B. Degano, ML Dalphin, P. Plesiat, J.C. Dalphin (CRCM Besançon) Etude PYOnever: caractéristiques des adultes atteints de mucoviscidose indemnes de colonisation pulmonaire par Pseudomonas aeruginosa R. Vongthilath, B. Richaud Thiriez, C. Dehillotte, L. Lemonnier, A. Guillien, B. Degano, ML Dalphin, P. Plesiat, J.C. Dalphin (CRCM Besançon) Réchana VONGTHILATH 12èmes Journées scientifiques de la mucoviscidose Paris, le 30/03/2017

Pseudomonas aeruginosa (P.a) Introduction CONTEXTE Mucoviscidose Mutation du gène codant pour la protéine CFTR; 70 % = F508del (homozygotes + hétérozygotes) Atteinte respiratoire quasi constante: principale cause de mortalité (85 %) Pseudomonas aeruginosa (P.a) Prévalence élevée dans la mucoviscidose : 70% des sujets Eradication difficile Infection chronique des voies aériennes inflammation chronique locale altération irréversible de la fonction respiratoire élévation de la morbidité et de la mortalité Bethesda, Cystic Fibrosis Foundation Patient Registry, 2002 Ciofu, Curr Opin Pulm Med. 2013 Bellis, Registre francais de la mucoviscidose, 2014 Gaspar, Eur J Clin Microbiol Infect Dis , 2013

Introduction Cinétique d’acquisition des germes selon les classes d'âge 40 % des sujets à l’âge adulte restent indemnes de colonisation pulmonaire par P.a ?

identifier des facteurs prédicteurs d’une non colonisation par P.a Introduction OBJECTIF Déterminer les caractéristiques cliniques, génétiques et microbiologiques des adultes atteints de mucoviscidose indemnes d’une colonisation par Pseudomonas aeruginosa (P.a), identifier des facteurs prédicteurs d’une non colonisation par P.a

Etude observationnelle, descriptive, transversale et rétrospective Mat & Méthodes Etude observationnelle, descriptive, transversale et rétrospective Étude nationale à partir du registre de l’association Vaincre la mucoviscidose Période d’étude: 01/2013 - 12/2014 Critères d’inclusion: Adultes atteints de mucoviscidose âgés de plus de 20 ans Critères d’exclusion: Absence d’ECBC en 2013 et 2014 Patients transplantés (tous types de greffe)

Comparaison de 2 groupes de sujets Mat & Méthodes Comparaison de 2 groupes de sujets Groupe « never »: n’ayant jamais eu de prélèvements respiratoires positifs à P.a Groupe « pyo »: ayant eu au moins un prélèvement respiratoire positif à P.a (intermittents et colonisés chroniques)

Présence de la double mutation F508del Mat & Méthodes Paramètres étudiés : Caractéristiques démographiques : âge (au 31/12/2014 et au diagnostic) , IMC et sexe Présence de la double mutation F508del Comorbidités associées (insuffisance pancréatique externe, diabète, ABPA) Fonction respiratoire (VEMS et CVF) Pneumothorax, hémoptysie Caractéristiques microbiologiques des prélèvements respiratoires Analyses statistiques : Analyses bi-variées: test du Chi-Deux & t de Student Modélisation multivariée avec les paramètres cliniques puis microbiologiques : régressions logistiques

Diagramme de flux des patients Résultats Etude à partir du registre national de Vaincre la Mucoviscidose (1) Patients pré-sélectionnés du Registre français de la mucoviscidose N = 3022 Patients exclus* N = 892 Patients évalués dans l'étude N = 2130 Patients « never » N = 303 (14%) Patients « pyo » N = 1827 (86%) * Transplantés + absence ECBC Diagramme de flux des patients

Analyse des facteurs cliniques et génétiques. Modélisation bivariée. Résultats Analyse des facteurs cliniques et génétiques. Modélisation bivariée.   "Never" "Pyo" P-value n = 303 n = 1827 Age au 31/12/14 (ans) 35 ± 13 31 + 10 < 0,001 Age au diagnostic (ans) 20 ± 19 7 ± 12 Hommes, n (%) 167 (55) 962 (53) 0,43 IMC kg/m2 23 ± 4 21 ± 3 Homozygote F508del, n (%) 50 (17) 812 (44) Insuffisance pancréatique, n (%) 165 (55) 1552 (85) Diabète, n (%) 14 (5) 348 (19) ABPA, n (%) 23 (8) 288 (16) CVF < 80% théorique 74 (25) 817 (45) VEMS < 80% théorique 133 (45) 1331 (74) Pneumothorax, n (%) 3 (1) 22 (1) 0,75 Hémoptysie, n (%) 183 (10) 0,19

Absence d’insuffisance pancréatique 1.81 [1.3-2.52] 0.0004 Résultats Analyse des facteurs cliniques et génétiques associés à la non colonisation par P.a. Modélisation multivariée. OR [IC 95%] P-value Absence d’ABPA 1.64 [1.01-2.66] 0.0476 Age au diagnostic 1.03 [1.02-1.04] <.0001 Absence de diabète 2.25 [1.21-4.18] 0.0100 Absence d’insuffisance pancréatique 1.81 [1.3-2.52] 0.0004 Absence double mutation F508del 2.17 [1.48-3.19] VEMS (%) ≥80% 3.03 [2.28-4.03]

