REGULATION PARACRINE DANS L’OVAIRE

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1 REGULATION PARACRINE DANS L’OVAIRE
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2 LES DEUX GRANDES FONCTIONS DE L’OVAIRE
FOLLICULOGENESE STEROIDOGENESE DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

3 REGULATION DE LA FOLLICULOGENESE
ENDOCRINE : FSH croissance folliculaire Hyperplasie des cellules de la granulosa Développement de l’antrum DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

4 REGULATION DE LA FOLLICULOGENESE
ENDOCRINE : FSH maturation fonctionnelle -Acquisition et maintien de la stéroïdogénèse (stimulation aromatase, STAr, CytP450scc) -Sensibilité à la LH (R des cellules granulosa) DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

5 REGULATION DE LA FOLLICULOGENESE
PARACRINE : FACTEURS DE CROISSANCE VEGF SYSTÈME IGF amplification de l’action des hormones gonadotropes DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

6 REGULATION DE LA FOLLICULOGENESE
PARACRINE : OESTRADIOL -Stimule la prolifération et la survie de la granulosa -Sensibilité du follicule à la FSH DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

7 REGULATION DE LA FOLLICULOGENESE
PARACRINE : SIGNAUX OVOCYTAIRES BMP : Bone Morphogenetic Protein Famille des TGFβ DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

8 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki* Department of Reproductive Medicine, University of California San Diego School of Medicine, La Jolla, CA Edited by R. Michael Roberts, University of Missouri, Columbia, MO, June 2006 DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

9 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Brebis mutation hétérozygote BMP 15 : ovulation, fertilité mutation homozygote BMP 15 : infertilité Galloway. et al. (2000) Nat. Genet. Hanrahan (2004) Biol. Reprod. Homme mutation de BMP 15 : infertilité Di Pasquale, (2004) Am. J. Hum. Genet. DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

10 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Souris BMP 15-null folliculogénèse et formation de corps jaunes anomalies de l’ovulation : follicules de taille = 2/3 taille normale diminution des embryons viables Yan, C., et al. (2001) Mol. Endocrinol.. DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

11 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Souris BMP 15-null BMP mature absent mais présence de pré-protéines Hypothèses : BMP 15 mature impliqué dans l’ovulation produit juste avant l’ovulation BMP 15 mature produit à différentes étapes en fonction des espèces DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

12 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki BUT DE L’ÉTUDE Etudier les mécanismes d’action du BMP 15 chez la souris QUESTIONS 1- BMP 15 mature produit pendant l’ovulation? 2- BMP 15 impliqué dans l’expansion du cumulus? 3- Mécanismes moléculaires impliquant BMP 15 dans cette expansion? DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

13 1- Production de BMP 15 chez la souris
A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki RESULTATS 1- Production de BMP 15 chez la souris DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

14 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Western Blot de lysats d’ovocytes Ac Anti-BMP 15 P48 : 48 heures d’incubation PMSG H2 : 48 H PMSG + 2 H hCG H5 : 48 H PMSG + 5 H hCG H9 : 48 H PMSG + 9 H hCG DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

15 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Western Blot de lysats d’ovocytes Ac Anti-BMP 15 saturés en BMP 15 P48 : 48 heures d’incubation PMSG H2 : 48 H PMSG + 2 H hCG H5 : 48 H PMSG + 5 H hCG H9 : 48 H PMSG + 9 H hCG DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

16 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Ovulation des souris après 48 H PMSG et 12 H hCG Détection de BMP 15 après 48 H PMSG et 9 H hCG BMP 15 MATURE PRODUIT JUSTE AVANT L’OVULATION DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

17 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Western Blot de lysats d’ovocytes Ac Anti-BMP 15 P48 : 48 heures d’incubation PMSG P56 : 56 H PMSG P60 : 60 H PMSG P63 : 63 H PMSG DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

18 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Ovulation des souris après 63 H PMSG seul stimulant le pic de LH endogène Détection de BMP 15 après 60 H PMSG BMP 15 MATURE PRODUIT JUSTE AVANT L’OVULATION SOUS L’EFFET DU PIC DE LH ENDOGENE OU EXOGENE DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

19 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki PCR quantitative ARNm BMP 15 (100 ovocytes/groupe) P48 : 48 heures d’incubation PMSG H2 : 48 H PMSG + 2 H hCG H5 : 48 H PMSG + 5 H hCG H9 : 48 H PMSG + 9 H hCG DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

