Procédure d'identification bactérienne Partie 1 : Préparation de la galerie miniaturisée

Materials avaliable Tube d’eau physiologique 5mL Eau distillée Huile Gélose Galerie API avec boite Pipette non stérile Pipettes stériles

1. Préparation de la suspension

Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen 1.1. Prélever une colonie sur la gélose avec une anse stérile. Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen

Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen 1.2. Faire une suspension avec ces bactéries. Introduire l’anse dans un tube d’eau physiologique stérile de 5 mL. Dans l’eau, frotter l’anse sur la paroi du tube, pour disperser les bactéries. Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen

S 1.3. Homogénéiser le tube par rotation manuelle, puis noter « S » sur le tube.

2. Préparation de la galerie API

2.1. Remplir le fond de la boite avec de l’eau distillée de façon à recouvrir l’ensemble des cavités . 2.2. Effectuer un mouvement de rotation du fond de boite pour bien répartir l’eau, puis aspirer l’excédent avec une pipette non stérile.

2.3. A l’aide d’une pince, placer la galerie dans le fond de la boite. 2.4. Poser le couvercle et identifier votre galerie : noter le numéro de votre poste sur la languette plastique du fond de boite.

2. Ensemencement de la galerie API

Introduction Cupule Microtube Exemples : Test non souligné Test souligné Test encadré

3.1. Ouvrir le couvercle et l’utiliser comme support pour poser la boite de galerie de façon inclinée.

Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen 3.2 Homogénéiser votre suspension par rotation puis prélever environ 2 mL de suspension « S » à l’aide d’une pipette stérile. S Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen

pour un test encadré (exemple CIT), remplir le microtube et la cupule. 3.3 Remplir chaque test avec la suspension en respectant les consignes suivantes : Pour un test souligné ou non souligné (exemple : ONPG ou ADH), remplir seulement le microtube, pour un test encadré (exemple CIT), remplir le microtube et la cupule. Cupule microtube

3.4 Avec une pipette stérile, ajouter de l’huile dans les cupules des 5 tests soulignés (ADH, LDC, ODC, H2S, URE). Cupule

3.5 Refermer le couvercle et incuber à 37°C pendant 16h minimum. Galerie API dans l’étuve

4. Lecture des résultats Le deuxième jour, après incubation, identifier votre bactérie (partie 2).