Analyse des caractéristiques microbiologiques. Modélisation bivariée Résultats Analyse des caractéristiques microbiologiques. Modélisation bivariée "Never" "Pyo" P-value n = 303 (%) n = 1827 (%) H. influenzae 98 (32) 360 (20) < 0,001 S. pneumoniae 9 (3) 31 (2) 0,14 S.aureus 229 (76) 1313 (72) 0,18 S. maltophilia 24 (8) 305 (17) B. cepacia 11 (4) 81 (4) 0,53 Mycobactérie atypique 13 (4) 111 (6) 0,22 Aspergillus sp. 105 (35) 984 (54) A. xylosoxidans 191 (11) 0,001

OR [IC 95%] P-value A. xylosoxidans 0.39 [0.22-0.69] 0.0014 Résultats Analyses des caractéristiques microbiologiques associées à la non colonisation par P.a.: Modélisation multivariée. OR [IC 95%] P-value A. xylosoxidans 0.39 [0.22-0.69] 0.0014 Aspergillus sp 0.47 [0.36-0.6] <.0001 H. influenzae 2.18 [1.66-2.87] S. maltophilia 0.44 [0.28-0.69] 0.0003

Principaux résultats de l’etude PYOnever Discussion Principaux résultats de l’etude PYOnever Après analyse multivariée, les facteurs associés à une non colonisation par P.a (1) sont: l’âge tardif au diagnostic de la maladie : Lié à une forme pauci-symptomatique de la maladie? Lié à au dépistage néonatal devenu systématique que depuis 2002 ? Diminue le risque de transmission croisée à P.a au sein des CRCM ? l’absence d’une ABPA Association retrouvée entre durée de colonisation par P.a et sensibilisation à Aspergillus fumigatus (OR par année 1.50; p <0,001) Ritz, Eur J Pediatr, 2005 Effets des glucocorticoides sur la diminution de l’internalisation de P.a par les cellules épithéliales bronchiques (via interleukine 6) Hussain, Exp Lung Res, 2015

l’absence de double mutation F508del: Discussion Les facteurs associés à une non colonisation par P.a (2) l’absence de double mutation F508del: Risque de colonisation par P.a déterminé par le génotype du CFTR Kubesh, The Lancet. 1993; Levy, Pediatr Pulmonol. 2008 Hypothèses physio-pathogéniques favorisant la colonisation par P.a: données expérimentales Concentration élevée en NaCl à la surface alvéolaire chez le malade inhibant la synthèse de défensines Joris, Am Rev Respir Dis. 1993 Rôle des récepteurs des cellules épithéliales mucoviscidosiques fixant le P.a (défaut de sialylation du glycocalyx) Saiman, J Clin Invest. 1993 Mécanisme d’endocytose de la bactérie par la protéine CFTR Pier, Proc Natl Acad Sci U S A . 2000

une non colonisation par P.a (3) : Discussion Facteurs associés à une non colonisation par P.a (3) : Une fonction respiratoire préservée L’absence d’un diabète L’absence d’insuffisance pancréatique Factors associated with FEV1 decline in cystic fibrosis. Kerem, Eur Respir J, 2014

H.influenzae : rôle pathogène controversé. Discussion Présence de H.influenzae et absence A.xylososidans, aspergillus, S.maltophilia dans les prélèvements respiratoires sont associés aux « never ». H.influenzae : rôle pathogène controversé. Absence d’association avec une diminution du VEMS Navarro, Eur Respir J.2001 Responsable d’inflammation et lésions tissulaires Rosenfield, Pediatr.Pulmono.2001 Germes opportunistes: Marqueurs d’une altération de la fonction respiratoire Ou facteurs causals d’une colonisation par P.a? Hauser, Clinical Microbiology review, 2011

Implication d’un facteur géographique ? Discussion Implication d’un facteur géographique ? Répartition géographique de la prévalence des sujets Never (%) / Pyo (%) par région 19%/81% 9%/91% 15%/85% 18%/82% 1,7% /12,1% 13%/87% 15%/85% 1,4% /8% 14%/86%

Discussion Les limites de l’étude Méthode de saisie de données Biais d’information mais à priori non différentiel Type de colonisation par P.a (intermittente, chronique ou free) indéterminé: groupe « pyo » très hétérogène Co-colonisation pulmonaire fréquente par différentes espèces difficulté d’établir un rôle déterminant pour chacun des germes

Prévalence des « never » chez les adultes mucoviscidosiques Conclusion Prévalence des « never » chez les adultes mucoviscidosiques en France: 14 % Sujets « never » jamais explorés jusqu’à présent Identification de facteurs prédictifs à une non colonisation pulmonaire par P.a Implication facteur génétique indépendamment des autres facteurs: absence de la double mutation F508del Age de diagnostic tardif associé au « never » rôle des facteurs environnementaux dans l’absence de colonisation par P.a ? Prise en charge possible des facteurs de risque modifiables

Perspectives : MERCI aux équipes: Vaincre la Mucoviscidose Conclusion Perspectives : Etude étiologique longitudinale Vérification de nos résultats sur la population pédiatrique Etude de l’implication des autres mutations du gène CF MERCI aux équipes: Vaincre la Mucoviscidose CRCM pédiatrie et adulte du CHRU de Besançon Service de microbiologie du CHRU de Besançon CRCM de l’hôpital Cochin MERCI pour votre attention