20 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki L’AUGMENTATION DE BMP 15 MATURE JUSTE AVANT L’OVULATION N’EST PAS CORRELÉE A UNE AUGMENTATION D’ARNm DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

21 2- Rôle de BMP 15 dans l’expansion du cumulus
A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki RESULTATS 2- Rôle de BMP 15 dans l’expansion du cumulus DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

22 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Complexe ovocyte-cumulus de souris immatures après incubation de doses croissantes de FSH ou BMP 15 humain recombinant (pendant 20h à 37°C) DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

23 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki EXPANSION CUMULUS SOUS L’EFFET DE LA FSH ET DU BMP 15 HUMAIN cumulus expansion index = expansion 1,5 FSH = 3 ng/ml BMP 15 = 10 ng/ml pas de d’extension supplémentaire pour doses>30 ng/ml FSH + BMP 15 : pas d’effet supplémentaire que FSH ou BMP 15 seuls DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

24 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Expansion du complexe cumulus-ovocyte de souris immature après 20 heures de culture avec des lysats d’ovocytes de souris traitées par PMSG seul pendant 48 h ou PMSG 48 h et hCG 9h DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

25 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki EXPANSION CUMULUS SOUS L’EFFET D’UN FACTEUR STIMULANT SECRETE APRES LE PIC DE LH/hCG DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

26 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Expansion du complexe cumulus-ovocyte de souris immature après 20 heures de culture avec des lysats d’ovocytes de souris traitées par PMSG 48 h et hCG 9h Avec addition d’IgG non spécifiques (contrôle), de doses croissantes d’Ac anti BMP 15 ou de follistatine Follistatine bloque la bioactivité des protéines de la famille TGFβ DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

27 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki L’EXPANSION DU CUMULUS EST SOUS L’EFFET DU BMP 15 MATURE ENDOGENE DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

28 3- Mécanismes d’action de BMP 15 dans l’expansion du cumulus
A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki RESULTATS 3- Mécanismes d’action de BMP 15 dans l’expansion du cumulus DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

29 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki PCR quantitative d’ARNm de gènes régulant l’ovulation culture lysats de complexe cumulus-ovocytes de souris traitées par 48 h PMSG avec ou sans BMP 15 DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

30 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki BMP 15 AUGMENTE L’EXPRESSION D’ARNm DE GENES REGULANT L’EXPANSION DU CUMULUS EGF-like growth factors : amphiregulin, betacellilin, epiregulin DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

31 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Mesure de l’expansion du cumulus en présence ou non de BMP 15 ou EGF associés ou non à un inhibiteur sélectif du signal des récepteurs EGF. DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

32 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki EGF – R SONT ESSENTIELS AU BMP 15 POUR STIMULER L’EXPANSION DU CUMULUS DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

33 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki DISCUSSION DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

34 1- Production de BMP 15 chez la souris
A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki DISCUSSION 1- Production de BMP 15 chez la souris DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

35 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki - BMP 15 mature chez souris est produit juste avant l’ovulation sous l’effet du pic de LH. Chez la Brebis, arrêt précoce de la folliculogénèse. BMP 15 mature probablement produit et nécessaire à un stade plus précoce - BMP 15 immature non détécté. Forme labile probablement immédiatement transformée en BMP 15 mature ou dégradée. déjà décrit pour BMP 3,4,6,7 DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

36 2- Rôle de BMP 15 dans l’expansion du cumulus
A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki DISCUSSION 2- Rôle de BMP 15 dans l’expansion du cumulus DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

37 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki - BMP 15 humain recombinant en absence de FSH entraîne la croissance du cumulus Non observé pour GDF 9 qui nécessite la présence de FSH - rôle de BMP 15 endogène dans l’expansion du cumulus En contradiction avec les données de la littérature Su, Y. Q. (2004) Dev. Biol. Gui, L.-M (2005) Biol. Reprod. Mais souris traitées par PMSG pendant 44 à 48 h sans hCG ->pas de BMP 15 DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

38 3- Mécanismes d’action de BMP 15 dans l’expansion du cumulus
A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki DISCUSSION 3- Mécanismes d’action de BMP 15 dans l’expansion du cumulus DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

