27-3 27-2 42-1 Mr Hr Fer Lz Sm s7d Ew Hd Sf OdOd Frr Id Sw Classe A Classe B -3 -2 0 1 2 Axis 1 Axis 2 2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes Résultats : ACP + CAH – Classification des pontes 5

7 Classe A Bonne qualité Classe B Qualité moyenne Taux de survie à 7jours (%)9339 Taux de résistance au jeûne (dl50; jour)126 Taille des larves à l'éclosion (mm)55 Taux de malformation larvaire (%)14 Mise en évidence de 2 catégories de pontes selon lACP 5 à 6 pontes de chaque classe sélectionnée pour une étude protéomique 2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes Résultats : Caractéristiques des classes Ajout d1 catégorie de pontes sans aucune fécondation 6 Classe C Non Fécondées

8 Std. interne Ech. 1 Ech. 2 Std. interne Ech. 3 Ech. 4 Electrophorèse 2D Std. interneEch. 1 Ech. 2 Std. interneEch. 3Ech. 4 25µg 3. Etude protéomique des ovocytes Technologie 2D-DIGE : Principe 27.5µg 7

9 367 701 715 482 10291032 707 1469 1463 1406 1334 1681 1717 1660 1742 1683 1792 1610 1472 1953 1969 2399 2325 2474 2454 2708 2782 2835 2875 2252 2137 2447 20 30 50 40 60 70 80 90 Mr (kDal) 4 7 pI (pH units) 56 3. Etude protéomique des ovocytes Résultats : spots dintérêt (variation dabondance intergroupe – p<0.05) 34 spots dont lexpression varie selon les groupes de pontes 8

10 3436283739413540203326622212538 -0.200.2 BQ MQ NF 1 1-2 1-1 1660 1717 2474 2454 1742 2325 1792 2270 2708 2782 2835 2875 2137 367 2399 707 482 1681 701 715 1406 1610 1469 1463 1441 1683 1029 1953 1472 2447 1334 1969 1032 2252AB C D Bonne Qualité Non Fécondés Qualité Moyenne 3. Etude protéomique des ovocytes Résultats : Classification spots/oocytes 9 2 Groupe C Groupe A Groupe DGroupe B Qualité Moyenne Non Fécondés Bonne Qualité + 4 groupes : QMNF BQ

11 Groupe A Groupe DGroupe BGroupe C QMNFBQ Inhibition de lexpression Activation de lexpression - Classification des fonctions biologiques 10 QMNFBQNF 3. Etude protéomique des ovocytes Résultats : Identification des spots par spectrométrie de masse MS/MS - 19 spots identifiés / 34

12 Protéines du Stress oxydatif Groupe A Protection cellulaire contre les espèces réactives de loxygène Protéines du Stress Groupe B Protéines chaperonnes + protection des protéines lors dun stress 3. Etude protéomique des ovocytes Perspectives : Protéines/fonctions potentiellement intéressantes Biomarqueurs potentiels de qualité 11 Ovocytes Non Fécondés Ovocytes Qualité Moyenne

13 Merci de votre attention. 12 Remerciements : Equipes de lUniversité de Notre Dame de la Paix (Namur) : -Frédéric Silvestre, Patric Kestemont, URBO -Edouard Delaive, Marc Dieu, URBC Equipe de lUR.AFPA : -Yannick Ledoré, Alain Iuretig, Awatef Trabelsi, Kevin Debes


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