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Quelles sont les méthodes pour étudier la migration cellulaire ? Théo Foutel--Rodier, ENS Cachan L3 Biologie cellulaire et moléculaire.

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1 Quelles sont les méthodes pour étudier la migration cellulaire ? Théo Foutel--Rodier, ENS Cachan L3 Biologie cellulaire et moléculaire

2 La migration cellulaire, un processus dune grande importance Migration de cellules tumorales Migration des cellules embryonnaires lors de la gastrulation

3 Visualisation de la migration cellulaire Colorants cellulaires vitaux : Fig : Marquage dun embryon de Xénope au stade Gastrula par le bleu de Nil Exemple de colorant vital : le bleu de Nil

4 Visualisation de la migration cellulaire (2) Microscopie à contraste de phase : Source :http://www.microsco pyu.com/articles/phas econtrast/phasemicros copy.html

5 Visualisation de la migration cellulaire (3) Migration dun tapis de cellules tumorales de glandes mammaires en microscopie à contraste de phase (20s entre les deux images) (source : ww.serimedis.inserm.fr/fr/asset/search/Microcinéma/page/1)

6 Visualisation de la migration cellulaire (4) Suivi à lor colloïdal Etude le lactivité migratoirede cellules HaCaT par suivi à lor colloïdal Source : Identification and Functional Characterization of the Muscarinic Receptor M3 in the Human Keratinocyte Cell Line HaCaT. Metzger M. · Just L. · Boss A. · Drews U. Cells Tissues Organs 2005;180:96–105

7 Visualisation de la migration cellulaire (5) Microscopie à epifluorescence : Fonctionnement dun microscope à épifluorescence

8 Visualisation de la migration cellulaire (6) Contraintes liées à lusage de molécules fluorescentes : -Risques de photoblanchiment et de perte du signal au bout dun certain nombre dobservation -Les flashs lumineux sont potentiellement dangereux pour les cellules 10 μm Observation de la migration dune cellule D. discoideum avec un marquage par la GFP au microscope à épifluorescence (durée totale : 120s)

9 Technique de blessure/cicatrisation Principe : -Observation de la migration des cellules après blessure dun tapis confluent. Avantages : -Facile à réaliser -Migration dans une direction préétablie -permet des mesures de cinétique Inconvénients : -dépendant de la forme de la blessure reproductibilité difficile -la MEC peut être endommagée -destruction de cellules lors de la blessure Migration des cellules suite à une blessure.

10 Exclusion zone assay Principe :

11 Exclusion zone assay (2) Avantages : Pas dendommagement des cellules autour de la zone de migration Choix possible de la MEC Possibilité de faire des test en 3D Mesures cinétiques possibles Limites/contraintes : Manipulation parfois compliquée Processus difficile à automatiser

12 Chambre de Boyden : mesure de la chimiotaxie/haptotaxie Source :http://www.millipore.com/antibodies/flx4/cancer_antibodies&tab1=4&tab2=2#tab2=2:tab1=4 Principe de fonctionnement dune chambre de Boyden

13 Chambre de Boyden (2) Avantages Permet lutilisation de la MEC adaptée Fonctionne pour des cellules libres ou adhérentes Migration dans une direction définie Limites/contraintes Protocole de mise en œuvre parfois long Faible nombre de cellules qui traversent Impossible de faire des mesures de cinétique

14 Chambre de microfluidique Principe des tests de microfluidique Source : Cell Migration and Invasion Assays as Tools for Drug Discovery, Keren I. Hulkower and Renee L. Herber Pharmaceutics 2011, 3, ; doi: /pharmaceutics

15 Avantages/Inconvénients Avantages : Besoin de peu de cellules et de composants Possibilité de choisir la MEC Utilisable pour des cellules libres ou adhérentes Inconvénients : Manipulation couteuse en temps et parfois difficile à réaliser Processus difficile à automatiser


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