Recherche de la Nitrate Réductase (NR) LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) 1. Intérêt Ce milieu liquide permet de mettre en évidence la présence d’une enzyme du métabolisme énergétique : la NITRATE RÉDUCTASE. 2. Composition Bouillon nutritif additionné de nitrate de sodium NaNO3 (1% = 1 g / 100 mL) 3. Principe Dans la respiration nitraté, les ions NITRATES NO3- sont réduits par la nitrate réductase : Soit en NITRITES NO2- : glucose produits oxydés + n e- NO3- + ……… + ……… NO2- + ……… nitrate réductase (stade nitrites) Soit en DIAZOTE N2 : glucose produits oxydés + n e- NO3- + ……… + ……… N2 + ……… nitrate réductase (stade diazote)
Recherche de la Nitrate Réductase (NR) LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) LE RÉACTIF DE GRIESS : Composition : Acide sulfanilique (nitrite 1) + a-naphtylamine (nitrite 2) Rôle : mise en évidence des ions nitrites NO2- : Réactif de Griess + ions nitrites NO2- COMPLEXE ROUGE LE ZINC (Zn) : Composition : Zinc pur (en poudre) Rôle : mise en évidence des ions nitrates NO3- : Le Zinc catalyse la réduction des ions nitrates NO3- (éventuellement présents) en ions nitrites NO2-. Ces ions nitrites NO2- peuvent alors réagir avec le réactif de Griess pour former un complexe rouge 4. Technique d’ensemencement (cf. Fiche Technique)
Recherche de la Nitrate Réductase (NR) LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) 5. Lecture (après avoir vérifié la présence de culture dans le tube) Observation : coloration rouge Interprétation : présence de NO2- issus de la réduction des NO3- Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade NO2-) NIT 1 NIT 2 Observation : pas de coloration rouge Interprétation : pas de présence de NO2- issus des NO3-. Les NO3- été réduits en N2 par la bactérie Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade N2) Réactif de Griess (nit1 + nit2) Zinc Observation : coloration rouge Interprétation : le Zn a réduit les NO3- encore présents en NO2- qui sont révélés par le réactif de Griess. => Pas de réduction de NO3- en N2 Conclusion : NITRATE REDUCTASE -