REPARTITION DES ANOMALIES CYTOGENETIQUES PAR FISH DANS LES SYNDROMES LYMPHOPROLIFERATIFS CHRONIQUES (SLPC) HORS LLC A BLIDA S Taoussi, S Oukid, Y Bouchakor, H. Brahimi, MT Abad Service Hématologie, EHS ELCC CAC Faculté de Médecine, Université Blida I

Introduction Les syndromes lymphoprolifératifs chroniques (SLPC) regroupent de nombreuses entités anatomo-cliniques dont le diagnostic est en majorité assuré par: - L’analyse cytologique particulièrement rigoureuse (classification FAB) - Une étude histologique avec immuno-marquage sur biopsie ganglionnaire - Depuis quelques années, l’immuno-marquage est un examen incontournable pour la caractérisation des lymphomes à petites cellules leucémisés. Dans certains cas, l’étude cytogénétique peut apporter des arguments décisifs pour le diagnostic de certitude.

Introduction Dans le lymphome du manteau, il est nécessaire de mettre en évidence la t(11;14)(q13;q32)(CCND1/Ig H) qui est caractéristique du MCL (95%) . Dans le MCL, la région Ig VH sur 14q32 est juxtaposée à la région CCND1 (BCL1/PRAD1) = hyper expression de protéine cycline D1, détectée par: Immuno-histochimie, CMF sur suspension cellulaire et PCR. La t (11 ; 14) (CCND1 ; IGH) est révélée par : Cytogénétique conventionnelle (caryotype) dans 65% des cas. FISH dans la quasi-totalité des cas. La FISH est la technique de choix pour la mettre en évidence. Dans moins de 5% des cas il s’agit de formes variantes qui ne présentent pas la t (11 ; 14), n’expriment pas la cycline D1 mais peuvent exprimer la cycline D2 ou D3.

Forme blastoide du MCL En plus de la t(11;14), des anomalies surajoutées peuvent être mises en évidence : - Anomalies de nombres : -Y, -9,-13, -18, +3, +12. - Anomalies de structures : - gains sur 3q, 8q, 12q - pertes sur 1p, 6q, 9p, 10q, 11q (del ATM), 13q, 17p13 (del P53).

Dans le lymphome folliculaire : La t(14;18)(q32;q21), (IgH/BCL2) est retrouvée dans 85% des cas. Anomalie non spécifique (LNH à grande cellules B de novo, ZML, MCL, HDK). Cette translocation juxtapose l’oncogène BCL2 (18q21) et la région codant pour Ig VH (14q32) = une surexpression du gène BCL2 et de la protéine BCL2 à l’origine d’un défaut d’ apoptose cellulaire. L’hyper expression de la protéine BCL2 peut être détectée par immuno-histochimie, CMF et PCR. La t(14;18) est mise en évidence par: - Caryotype dans 70% des cas. - FISH dans presque tous les cas. Les anomalies surajoutées rapportées surtout en cas de transformation : - +X, +7, +12, +18 - délétions: P53, 6q, 10q, 13q, 1p. - duplications : 2p, 1q, 12q - réarrangements : BCL6, Myc.

LNH de la Zone marginale Aucune anomalie n’est spécifique. ZML splénique : surtout une trisomie du chr 3 complète ou incomplète et une délétion ou une translocation du 7q32. Lymphome Villeux Anomalies cytogénétiques non spécifiques et fréquentes . Ont été décrites des anomalies du 7q, 2p11 et iso 17q. ZML ganglionnaire : +3, +7, +12, +18, i(17q), del 13q14, amplification du 1q, 3q, 7p. Expression de la cycline D1 dans 15% des cas.

Leucémie prolymphocytaire B Del 17p13 (P53) : 50 %, del 13q14 dans 27%, del (6q) Anomalies de structure du chromosome 1 t(6;12)(q15;p13)] CCND1 dans 20 %, trisomie 12 inhabituelle Leucémie prolymphocytaire T Le caryotype est très souvent complexe et instable, surtout i(8)(q10), t(8;8)(p23;q11), +8, del(8p) 60 à 90 % Sezary Pas d’anomalies cytogénétiques récurrentes, caryotype souvent complexe (40 à 70 %) : - 9, -10, + 18. - Anomalies de structure : 1p32-36, 1q, 2q, 6q22-27, 8q22, 9, 10q23-26, 11, 12q21-22, 17p11.2-13, 19p13.

