Avignon Transvir Jan Propriétés biochimiques d’eIF4E importantes pour le cycle viral ? Fixation à la coiffe ? Fixation à eIF4G ? Résidus de surface proches des mutations naturelles ? ►Mutagenèse dirigée de 14 aa d’eIF4E° (allèle de sensibilité)
Avignon Transvir Jan Propriétés biochimiques d’eIF4E importantes pour le cycle viral ? Fixation coiffe Acides aminés proches des mutations naturelles et exposés à la surface Fixation eIF4G
Avignon Transvir Jan Fonctionnalité des formes mutantes d’eIF4E ? Pour la traduction des ARNm ? –Tests biochimiques in vitro fixation coiffe, fixation eIF4G –Traduction cellulaire chez la levure Pour l’infection virale ? –Tests de complémentation fonctionnelle chez la laitue
Avignon Transvir Jan Rôle des acides aminés en surface ? ► Acide aminé F65 de surface, (zone interaction avec VPg ou autre protéine virale?) important pour le cycle viral 4E°F65AR82L 4E ° F65A R82L F65A R82L 4E° C Fixation Coiffe Complémentation traduction chez la levure Accumulation virale
Avignon Transvir Jan Mesure spectrométriques des interactions de eIF4E avec m7GTP et Vpg Méthodologie : analyse des perturbations de fluorescence d’eIF4E au contact d’un ligand.
Avignon Transvir Jan Dissociation constants of the surface mutants with their ligands. eIF4E formKd x 10 6 mol/L, m 7 GTP Kd x 10 6 mol/L, VPg-0 Ls-eIF4E°0,25 0,010,27 0,03 R82L0,41 0,031,28 0,07 F65A0,75 0,052,41 0,14
Avignon Transvir Jan Modélisation moléculaire des perturbations de surface induites par les mutants F65A VPg, Ka/10 Y113 F65 F112 m7GDP C A65 Y113 F112 m7GDP D A65 BA F65
Avignon Transvir Jan Complémentation fonctionnelle in planta Sylvie German-Retana Expression et isolement des protéines Bénédicte Doublet, Jocelyne Walter Interactions Sérologie, ELISA Geneviève Roudet-Tavert Spectroscopie, modélisation Thierry Michon Complémentation levure Cécile Lecampion, Christophe Robaglia Sylvie German-Retana Générique de fin Bientôt Transvir le retour ?