Audit Accréditation COFRAC Sérologie Echinococcus Laboratoire de Parasitologie-Mycologie CHRU Besançon & Centre National de Référence Echinococcose alvéolaire Octobre 2014

Audit COFRAC 27 novembre 2013 - Auditeur : Mr Ly (Biomnis Paris) Discussion ++ sur Traçabilité de la prestation de conseil Elisa : Validation des seuils modifiés, coefficient de variation. 3 écarts non critiques Absence de l’analyse Western Blot isolée sur le répertoire des examens de laboratoires Absence de preuve sur les CV (répétabilité 10%, fidélité intermédiaire 20%)  issu du groupe Anofel, non publiés…… Non formalisation préalable de l’EEQ Serologie 20 écarts sur le CHRU, non critiques Accréditation COFRAC 8-3294 du 6 août 2014 (4 ans) Nouvelle visite avril 2015 (extension portée sérologie)

Centre National de Référence Echinococcose alvéolaire Octobre 2014 MISE EN PLACE D’UN PROGRAMME D’ÉVALUATION EXTERNE DE LA QUALITÉ (EEQ) POUR LA SÉROLOGIE ECHINOCOCCUS Centre National de Référence Echinococcose alvéolaire Octobre 2014

Contexte La démarche d’accréditation selon la norme ISO 15189 ou les autres normes internationales (ISO/IEC 17025 ou ISO 9001) est une étape essentielle pour les laboratoires de biologie médicale afin de démontrer leurs compétences et la qualité de leurs prestations analytiques. Elle s’intéresse particulièrement à la qualification initiale et continue de leur personnel, les facteurs influençant les phases pré-analytiques et analytiques, les processus d’assurance qualité, ainsi que la maitrise de la phase post-analytique. Cette démarche inclut notamment la nécessité, pour chaque examen, de participer à un programme d’échange : contrôle inter-laboratoire (CIL) ou évaluation externe de la qualité (EEQ). UKNEQAS : programme d’EEQ pour la sérologie échinococcose kystique (EK). Absence d’EEQ disponible en 2012 pour la sérologie échinococcose alvéolaire (EA) CNR-EA: mise en place dès 2012 un premier échange interlaboratoire pilote avec un autre laboratoire (CERBA), et dès 2013 un programme d’EEQ de sérologie Echinococcus, gratuit et plus ouvert.

Mise en place EEQ 1er programme d’EEQ (2013) : 10 laboratoires ont été sollicités par le CNR-EA pour participer. Le choix des participants a été basé soit sur leur forte activité en sérologie Echinococcus (CERBA et BIOMNIS), soit sur le partage avec le CNR-EA des mêmes techniques Elisa commercialisées. Deux échantillons sériques anonymisés ont été envoyés pour expertise aux participants en mars 2013 (un d’un patient avec EA, un d’un patient EK). La variabilité inter-laboratoire pour les techniques Elisa a été mesurée. Renouvellement EEQ : une information a été effectuée au niveau national (ANOFEL) et européen (mailing laboratoires référents) En janvier 2014, 2 échantillons sériques (un d’un patient avec EA, un d’un patient sans échinococcose) ont ainsi été adressé à 26 laboratoires, 21 français et 5 européens (3 suisses, 1 allemand, 1 tchèque).

Résultats 1er EEQ - mars 2013 9 des 10 participants réalisaient les tests de 1ère ligne (screening/dépistage) et de deuxième ligne (confirmation). Le laboratoire restant sous-traitait la réalisation de la technique de confirmation en cas de réaction de dépistage positive. Tous les participants (10/10)  réactifs commercialisés (8 réactifs différents), aucune méthode « maison ». Forte variabilité analytique avec les techniques Elisa commercialisées communes aux participants (Elisa E.g et Elisa Em2+, Bordier, Suisse)  coefficients de variation (CV) respectifs de 0,50 (Em2+) et 0,25 (E.g). Des niveaux équivalents de variabilité intra-laboratoire avaient été précédemment observés au CNR-EA (non publié). Sérum du patient EA : identifié comme positif pour la présence d’Acs anti-Echinococcus dans tous les centres. 6 centres sur 9 : EA probable Sérum du patient EK : 3 laboratoires ne l’ont pas détectés comme positif (sérum présentant un faible niveau de réactivité avec les techniques de dépistage). Mais … sérums préalablement dilués pour avoir réactivité modérée en Elisa…..

Résultats 2eme EEQ - février 2014 Retardé du fait de la formalisation exigée par le COFRAC…. A permis de valider l’envoi des échantillons congelés, en France et en Europe. 25 des 26 laboratoires réalisaient les tests de 1ère ligne (screening/dépistage) et de deuxième ligne (confirmation). Un laboratoire restant sous-traitait la réalisation de la technique de confirmation en cas de réaction de dépistage positive, un autre réalisait à la fois une technique de confirmation mais envoyait le sérum pour confirmation parallèle à un autre laboratoire. TRES grande diversité des techniques utilisées, complexifiant l’analyse des résultats 13 réactifs commercialisés différents (Elisa: 9, Hemagglutination indirecte HAI : 1, IgE :1, Western Blot : 2) 20 tests maison différents (Co-électrosynérèse : 2, Western Blot : 2, HAI :1, Elisa : 15, dont 6/15 Elisa E.g Hydatic Fluid HF)… !! Les 2 échantillons ont été correctement analysés par tous les participants =100% bonnes réponses Cette EEQ a permis d’objectiver le dysfonctionnement d’un même réactif Elisa (Elisa Scimedx, Denville, USA), par 2 laboratoires  déclaration de réactovigilance auprès de l’ANSM.

Conclusion Intérêt majeur pour les laboratoires participants des programmes d’EEQ dans la connaissance de leurs propres techniques. EEQ gratuite organisée par le CNR-EA dans le cadre des ses missions d’expertise : garantir la qualité des résultats sérologiques au niveau national. Permet aussi la mise en place d’un réseau européen de laboratoires impliqués dans le diagnostic des échinococcoses.  diversité des techniques : complexification ++ analyse 2ème EEQ 2014, malgré feuille de résultats Excell semi bloquée  retard ++ rendu résultat aux participants  à améliorer +++ 2 nouveaux échantillons seront adressés aux participants en novembre-décembre 2014 (extension Lituanie, Pays Bas) Avenir ?? …Journée accréditation des CNR Novembre 2014…