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TD n° 3 LA MICROSCOPIE. La microscopie La microscopie est un ensemble de techniques permettant d'obtenir une image des structures biologiques. Le principe.

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1 TD n° 3 LA MICROSCOPIE

2 La microscopie La microscopie est un ensemble de techniques permettant d'obtenir une image des structures biologiques. Le principe est dans tous les cas le même : une onde est envoyée sur la préparation ou émise par la préparation. Aujourd'hui la microscopie est divisée en deux grands groupes, différents par la nature de la particule élémentaire impliquée : Le microscope optique Le microscope optique Le microscope électronique Le microscope électronique

3 1. La microscopie optique Le premier microscope fut sans doute fabriqué par Hans et Zacharias Janssen, deux fabricants de lentilles néerlandais, en 1590, mais le modèle final fut inventé par Antoine van Leeuwenhœk en 1664, puis fut amélioré par Christian Huygens. La microscopie optique regroupe: Le microscope à fond clair Le microscope à fond clair Le microscope à fond noir Le microscope à fond noir Le microscope à contraste de phase Le microscope à contraste de phase Le Microscope à fluorescence Le Microscope à fluorescence

4 1-1. La microscopie à fond clair Utilise des les rayons lumineux. Permet le grossissement de fois. Épaisseur de coupe ( 1-5 µm). Observation vitale et colorée.

5 Microscope à fond clair Protozoaire Bactérie

6 1-2. La microscopie en contraste de phase Cette technique permet d'observer les cellules sans préparation ni coloration dans leur milieu d'origine. Le principe est basé sur le fait que les structures biologiques sont transparentes (nabsorbe pas la lumière transmise). Nécessite un éclairage très précis dite éclairage de Koehler. A lobservation, on voit une image en noir et blanc où les différentes structures apparaissent bordées de blanc dun côté et de noir de lautre.

7 Culture cellulaire Le microscope à contraste de phase

8 1-3. La microscopie à fond noir Utilise les rayons lumineux dans un fond noir. Les zones de la préparation qui diffusent la lumière apparaissent lumineuses ( claires ) sur ce fond noir. Utilisé pour les éléments trop transparents. Les éléments observés apparaissent très brillants ( les flagelles, les fibres ). N'est pas utilisé pour l'observation d'objets colorés.

9 Bulles d'air dans l'eau Treponema pallidum Cryptococcus neoformans Le microscope à fond noir

10 1-4. La Microscopie à fluorescence Cette technique est utilisées pour certaines molécules qui émettent de la lumière quand on les éclaire avec une lumière de longueur d'onde supérieure. On éclaire l'échantillon avec une lumière ultraviolette, violette ou bleue. Consiste à utiliser une coloration fluorescente. Deux colorants très utilisés sont : la rhodamine (émet une lumière rouge) et la fluorescéine (lumière verte). Consiste à utiliser une coloration fluorescente. Deux colorants très utilisés sont : la rhodamine (émet une lumière rouge) et la fluorescéine (lumière verte).

11 Le microscope à fluorescence Legionella pneumophila Culture cellulaire

12 2. La microscopie électronique Il existe deux variantes de la microscopie électronique : Il existe deux variantes de la microscopie électronique : La microscopie à transmission La microscopie à transmission La microscopie à balayage La microscopie à balayage

13 2-1. La microscopie électronique à transmission Utilise comme rayonnement des électrons. Observation sous ultravide. Permet le grossissement de – fois. Les échantillons sont sous forme de lames extrêmement fines ( 50 nanomètre ). L'image obtenue peut être vue sur un écran. L'échantillon biologique apparaît plus clair que ce qui l'entoure, d'où le nom de coloration négative. L'échantillon apparaît blanc sur un fond sombre.

14 Bactériophage Le microscope électronique à transmission

15 2-2. La Microscopie électronique à balayage Utilise des électrons. Observation sous ultravide. Permet le grossissement de – fois. Fournis des images en 3D. Permet lobservation des coupes dune épaisseur de 300 – 600 A°.

16 Bifidobacterium adolescentis Le microscope électronique à balayage


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