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Influence de la structure des chromosomes sur lexpression des gènes.

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1 Influence de la structure des chromosomes sur lexpression des gènes

2 Préparation et observation des chromosomes Chromosomes polyténiques Glandes salivaires de larves de troisième stade Chez la drosophile: 4 paires de chromosomes

3 Glande salivaire Corps gras Intestin moyen Caeca digestif Proventricule Oesophage Corps gras Ganglion ventral Hémisphères cérébraux Glandes salivaires Disques imaginaux Machoire Glandes salivaires

4 Noyaux de cellules de glandes salivaires non éclatés (X100)

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6 Bras droit du II Bras droit du III Bras gauche du III IV Bras gauche du II X Chromocentre Chromosomes polyténiques bien étalés (x400 coloration orcéine acétique)

7 X 3L 3R 2R 2L 4 Chromosomes polyténiques bien étalés (x400 vue en contraste de phase sans coloration)

8 W ( B6, C2) W W Carte de Bridges Observation microscope photonique Observation microscope electronique Observation de la région du gène white sur le chromosome X

9 Constriction (C) de la partie antérieure du chromosome X

10 Boucle de délétion Partie délétée Homologue

11 Appariement dune délétion de la région des gènes zeste/white avec un chromosome normal

12 Délétions de la région white du chromosome X Chromosome X non délété Chromosome X délétion wN Chromosome X délétion wpn 123 w

13 Inversion

14 Boucle dinversion sur le chromosome X

15 Exemples dinversion

16 Une inversion du chromosome X: In(I)w m4

17 Pour obtenir une bonne préparation de chromosomes de drosophile il faut : Cultiver les mouches à basse température (19°/20°C) Le milieu doit être enrichi par de la levure de boulangerie fraîche délayée dans un peu deau Une faible densité dindividu pour ensemencer la culture (5 à 10 couples) Prélever les larves avant leur immobilisation sur la paroi des flacons de culture, elles ne doivent pas présenter dappendices antérieurs plumeux.

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19 Choisir des larves femelles !!! Glandes salivaires Disque labial Disque prothoracique dorsal Disque clypeo-labral Disque patte T1 Disque œil antenne Disque patte T3 Lobe du cerveau Disque patte T2 Disque daile ovaire testicule Nid dhistoblaste dorsal antérieur Nid dhistoblaste dorsal postérieur Disque génital Tube de Malpighi Ilots de cellules précurseurs De lintestin adulte Disque dhaltère

20 La Dissection *Les larve de 3ème stade sont prélevées et déposées sur une lame de microscope dans du sérum physiologique. *La larve est observée sur fond noir au grossissement x10 dune loupe binoculaire *Avec des pinces fines immobiliser la larve en la pinçant au tiers antérieur et avec une deuxième pince tirer sur la machoire *Vous devez aboutir à la figure suivante

21 Dissection de la larve daprès :

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23 Glande salivaire Corps gras Intestin moyen Caeca digestif Proventricule Oesophage Corps gras Ganglion ventral Hémisphères cérébraux Glandes salivaires Disques imaginaux Machoire Dissection de la partie antérieure dune larve de 3 ème stade

24 *Les glandes salivaires se présentent sous la forme de deux tubes réunis en un canal unique au niveau de la mâchoire (voir photo). *Les glandes sont souvent recouvertes de corps gras. Glandes salivaires Corps gras

25 *Prélever les deux glandes en essayant au maximum déliminer le corps gras ceci sans léser les glandes, les transporter sur une autre lame dans de lacide acétique 45%, acide lactique, et laisser environ 30 secondes *Remplacer lacide acétique par la solution de coloration: orcéine/acide acétique/acide lactique (2g orcéine dans 50 ml acide acétique + 50ml acide lactique) *Laisser colorer environ au moins 15 minutes Couvrir la préparation avec une lamelle

26 Eclatement des noyaux des cellules des glandes salivaires Tapoter avec la pointe dun crayon de papier sur la lamelle à lendroit ou se trouve les glandes salivaires. Taper fortement plusieurs fois sur la lamelle avec lautre extrémité du crayon Mettre la préparation sur du papier filtre et presser très fortement avec le pouce sur la lamelle en faisant attention à ce quelle ne glisse pas Bras droit du II Bras droit du III Bras gauche du III IV Bras gauche du II X Chromocentre


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