But de notre travail Contribuer au diagnostic de certitude de certaines variétés de lymphomes à petites cellules leucémisés. Individualiser les anomalies cytogénétiques spécifiques de certaines variété de SLPC en vue d’adapter une stratégie thérapeutique adéquate.

Matériels et Méthodes 40 cas de SLPC hors LLC ont fait l’objet d’une étude cytogénétique par FISH. L’étude est faite sur prélèvement de sang périphérique sur héparine lithium, une culture de 72h avec des facteurs mitogènes (PMA+ PHAc), actuellement (DSP30 ; IL2).

Matériels et Méthodes Les sondes utilisées : - CEP12 - 13q14/13qter - P53 (17p13) /ATM (11q22) - 6q21/SE 6 - t (11 ; 14)(q13,q32)/ (CCND1 ; IGH) - t (14 ; 18)(q32,q21)/ (IgH ; BCL2). La lecture sur microscope à fluorescence est effectuée sur au moins 20 mitoses et 200 noyaux.

Résultats Il s’agit de : 26 hommes et 14 femmes : sex ratio = 1,9 Age moyen = 60 ans (28-77). Score de Matutes = Score 3 dans 4 cas (10%) le reste (85%) score à 1 et 2 -- Deux cas sont des proliférations T.

Résultats Sur cette cohorte la cytologie et la CMF avaient évoqué : - 02 cas de LNH folliculaire (FL) - 20 cas de LNH du manteau (MCL) - 03 cas LNH lympho-plasmocytaire - 02 cas de leucémie à pro lymphocytes. - 02 cas de LNH de Sezary. - 01 cas LNH villeux - 04 cas de LNH ZML - 06 cas de LNH à petites cellules.

Lymphome du Manteau Dans notre série, sur 20 cas de LNH du manteau initialement évoqués par l’étude cytologique et la cytometrie , la t (11 ; 14) confirmant ce diagnostic a été retrouvée dans 11 cas. Anomalies cytogénétiques les plus fréquemment associées : - del ATM : 3 cas (27%) - une del P53 - une duplication du locus ATM - une del 13q14.

Le lymphome folliculaire Dans notre série les 2 LNH FL évoqués ont été confirmés par la présence de la t(14;18) : - Associée à une trisomie 12 dans un cas - Dans l’autre cas en transformation, cette translocation a impliqué 4 partenaires : t(14; 18, v1, v2). - Absence de del P53 et de del ATM.

Lymphome de la zone marginale (ZML) Dans notre série : - Deux trisomies 12 - CCND1 recherché sur les 4 cas revenu négatif. - Les anomalies du chr 3 et du chr 7 n’ont pas été recherchées.

Autres anomalies La délétion P53 est retrouvée dans : - Un cas de Leucémie à prolymphocytes - 3 cas de LNH MCL à CCND1 négatif - Un cas de LNH lympho-plasmocytaire. La délétion ATM a été retrouvée dans : - Un cas de LNH Villeux - 4 cas de LNH MCL - Un cas de LNH à petites cellules.

Autres anomalies Une monosomie 6 et une duplication du locus ATM dans un cas de MCL. La trisomie 12 dans : - 3 cas de LNH à petites cellules - 2 cas de MCL à CCND1 négatif. La del 13q14 retrouvée dans : un LNH à petites cellules 5 MCL initialement évoqués mais à CCND1 négatif un MCL CCND1 positif un lymphome lympho-plasmocytaire

Discussion Les anomalies ciblées retrouvées sont typiques dans deux pathologies : le lymphome du manteau et le lymphome folliculaire et constituent des arguments diagnostiques puissants pour ces deux entités. La del P53 et la del ATM sont des anomalies importantes à rechercher vue leur implication pronostique . Les autres anomalies sans spécificité particulière peuvent être retrouvées dans les lymphomes non hodgkiniens de bas grade.

Conclusion Le diagnostic de SLPC hors LLC repose sur des arguments, cytologiques, histologiques et immunophénotypique. Parfois ces examens sont insuffisants pour affirmer la variété de SLPC. L’étude par FISH est alors un outil complémentaire très précieux pour préciser le diagnostic de certitude de certaines variétés de SLPC; cela est surtout vrai pour le MCL et le FL. En effet pour le LNH MCL, si le marqueur CCND1 n’est pas intégré dans le panel de la CMF, la FISH est alors un outil indispensable pour étayer le diagnostic. Il en est de même pour le LNH Folliculaire si le Bcl2 n’est pas intégré dans le panel de la CMF.