RÉPUBLIQUE ALGÉRIENNE DÉMOCRATIQUE E POPULAIRE MINISTÈRE DE L’ENSEIGNEMENT SUPÉRIEURS ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE UNIVERSITÉ DJILALI LIABES –SIDI BEL ABBAS - Responsable de modules : Dr. Bousmaha Responsable de Tp : Dr. Kanoun Réaliser par : kadik razika Master 01 : microbiologie appliquée Modules : microbiologie appliquée en agro alimentaire Année universitaire : 2017/2018 Département de biologie

Plan de travail : Les streptocoque du groupe D  Caractère de culture  Caractère biochimique  Caractère antigénique  Sensibilité au antibiotique Caractère bactériologique de groupe d Caractère macroscopique et de culture Miliue de culture selectifs  Gélose colombia au sang  composition  mode d’emploi  Lecture  Milieu bea ‘ bille esculine azide’  Composition  Usage  Mode d’encemenssement  Lecture  Test de l’esculinase Bouillon à l’esculine  Technique  Résultat Conclusion Bibliographie

LES STREPTOCOQUE DU GROUPE D : Ce groupe est caractérisé par la présence de l'antigène D, qui n'est pas un polyoside mais qui est constitué par l'acide teichoïque de la paroi. Cet antigène D est également présent chez les entérocoques mais des études génétiques ont conduit à séparer le genre Enterococcus des streptocoques. Dans le groupe D des streptocoques, il reste S. bovis, S. equinus et S. alactolyticus, qui sont des commensaux du tube digestif de l'homme et des animaux. S. bovis est l'espèce la plus fréquemment isolée chez l'homme, elle est responsable d'infections localisées, de septicémies et d'endocardites.

Les streptocoque du groupe D comprennent les strptocoque bovis mais aussi les streptocoque faecalis. Ils sont habituellement présent à l’intérieur de l’organismes de l’homme, néonmoins les streptocoques du groupes d sont parfois à l’origine de septicémies et d’endocrite ( infection et inflammation de la paroi intérieur du cœur ) Peuvent également ètre responssable d’infection urinaire qui le plus souvent sont résistante aux antibiotique Caractère de culture : Les streptocoque du groupe d se cultivent sur des milieux ordinaires et même en présence de substance inhibitrice comme la bille. Leur croissance est possible à 45 °C ils ne se développent pas en milieu hypersalé En milieu liquide ils produisent un trouble homogène du bouillon Sur gélose du sang ils cultivent facilement en donnat de petite colonie le plus souvant non hémolytique mais parfois entoré d’une zone d’hémolyse alpha ou beta

Caractère biochimique : les streptocoque de groupe d sont comme tout les streptocoque dépourvus de catalase. Ils hydrolysent de l’esculine ( un glucoside extrait du marron d’inde ). Un milieu sélectif contenant bile et esculine permet un dépistage rapide d’autre caractère biochimique permet sont utile pour distinguer les différentes espèces, ( résistance au tellurite, fermentation du mannitol, du raffinose, du sorbitol ) Caractère antigénique : l’antigène d, mise en évidence par la technique de lancfieled par précipitation ou par coagglutination, caractérise le groupe Sensibilité au antibiotique : Les streptocoque du groupes d sont sensibles au antibiotiques mais, des résistance acquise pouvant etre observé, un antibiogramme est nécessaire pour détecter, les infections bénignes répondent bien aux betalactamines mais les infections sévères nécessitent une associations bétalactamine –aminosides

Caractère bactériologique des streptocoques de groupe d : Caractère microscopiques : Se sont des coques gram positifs de 0.5 à 01µm de diàmètre, présentant un groupement typique en diplocoque ‘ deux coque ‘ ou enchainette de longeur variable, immobiles, dépourvus de spores er rarement capsulé Caractère macroscopiques et de culture : Les streptocoques fécaux se sont des germes exigentes : ils demandent des milieux enrichis en nutriment Milieu de culture sélectifs : gélose columbia +ACN ‘ acide nalidixique et colimycine ) Gélose BEA ( bille esculine azide ) Gélose au sang Gélose slanets Gélose columbia au sang / ANC : est un milieu de culture sélectifs des bactérie à gram positifs permettant la culture et l’isolement d’une grande variète de microorganismes et plus particulièrement

des germes tres exigeante par additions de sang, d’agents sélectifs ou d’accélérateurs de croissance comme streptococcus compositions : Malange spécial de pepton 23 g – amidon 01 g – chlorure de soduim 5 g – agar 10 g – sang de moutons 50 ml – acide nalidixique 15 mg - clomicyne 15 mg – PH = 7.3 extrait de levure Mode d’emploi : -Faire fondre le milieu (s’il est préparé à l’avance). - Refroidir et maintenir à 44-47°C. - Ajouter les additifs nécessaires à la culture des bactéries recherchées (sang défibriné stérile de cheval ou de mouton, accélérateurs de croissance, agents sélectifs). -Bien homogénéiser. - Couler en boîtes de Petri stériles. - Laisser solidifier sur une surface froide. - Faire sécher en boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert. - Ensemencer l’inoculum.

