Une nouvelle méthode pour la détection du GHB ?

Présentation au sujet: "Une nouvelle méthode pour la détection du GHB ?"— Transcription de la présentation:

1 Une nouvelle méthode pour la détection du GHB ?
Jennifer Comte - Alain Waser École des sciences criminelles Université de Lausanne

2 Plan Description du GHB Les méthodes actuelles pour son dosage
Une nouvelle méthode Résultats et comparaison

3 Gamma-hydroxy-butyrate (GHB)
Crée en 1961 par le Pr. Laborite Pour ses propriétés anesthésiques Psychostimulant, substitut aux amphétamines et à l’ecstasy Dans la liste des stupéfiants depuis 2002 (appendice a, OStup-Swissmedic, RS )

4 Effets du GHB Amnésie des faits, impression de consentement
Effet min après absorption; durée de 1h à 24h (selon dosage) Dose létale 1700 mg / kg

5 Le GHB, LA drogue du violeur
Rapide, inodore, incolore, actif à faible dose Présent sous la forme de liquide, poudre, capsules ou en granulés Soluble en milieu aqueux ( incorporable dans une boisson) Désinhibition de la victime

6 Les précurseurs du GHB Rapidement converti en GHB in vivo

7 Utilisation des méthodes analytiques dans l’analyse du GHB
Vise à répondre à certaines questions: Ingestion de GHB ? Dose absorbée ? Il y a combien de temps ?

8 Contexte forensique Analyse difficile Rapidement métabolisé
Demi-vie : 20 à 30 minutes (en fonction de la dose) Détection possible dans la salive jusqu’à 4h après l’ingestion, dans le sang jusqu’à 8h, dans l’urine jusqu’à 12h Composé endogène (intra et inter variabilité non négligeable, facteurs biochimiques) Préservation de l’échantillon (production in vitro de GHB) Faible PM, haute polarité, instabilité thermique Transformation in vitro influencée par temps, température et pH

9 Méthodes actuelles Principalement GC Head-space – GC – FID
Dérivatisation nécessaire avant analyse Cyclisation du GHB en GBL (avec H2SO4 conc.) Head-space – GC – FID Echantillons positifs passent au GC – MS Perte de temps + faible analyse quantitative

10 Méthodes actuelles Électrophorèse capillaire Chromatographie liquide
Préparation simple (dilution) Limite de détection élevée (24 mg/L urine) Ne permet pas une analyse simultanée des précurseurs et du GHB Chromatographie liquide LC – UV LC – MS Mais, sensibilité limitée…

11 Méthodes actuelles Urine Sang Limites de quantification (en mg/L)
Inférieur à 10 Inférieur à 5 Prise d’essai pour analyse (en µL) 20 à 50 Limite de détection (en µg/mL) 0,5 à 2 Méthodes d’analyse GC/MS ; GC/FID ; CZE

12 Méthode proposées LC – MS / MS Instrumentation
Chromatographe Waters® Alliance 2795

13 Méthode proposée Conditions d’analyse
Colonne dC18 Atlantis® (3mm x 100mm, 5μm), phase inversée C18 sur silice. Rétention des composés polaires dans les phases mobiles aqueuses Maintenue à 35°C Élution isocratique (acide formique 0,1% : méthanol, 90 : 10) Débit 0,2 mL / min Injection de 10 μL Temps entre chaque injection 12 min

14 Méthode proposée Spectromètre de masse
Spectromètre de masse Tetra micro tandem (Waters) Ionisation positive Potentiel 3,5 kV, bloc à 120°C Gaz porteur : Azote à 350°C et 12 L / min

15 Méthode proposée

16 Méthode proposée

17 Méthode proposée Résultats avec des échantillons dilués d’urine
Les 3 composés sont différenciés grâce à cette méthode (tr GHB 4,5 min ; tr GBL 5,4 min) Obtenus par intégration de l’air sous chaque pic du chromatogramme effectué en mode MRM (Multiple Reaction Monitoring)

18 Méthode proposée Reproductivité sur une période de 24 heures
Rond 50 mg/L produit ajouté dans l’urine Carré 10 mg/L produit ajouté dans l’urine A) GHB B) GBL

19 Résultats et comparaisons
Avantage de la méthode LC – MS/MS : Plus rapide que GC – MS (12 min au lieu de 1h) Nécessite une seule opération pour quantifier simultanément le GHB et ses précurseurs Sensibilité élevée 1 mg/L (permet de différencier GHB endogène et exogène) Préparation simple (analyse d’un grand nombre d’échantillons en routine)

20 Références M. Wood et al., Simultaneous analysis of gamma-hydroxybutyric acid and its precursors in urine using liquid chromatography–tandem mass spectrometry, Journal of Chromatography A, 1056 (2004) : 83–90 K. Aebersold, GHB, Synthèse et transformation, Séminaire IPS, 2004

21 attention à votre verre…
Et surtout… Merci pour votre attention N’oubliez pas de faire attention à votre verre…