La famille des Streptococcaceae Généralités : Les streptocoques appartiennent à la famille des Streptococcaceae qui comporte plusieurs genres tels que : - Streptococcus - Enterococcus - Lactococcus - Se sont des cocci à Gram+, arrondis ou ovoïdes disposés en chainettes +/- longues ou en diplocoques - Ils sont dépourvus de cytochromes oxydase et de catalase => Oxydase – Catalase – - Les streptocoques nécessitent pour leur multiplication de nombreux facteurs de croissance qui sont présents dans la gélose au sang frais.

Culture & métabolisme • Les streptocoques ont un métabolisme anaérobie, la plupart des souches tolèrent l'oxygène et peuvent être cultivées in vitro en atmosphère aérobie. Leur croissance est favorisée par l'apport de CO2 ou par une atmosphère anaérobie. • Les entérocoques sont proches des streptocoques (même morphologie et métabolisme anaérobie), mais ils peuvent se multiplier sur des milieux de culture ordinaires (non additionnés de sang). Contrairement aux streptocoques, les entérocoques sont résistants (NaCl, chaleur, bile…) et hydrolysent l’esculine (sur BEA par exemple).)

CLASSIFICATION La classification se base sur  La capacité d’hémolyser les globules rouges et on distingue : - hémolyse incomplète : streptocoques α hémolytiques - hémolyse complète : streptocoques β hémolytiques pas d'hémolyse : streptocoques non hémolytiques  Leur équipement antigénique (classification de Lancefield) : un antigène de la paroi, le polyoside C permet de définir plusieurs groupes : A, B, C, D, E, F, G.... Certains streptocoques, dépourvus de polyoside C, sont dits "non groupables".  Les caractères biochimiques

Les caractères d'identification biochimique des différents genres bactériens de la famille des Streptococcacea

LE MILIEU BEA (Bile Esculine Azide): recherche d’une esculinase Milieu d’isolement sélectif des bactéries du genre Streptococcus appartenant au groupe D et les bactéries du genre Enterococcus.

PRINCIPE

Avant Après

Milieux Hypersalés Ce sont des milieux où les conditions de vie sont très difficiles par modification de pH, de pression osmotique ou par l’addition d’un agent inhibiteur. Ces milieux sont utilisés dans l’identification des Streptococcus du groupe D. Mode d’ensemencement: Quelques gouttes de suspension Incubation : 24 à 48 h à 37°C Caractère recherché: Culture en milieu hypersalé Résultats: - tube clair : stérile négatif. - tube trouble : positif.

TEST DE LYSE PAR LA BILE PRINCIPE Les sels biliaires provoquent la lyse de Streptococcus pneumoniae, alors qu’ils sont sans effet sur les autres streptocoques. Il semble qu’il ne s’agisse pas d’une action directe, mais de l’inhibition d’un système réprimant l’autolyse. TECHNIQUES Plusieurs techniques sont applicables, mais l’interprétation n’est possible que s’il s’agit de cultures jeunes, en phase S. * A partir d’une culture en milieu gélosé Mettre en suspension dans 2 ml d’eau physiologique des colonies prélevées à la surface d’une gélose au sang en évitant de racler le milieu. Répartir en deux tubes à hémolyse et procéder comme ci-dessus.

* A partir de culture en milieu liquide - Répartir 1 ml de culture en bouillon glucosé tamponné ou en milieu de Todd-Hewitt dans deux tubes à hémolyse. Ajouter dans l’un 5 gouttes d’une solution de désoxycholate de sodium à 10% ou de taurocholate de sodium à 5% ou de bile, et dans l’autre (témoin) 5 gouttes d’eau physiologique. Laisser à la température du laboratoire. - En 5 à 10 min, le tube contenant les sels biliaires ou la bile s’éclaircit (souvent l’éclaircissement n’est pas complet mais on note une disparition des ondes moirées, caractéristiques de la culture).  Comparer avec le témoin.

La gélose au sang C’est un milieu d’isolement enrichi sur lequel les Streptocoques se développent bien. Il permet, la lecture du caractère hémolytique C’est un milieu riche d’autant plus par la présence de sang halo parfaitement clair transparent autour de la colonie halo + petit à bords irréguliers, souvent verdâtre Hémolyse complète Hémolyse partielle Absence d’hémolyse Streptocoques des groupes A, B, C, G, F Streptocoques « non groupables » dont S. pneumoniae autres streptocoques et entérocoques

RECHERCHE DE LA SENSIBILITE A LA BACITRACINE ET A L’OPTOCHINE TECHNIQUE : Etaler un inoculum abondant de la souche à étudier, en effectuant des stries serrées. Puis déposer sur les premières stries, un disque imprégné d’antibiotique (bacitracine ou optochine). Incuber à 37°C. Après 24h, observer la présence ou l’absence de culture autour du disque. LECTURE ET INTERPRETATION :

CONCLUSION : - Sensibilité à la Bacitracine : Si la souche étudiée est un coque gram +, catalase -, β-hémolytique, sensible à la Bacitracine, alors c’est un Streptocoque du groupe A. -Sensibilité à l’Optochine : Si la souche étudiée est un coque gram +, capsulé, catalase -, α-hémolytique, sensible à l’Optochine, alors on suspecte fortement l’espèce Streptococcus pneumoniae.