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Les 4èmes Journées Maghrébines dHématologie Les 9èmes Journées Nationales dHématologie 26,27 et 28 Avril 2007.

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1 Les 4èmes Journées Maghrébines dHématologie Les 9èmes Journées Nationales dHématologie 26,27 et 28 Avril 2007

2 INTRODUCTION (1) TG : Anomalie F elle Déficit quantitatif ou qualitatif des GP IIbIIIa (intégrines α IIb β 3 ) Autosomale récessive Cause de saignement clinique

3 INTRODUCTION (2) Exploration biologique : TS/TO Num. Plaq. MO Fonctions plaquettaires SDS PAGE (classification) BM Phénotype membranaire (CMF)

4 INTRODUCTION (3) Etude par CMF: Méthode simple et précise Les données recueillies: Le % des cellules qui expriment lAg Lintensité moyenne de fluorescence (IMF) IMF est proportionnelle à la quantité de sites antigéniques à la surface des plaquettes

5 Représentation schématique dune plaquette 7-glycogène 8-système canaliculaire 9-granule α 10-GP IbIXV: vWF 11-granule dense 12-GP IcIIa 1-GP IV: thrombospondine et collagène 2-GP IIbIIIa: fibrinogène et vWF 3-microtubules 4-lysosome 5-GP IaIIa: collagène 6-recepteur de thrombine

6 Complexe GPIIbIIIa: intégrine αIIbβ3

7 MATERIELS *Groupe témoin : 10 donneurs de sang 5 F / 5 H Sans ATCD de troubles de lhémostase Age moyen : 36,4 ans (25-51 ans) Taux moyen de plaquettes : 294, /µl * 13 patients: 5 F / 8 H Classés type I ou II par létude de la rétraction du caillot et/ou le SDS PAGE

8 N/P Sex e Age actuel Age et symptômes au Dg Type de Sd Hgique Bilan hémostase Fonctions plaquettaires Classifi -cation T.N H 8 1 an, gingivorragies gingivorragies, circoncision préparée Plq: /µl TS: 230/ V= 45µl TP:86%, TCA:31/30 Ag. nulle à lADP RC: nul I RC J.N F 29 3ans, épistaxis, gingivorragies hématurie, ménométrorragies, gingivorragies Plq: /µl TS: 430/ V: NP TP:80%, TCA: 32/32 Ag. Nle au Risto Ag. nulle à lADP et Adrénaline RC: bonne II RC L.N F 27 2 ans, épistaxis, gingivorragies, hgie. digest. épistaxis, gingivorragies, ménorragies Plq: /µl TS: 9 / V: NP TP:100%,TCA: 30/30 Ag. Nle au Risto Ag. nulle à lADP et Adrénaline RC: bonne I SDS PAGE K.I F 16 9 ans, épistaxis, gingivorragies gingivorragies, ménorragies, Hématome de lépaule Plq: /µl TS: 230/ V=38µl TP:96%,TCA: 27/30 Ag. Nle au Risto Ag. nulle à lADP II RC Z.T H ans, épistaxis, gingivorragies épistaxis, gingivorragies, circoncision sans préparation Plq: /µl TS: 4/ V: NP TP:74%,TCA: 30/30 CMF II Z.K H 29 4 ans, circoncision hémorragique épistaxis +, gingivorragies + Plq: /µl TS: NF TP:98%, TCA: 29/30 Ag. Nle au Risto Ag. nulle à lADP RC: NF II Caractéristiques des patients

9 B.R H 23 2 ans, épistaxis, gingivorragies, circoncision hémorragique épistaxis, hgie. digest. otorragie Plq: /µl TS: 530/ V: NP TP:100%, TCA:30/35 Ag. Nle au Risto Ag. nulle à lADP RC: bonne II RC N.H F 7 3ans, épistaxis épistaxis, gingivorragies, Plq: /µl TS: 3/ V: NP TP:100%,TCA: 23/26 Ag. Nle au Risto Ag. nulle à lADP I CMF I.RI H 18 3 ans, épistaxis, circoncision hémorragique épistaxis, gingivorragies, hgie. digest. Plq: /µl TS: 530(Duke) TP:100%,TCA: 30/30 Ag. Nle au Risto Ag. nulle à lADP et Adrénaline RC: nulle I RC I.RA F 12 5 ans, épistaxis, épistaxis, gingivorragies Plq: /µl TS: 2/ V=13µl TP:65%,TCA: 30/32 Ag. Nle au Risto Ag. nulle à lADP RC: nulle I RC G.S H ans, épistaxis, gingivorragies épistaxis, gingivorragies Plq: /µl TS: 230/ V: 16µl TP:50%,TCA: 29/30 Ag. Nle au Risto Ag. nulle à lADP II CMF M.W H 24 8 mois épistaxis épistaxis, gingivorragies, hgie. digest. Plq: /µl TS: 7 (Duke) TP:80%,TCA: 30/30 Ag. Nle au Risto Ag. nulle à lADP RC: bonne II SDS PAGE M.A H 23 3 mois, épistaxis, gingivorragies, circoncision hémorragique épistaxis Plq: /µl TS: 10/ V: NP TP:80%,TCA: 30/30 Ag. Nle au Risto Ag. nulle à lADP RC: bonne II RC

