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TD 1 les ckis et la différenciation des entérocytes.

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2 TD 1 les ckis et la différenciation des entérocytes

3 Rappel Migration Différenciation

4 Rôle important de la Matrice extracellulaire dans la différenciation intestinale. Mais elle nest certainement pas le seul stimulus de différenciation Autre hypothèse: le processus est dirigé par une horloge moléculaire intracellulaire.

5 p27(Kip1) is an inducer of intestinal epithelial cell differentiation. Quaroni A, Tian JQ, Seth P, Ap Rhys C. Section of Physiology, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USA Am J Physiol Cell Physiol Oct;279(4):C

6 balance prolifération différenciation

7 Cyclin-dependent kinase inhibitors (CKI) Il en existe plusieurs: p27 Kip1 (p27), p21 Cip1/WAF1 (p21), p16… Corrélation entre lexpression de cki et le degré de différenciation. – surexpression de p21 dans les cellules intestinales différenciées – p27 dans les kératynocytes: laugmentation de lexpression de p27 est concomittant avec la différenciation. Un oligonucléotide antisens de p27 inhibe la différenciation. – Rôle de p27 dans la différenciation des cellules intestinales?

8 Méthode Utilisation de la lignée HIEC6: cellules issues de cryptes Surexpression par infection de: Vecteur seulAdnull p16Adp16 p21Adp21 p27Adp27 Analyse de la prolifération, des différentes phases du cycle cellulaire, de la morphologie des cellules, de lexpression de marqueurs de différenciation

9 Contrôle de lexpression des ckis Les cellules sont infectées à différentes concentrations dadenovirus. Après 24 heures analyse des différentes protéines par Western blot

10 Contrôle de lexpression des ckis Analyse par immunocytochimie de lexpression des ckis

11 Conclusions Linfection des cellules par ladenovirus + cDNA exogène induit lexpression des ckis La surexpression de P21 entraine lexpression de P27 (P27 sous le contrôle de p21?)

12 Ckis et prolifération Incorporation de thymidine tritiée 24 heures après infection

13 Utilisation de la BrdU Brdu (bromodeoxyuridine) Ac X-Brdu Ac X-Ac X-Brdu

14 Ckis et prolifération B: effet dose de ladenovirusC étude cinétique sur la prolifération

15 Conclusions P16, P21 et P27 inhibent la prolifération de façon dose-dépendante. Plus defficacité pour P27, p21 puis P16 Leffet de P27 est irréversible

16 Surexpression des cki et cycle cellulaire Pic G1-G0 Pic S Intensité de fluorescence Contenu en ADN Nombre de cellules

17 Cki et cycle cellulaire

18 Conclusions P16, P21 et P27 augmentent la quantité des cellules en phase G0/G1et diminue le nombre de cellules en phase S

19 Cki et morphologie

20 Conclusions Lexpression des CKI entraîne: p16: cellules polygonales mais pas de microvillosité p27: cellules polygonales avec présence de nombreuses microvillosités. p21: 20-40% des cellules sont polygonales avec des microvillosités. p27 induit une différenciation morphologique

21 cki et expression de la DPP IV Protéine ARNm Activité enzymatique

22 cki et expression de la DPP IV

23 Conclusions p27et dans une moindre mesure p21 induisent lexpression de la DPPIV fonctionnelle. Localisation a la membrane plasmique.

24 cki et expression de lAPN

25

26 Conclusions p27et dans une moindre mesure p21 induisent lexpression de lAPN.

27 En conclusion

28 Autres systèmes cellulaires... Premier article montrant le rôle de p27 dans la différenciation des cellules epithéliales. Et en 2009? Même rôle dans les cellules épithéliales bronchiques

29 Comment peut on aller plus loin dans l'étude? In vivo…Il existe dautres facteurs que les CKI. Souris KO pour P21… lintestin est normal. Cancer: dans les carcinomes la P27 est souvent sous-exprimée. Cette sous expression est associée à une augmentation de lagressivité des cancers. Mêmes résultats pour prostate et estomac.

30 Pourquoi la surexpression de P21 induit la différenciation


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