39 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Pic de LH granulosa EGF like growth factors COX-2 HAS-2 TGS-6 Ptx-3 Prostaglandines Hyaluronan Expansion et stabilité cumulus Hyaluronan binding protein DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

40 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki Pic de LH ovocyte BMP 15 Cumulus EGF like growth factors COX-2 HAS-2 TGS-6 Ptx-3 Prostaglandines Hyaluronan Expansion et stabilité cumulus Hyaluronan binding protein DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

41 A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP-15 in the mouse Osamu Yoshino, Heather E. McMahon, Shweta Sharma, and Shunichi Shimasaki CONCLUSIONS BMP 15 mature est impliqué présent après pic de LH et impliqué dans la croissance du cumulus chez la souris. Chez la Brebis et chez l’Homme, BMP 15 est impliqué dans la folliculogénèse et probablement fonctionnel dans sa forme mature à un stade plus précoce. Mono-ovulation/poly-ovulation DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

42 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi ShimasakiDepartment of Reproductive Medicine, University of California, San Diego, School of Medicine, La Jolla, California Endocrinology, june 2008 DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

43 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi Différences de structure de BMP 15 entre espèces Préprotéine : 60 % homologie Homme/Souris Protéine mature : 77 % homologie Homme /souris Différence de structure pourraient participer aux différences fonctionnelles interespèces DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

44 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi HOMME pré-protéine BMP BMP 15 mature In vitro SOURIS pré-protéine BMP pas de forme mature Hashimoto O, Moore RK, Shimasaki S 2005 Posttranslational processing of mouse and human BMP-15: potential implication in the determination of ovulation quota. Proc Natl Acad Sci USA 102:5426–5431 DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

45 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi Construction chimères Homme-Souris Seule recombinaison permettant synthèse de BMP 15 matures : Human Proregion + Mouse mature protein region Hashimoto O, Moore RK, Shimasaki S 2005 Posttranslational processing of mouse and human BMP-15: potential implication in the determination of ovulation quota. Proc Natl Acad Sci USA 102:5426–5431 DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

46 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi BUT DE L’ETUDE Comprendre le fonctionnement de BMP 15 chez les espèces mono-ovulatoires, présent et impliqué dès les stades précoces de la folliculogénèse par l’étude de souris transgéniques DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

47 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 1- PRODUCTION DE SOURIS TRANSGENIQUES hhmBMP-15flox Plasmide construit avec vecteur pCALNL5 DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

48 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 1- PRODUCTION DE SOURIS TRANSGENIQUES hhmBMP-15flox Micro-injection su transgène dans embryons de souris 36 souris 3 souris, 2 mâles et 1 femelle, transgéniques, confirmées par PCR Génotypage de plus de 100 descendants de chacune des 3 souris 1 mâle transmettant le transgène dans la lignée germinale Mâle croisé avec femelle sauvage DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

49 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 2- SELECTION DE SOURIS EXPRIMANT LE TRANSGENE BMP-15 EXCLUSIVEMENT DANS LES OVOCYTES Croisement des femelles transgéniques BMP 15 et des mâles transgéniques ZP3-Cre ZP3-Cre exprime Cre-recombinase sous contrôle du promoteur ZP3. Ces souris transgéniques expriment Cre-recombinase exclusivement dans les ovocytes au stade primaire de la folliculogénèse Lewandoski M, Wassarman KM, Martin GR.1997 Curr Biol DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

50 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 3- PRODUCTION DE BMP 15 MATURE WESTERN immunoblot de lysat ovarien de souris de 8 semaines Ac anti-BMP 15 humain 3 bandes entre 16 et 18 KDa Différents niveaux de glycosylation Niveau de BMP 15 mature 4,9 plus important chez souris transgéniques DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

51 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 3- PRODUCTION DE BMP 15 MATURE WESTERN immunoblot de lysat ovarien Ac Anti-FLAG Détection des 3 bandes uniquement chez les souris transgéniques DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

52 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 3- PRODUCTION DE BMP 15 MATURE Immunohistochimie confirmant la production de BMP 15 par les ovocytes après détection par des Ac anti-BMP 15 humain, majorée chez las souris transgéniques DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

53 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 4- ACCELERATION DU DEVELOPPEMENT FOLLICULAIRE CHEZ LES FEMELLES TRANSGENIQUES, souris immatures de 25 jours DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