10 METHODES (1) Pour ces 2 groupes : Prélèvements : 2 tubes sur citrate de sodium 1 tube sur EDTA Agrégation plaquettaire : Chrono-Log 500VS Méthode optique Sur PRP ADP : 20µM Collagène : 5µg Acide arachidonique (AA) : 2mM Ristocétine : 1,25 µg

11 METHODES (2) CMF : Coulter EPICS XL CD41a-PE clone HIP8: GPIIb (α IIb integrin) BD. Bioscience CD61-PE clone SZ21: GPIIIa (β 3 integrin) Immunotech CD42b-FITC clone HIP1: GPIb BD. Bioscience Mouse IgG1-FITC et IgG1PE BD. Bioscience Pour chaque échantillon : IgG1-FITC/IgG1-PE CD42b-FITC/CD41a-PE CD42b-FITC/CD61-PE

12 METHODES (3) Sang avec EDTA PRP + GR Culot plaquettaire + PPP 2 lavages PBS + EDTA à 0,33% Resuspension dans le PBS à une cc de 10 5 /µl 50µl de plaquettes + 10 µl Ac Incubation 30 mn à lobscurité 200 µl de solution de lyse (10 mn) lavage PBS Resuspension PBS Lecture

13 RESULTATS (1) Agents inducteurs ADP 20µMCollagène 5µgAA 2mM Ristocétine 1,25µg Hauteur maximale : ΔTL Moyenne91,3892,3894,13 Agglutination + Écart-type11,3510,047,63 - Agrégation plaquettaire Groupe Témoin : Agents inducteurs ADP 20µMCollagène 5µgAA 2mM Ristocétine 1,25µg Hauteur maximale : ΔTL MoyenneAbce24,9549,32 Agglutination + Écart-type-8,279,91 - Patients : p<0,01

14 % des cellules Ag+ : patients classés Type I Étude en CMF N/PCD41a (% dexpression)CD61 (% dexpression) T.N H 0 % (Absence)98 % L.N F 33 %63 % N.H F 98 %0 % (Absence) I.RI H 55 %10 % I.RA F 58 %14 % RESULTATS (2)

15 Ac anti-GP CD42bCD41aCD61 Intensité moyenne de fluorescence IMF Moyenne31,209,78242,86 Écart-type3,241,0977,18 Étude en CMF Ac anti-GP CD42bCD41aCD61 Intensité moyenne de fluorescence IMF Moyenne29,233,6610,75 Écart-type11,392,0511,45 Groupe Témoin : Patients : RESULTATS (3) p<0,01 P=0,56 p<0,01

16 Patients : Étude en CMF Ac anti-GP CD42bCD41aCD61 Intensité moyenne de fluorescence IMF Type I35,221,821,79 Type II25,494,8016,35 IMF (% par rapport à la normale) Type I ,630,74 Type II ,136,71 RESULTATS (4) p<0,01 P=0,14

17 Contrôle

18 IMF: 2,41IMF: 38,3 TG type I

19 IMF: 1,28IMF: 43 TG type I

20

21 IMF: 4,49IMF: 28,4 TG type II

22 IMF: 37,2IMF: 31,7 TG type II

23

24 Pour le type I CD41a: 18,63% de la normale CD61: 0,74 % de la normale Surexpression de la GPIb:112,88% Pour le type II CD41a:49,13% de la normale CD61: 6,71 % de la normale expression de la GPIb:81,69% COMMENTAIRES (1)

25 Peu détudes sont réalisées dans ce sens: Etude indienne: Am.J.Hematol : 10 Patients: CD41 et CD61 6 Type I: absence de GP IIb IIIa 3 Type II: GP IIb IIIa de 7,72 à 20,40 % de la normale 1 Variant: GP IIb IIIa de 46 %, RC: 60 % COMMENTAIRES (2)

26 La détermination de lIMF quantifier le nombre de molécules à la surface des cellules Il ya des trousses permettant de quantifier les GP: nombre de sites antigéniques utilisation dune gamme de calibration (4 suspensions de billes de calibration correspondant chacune à un taux connu de sites antigéniques) Conversion de lIMF en nombre dAc fixés par cellule COMMENTAIRES (3)

27 Proposition dune classification pour la TG: Type I IMF (CD41a): 0 à 20 % de la normale et/ou IMF (CD61): 0 à 2 % de la normale Type II ou variants: IMF (CD41a) > 20 % de la normale et IMF (CD61) > 2 % de la normale CONCLUSION (1)

28 Notre étude doit être complétée Confirmation de nos résultats sur un effectif beaucoup plus important Etude par CMF de la capacité des plaquettes activées à lier le fibrinogène (Variants) CONCLUSION (2)


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