L’Étude des Microorganismes Microbiologie L’Étude des Microorganismes

Définition d’un Microorganisme Dérivé du grec: Mikros, «petit» et Organismos, «organisme» Organisme microscopique qui comprend soit une seule cellule (unicellulaires) ou amas de cellules identiques (non différentiées) Ils comprennent les bactéries, les champignons, les algues, les virus, et les protozoaires

Cellule de plante et animale Micro_? Microscope optique Microscope électronique L’œil humain 0.1nm 1 nm 10 nm 100 nm 1 µm 10 µm 100 µm 1 mm 1 cm 0.1 m Atome Acide aminé Protéine Virus Chloroplaste Bactérie Cellule de plante et animale Fourmis Rotifère

_Organisme? Qui est vivant Qui peut vivre de façon indépendante Possède un métabolisme Qui peut vivre de façon indépendante N’est pas l’unité d’une organisation multicellulaire Parasite obligatoire?

Eubactéries Pathogènes qui peuvent causer une maladie Bactéries du sol, eau, air, tube digestif, etc. Peuvent utiliser l’oxygène ou pas Composés organiques et inorganiques utilisés comme source de carbone Composés organiques ou inorganiques utilisés comme source d’énergie Certaines peuvent se différentier ex. Bacillus et Clostridium - Sporogénèse

Travailler en Microbiologie La Technique Stérile

1re Étape Se laver les mains aussitôt que vous entrez dans le laboratoire Aide à prévenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre flore naturelle

2e Étape Faire la désinfection de votre espace de travail Aide à prévenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre environnement

Le Matériel Le matériel utilisé pour la culture et la manipulation de microorganismes doit être stérile et maintenu stérile Milieu de culture Éprouvettes Assiettes de Pétris Boucle d’ensemencement Etc.

3e Étape Utiliser la technique stérile pour tous les transferts de microorganismes Préviens la contamination de vos cultures Préviens la contamination de votre environnement Préviens la contamination de soi Toutes les bactéries sont des opportunistes

Transferts par la Technique Stérile Stériliser la boucle d’ensemencement au bruleur Le fil entier doit devenir rouge Ne pas déposer sur la table! Laisser refroidir Boucle d’ensemencement

Transferts par la Technique Stérile Retirer le capuchon avec le petit doigt de la main qui tient la boucle d’inoculation Ne pas déposer le capuchon sur la table! Enlever capuchon

Transferts par la Technique Stérile Chauffer l’ouverture du tube au bruleur Garder l’orientation du tube aussi prêt de l’horizontal que possible Garder l’ouverture du capuchon vers le bas Réchauffement de l’ouverture

Transferts par la Technique Stérile Utiliser la boucle stérile pour retirer l’inoculum Liquide de bouillons Solide de géloses Solide de pentes Retirer l’inoculum

Transferts par la Technique Stérile Chauffer l’ouverture du tube au bruleur encore une fois! Garder l’orientation du tube aussi prêt de l’horizontal que possible Réchauffement de l’ouverture

Transferts par la Technique Stérile Remettre le capuchon sur la culture pure Retourner le tube au support à éprouvettes Refermer le tube

Transferts par la Technique Stérile Inoculation Répéter les mêmes étapes pour inoculer le nouveau tube Retirer capuchon Chauffer l’ouverture Inoculer Fermer le tube

Inoculation d’une Gélose Garder la boucle à l’extrémité du fil d’ensemencement parallèle avec la surface de la gélose Faire des stries de gauche à droite à 12:00

Transferts par la Technique Stérile Restériliser la boucle d’ensemencement au bruleur Le fil entier doit devenir rouge Déposer sur la table si vous avez fini! Boucle d’ensemencement

Stries pour Colonies Simples

Microorganismes en Laboratoire Les Milieux de Croissance

Buts Croissance sous des conditions contrôlées Maintien Isolation de cultures pures Tests métaboliques

Types Liquides (bouillons) Permets la culture en suspension Distribution uniforme des éléments nutritifs, environnementaux et autres Permets la croissance de grands volumes

La Croissance en Bouillon Non-inoculé Limpide Turbide + sédiment Turbide Limpide + sédiment

Milieux Solides Agents de solidifications La gélatine L’agar Protéine Source animale Solide à des températures < 28oC L’agar Polysaccharide dérivé d’une algue Demeure solide à >37oC Fond à 100oC

Croissance sur Géloses d’Agar Croissance sur surface solide Croissance isolée Permets l’isolation de colonies simples Permets l’isolation de cultures pures Colonie simple

Les colonies sont originaires de cellules uniques de différentes bactéries puisqu’une colonie étalée de façon répétée génère des colonies identiques

Milieux Solides (suite) Croissance sur pente Croissance en surface et en profondeur Différentes disponibilités d’oxygène Entreposage à long terme

Milieux Solides (suite) Tube profond Milieu semi-solide Entreposage à long terme Faible disponibilité d’oxygène

La Microscopie Les Colorations

Les Colorants Cationique : Chargés positivement Coloration Positives Interagissent avec les groupements négatifs des membranes plasmiques Ex. Bleu de méthylène, cristal violet, safranine, vert de malachite Coloration Positives Anionique : Chargés négativement Interagissent avec le substrat de fond Noir de nigrosin, encre d’Inde Coloration Négatives

Colorations Positives B A Coloration du spécimen Coloration indépendante de l’espèce

Colorations Négatives Coloration de l’environnement de fond Coloration indépendante de l’espèce Grand bacille Petit bacille

Méthodes Coloration simple: Un seul agent de coloration Colorant cationique ou anionique Permet de déterminer la taille, la forme, et l’arrangement des cellules

Les Formes Cellulaires Coccus: Sphères Division sur 1,2 ou 3 plans Nombre de plans de division donne différents arrangements Arrangements typiques de différents genres bactériens

Les Cocci (Coccus) Plans de division Arrangements Diplococcus Streptococcus (4-20) Tétrade Staphylococcus

Les Formes Cellulaires (suite) Bacilles: Bâtonnets Division sur 1 plan seulement Arrangements typiques de différents genres bactériens

Les Bacilles Plans de division Arrangements Diplobacille Streptobacille

Compter les Microorganismes

Méthodes Comptes viables Nombre le plus probable Comptes directs

Comptes Viables Dilutions en séries de l’échantillon Étalement des dilutions sur milieu approprié Chaque colonie simple est originaire d’une unité formatrice de colonie (UFC) Le nombre de colonies équivaut à une approximation du nombre de bactéries vivantes dans l’échantillon

Dilutions pour Comptes Viables

63 UFC/0. 1mL de 10-5 630UFC/1. 0mL de 10-5 630UFC/ml X 105 = 6 63 UFC/0.1mL de 10-5 630UFC/1.0mL de 10-5 630UFC/ml X 105 = 6.3 x 107/ml dans l’échantillon original

= Avantages: Limites: Dénombre les microorganismes viables Peu distinguer différents microorganismes Limites: Pas de milieu universel Nécessite la croissance du microorganisme UFC une bactérie Ex. Un UFC de Streptococcus  un de E.coli = ?