54 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 4- ACCELERATION DU DEVELOPPEMENT FOLLICULAIRE CHEZ LES FEMELLES TRANSGENIQUES, souris matures de 5 mois DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

55 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 4- ACCELERATION DU DEVELOPPEMENT FOLLICULAIRE CHEZ LES FEMELLES TRANSGENIQUES, souris immatures de 25 jours Index mitotique des cellules de la granulosa dans les follicules secondaires DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

56 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 4- ACCELERATION DU DEVELOPPEMENT FOLLICULAIRE CHEZ LES FEMELLES TRANSGENIQUES, souris immatures de 25 jours PCR quantitative R-FSH Cellules de la granulosa Pas de différence signification dans les dosages de FSH sur serum DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

57 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 5- ANALYSE DE LA FERTILITE DES FEMELLES TRANSGENIQUES Pas de différence dans la fertilité entre souris sauvages et transgéniques Allongement des cycles chez souris transgéniques plus âgées? DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

58 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 6- AUGMENTATION DE L’ATRESIE FOLLICULAIRE DES FEMELLES TRANSGENIQUES, souris matures de 5 mois Les follicules secondaires en excès entrent probablement en atrésie avant d’atteindre le stade pré-ovulatoire chez les souris transgéniques DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

59 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 7- DIESTRUS ALLONGES CHEZ LES FEMELLES TRANSGENIQUES 15 souris sauvages et 15 souris transgéniques Examens quotidiens pendant 3 cycles à 10 mois puis bimensuels jusqu’à 20 mois DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

60 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 7- SURVENUE PRECOCE DIESTRUS CONSTANTE CHEZ LES FEMELLES TRANSGENIQUES Diestrus constante : 36 jours consécutifs avec examens répétés pendant les mois suivants DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

61 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi 7- SURVENUE PRECOCE DIESTRUS CONSTANTE DES FEMELLES TRANSGENIQUES B,C : OVAIRES DE TAILLES REDUITES, KYSTES ET KYSTES HEMORRAGIQUES chez souris transgéniques DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

62 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi DISCUSSION Augmentation du stock de follicules secondaires chez les souris transgéniques immatures, non liés à une augmentation des follicules primordiaux. BMP 15 stimule la multiplication cellulaire des cellules de la granulosa DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

63 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi DISCUSSION Développement folliculaire accéléré chez les souris transgéniques, malgré diminution des récepteurs à la FSH. Augmentation du nombre de follicules secondaires mais également du nombre de follicules en atrésie, sans modification significative de la fertilité. Probable atrésie des follicules secondaires en excès avant le stade pré-ovulatoire. DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

64 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi DISCUSSION Dès 12 mois, allongement du diestrus chez les souris transgéniques. Survenue précoce du diestrus constant chez les souris transgéniques. Augmentation de l’atrésie folliculaire et diminution plus rapide du stock folliculaire chez les souris transgéniques. DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

65 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi DISCUSSION Moutons mutés hétérozygotes BMP 15 Diminution des mitoses des cellules de la granulosa Augmentation de la sensibilité à la FSH permettant de maintenir une maturation folliculaire et une ovulation. Souris transgéniques Augmentation des mitoses des cellules de la granulosa Diminution de la sensibilité à la FSH Quota d’ovulation non lié à BMP 15. BMP 15 n’explique pas la nature mono ou poly-ovulatoire des espèces. DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

66 Oocyte-Specific Overexpression of Mouse Bone Morphogenetic Protein-15 Leads to Accelerated Folliculogenesis and an Early Onset of Acyclicity in Transgenic Mice Heather E. McMahon, Osamu Hashimoto, Pamela L. Mellon, and Shunichi CONCLUSIONS 2 fonctions de BMP 15 mise en évidence in vivo : - stimulation de la prolifération cellulaire des cellules de la granulosa - diminution des l’expression des récepteurs à la FSH Chez la souris, l’absence de BMP 15 mature lors des stades précoces de la folliculogénèse préviendrait un déclin prématuré du pool de follicules ovariens. DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7

67 CONCLUSIONS Rôle essentiel du BMP 15 dans la régulation de la folliculogénèse Différences importantes de structure et de rôle entre l’Homme et la souris. Régulation polyfactorielle Autres signaux ovocytaires, GDF-9 DELPHINE HEQUET M2 Reproduction et Développement UE3 Paris 7