Incuber à 37°C de 24 à 48 heures dans les conditions optimales de culture des germes ensemencés. Streptocoque du groupe D Zone d’eclaircissement nette autour de la colonie ( beta hémolyse ) Figure : observation macroscopiques de colonies de streptococcus bovis sur columbia au sang beta hémolyse : hémolyse complettes

Lecture sur gélose sang columbia : L'hémolyse étant la destruction des globules rouges :hémolyseglobules rouges colonies entourées d'un halo clair : béta-hémolyse (hémolyse totale); colonies entourées d'un halo verdâtre : alpha-hémolyse (hémolyse partielle) ; autres colonies :gamma-hémolyse (absence d'hémolyse). Milieu BEA ( bille esculine azide ) : permet l’isolements des streptoque et entérocoques du groupes D dans les produits pathologiques et les eaux Composition : Peptone 17 g – peptone pepsique de viande 3 g – extrait de levure 05 g – esculine 01 g – citrate de sodium 01 g – citrate de fer ammoniacal 0.5 g – bille de bœuf déshydratée 10 g – azide de sodium 0.25 g – chlorure de sodium 5 g – agar 13 g Ph = 7.1 Usage : l’azoture de sodium inhibe la croissance des bactérie gram – et tout les streptocoques sauf ceux du groupe d, et la bille de bœuf inhibe la croissance des bactéries gram+

L ’azide de sodium et la bille sélectionnent la culture des entérocoques et des streptocoques du groupe D Aspect de milieu avant l’utilisation : Aspect de milieu après l’utilisation :

Mode d’ensemmencement : le milieu présenter en boite pétrie destiné à un isolement Le milieu en tube est à beurrer avec une culture pure car il entre dans la galerie d’identification des coques gram + de culture facile Sélectivité /composition : C’est un milieu sélectifs des streptocoques peu exigeants Ils contients 02 inhibiteurs : -La bile de bœuf -L’azide de sodium -Résultats : pousse de petite colonies sur le milieu : streptocoque D -Colonies entourée d’un halo noir : esculine +

Enterococus faecalic sur milieu bile esculine Petite colonies translucides entourée d’un halo noire : esculine + Oreintation vers les str. D dont fait partie le genre : enterococcus Colonie d’aspect variable, sans noircissement du milieu : esculine – Oreintations vers d’autre germe différents de stre d Lecture :

Test de l’esculinase : Bouillon à l’esculine : L’esculine est un hétéroside formé d’un glucide complexe qui peut être dégradé par l’esculinase, les produits de la réactions sont le glucose et l’esculétine L’esculitine formé peut réagir avec les ions de fer 03 pour donner un précipité noire Techniques : ensemencer le bouillon à l’esculine avec 02 gouttes de la suspensions de la culture etudiers Incuber 01 à 05 joures à 30 ou 37° C Résultat : Coloration noires : production d’esculétine qui à réagie avec le fer -Hydrolyse de l’esculine -Absence de coloration noire : absence de productions de l’escultéine -Absence d’hydrolyse de l’esculine

Conclusion  Les streptocoque de groupe D est responsable est rarement responsable d’infection en gynécologie –obstétrique  Responsable d’infection de la gorge, les amygdalite, pharyngite  Associé a des grave complication telle que le rhumatisme articulaire aigue Le traitement :  Par les céphalosporine  et la pénicilline

Bibliographie :  file:///C:/Users/max/Documents/master%2001% 20microbiologie%20appliqu%C3%A9%20itma/mi crobiologie%20appliqu%C3%A9%20en%20agro %20alimentaire/Streptococcus.pdf file:///C:/Users/max/Documents/master%2001% 20microbiologie%20appliqu%C3%A9%20itma/mi crobiologie%20appliqu%C3%A9%20en%20agro %20alimentaire/Streptococcus.pdf  file:///C:/Users/max/Documents/master%2001% 20microbiologie%20appliqu%C3%A9%20itma/mi crobiologie%20appliqu%C3%A9%20en%20agro %20alimentaire/streptocoques.pdf file:///C:/Users/max/Documents/master%2001% 20microbiologie%20appliqu%C3%A9%20itma/mi crobiologie%20appliqu%C3%A9%20en%20agro %20alimentaire/streptocoques.pdf