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Somite. Prolifération Test dincorporation du BrdU Marquage de la Phosphohistone H3 La prolifération nest pas affectée Comptage accumulation due à un défaut.

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1 Somite

2 Prolifération Test dincorporation du BrdU Marquage de la Phosphohistone H3 La prolifération nest pas affectée Comptage accumulation due à un défaut de migration

3 Apoptose Marquage Caspase 3 activée E10.5 Lèvre ventrale DM

4 Apoptose E12.5 Cellules redirigées ventralement

5 Expression des marqueurs myogéniques primordiaux Pax3 Met Lbx

6 Expression de Pax3 Hybridation in situ E10.5 Caudal: correct Perturbations en allant vers le pôle antérieur Pas de délamination dans le limb bud

7 Expression de Pax3 Niveau: bourgeon membre postérieur Niveau: bourgeon membre antérieur Pas de délamination + aggravation du phénotype Perte expression dans les lèvres dorsales et ventrales

8 Pax3 est régulé par Six1-4 dans la lèvre ventrale du dermomyotome Bourgeon membre postérieur Perte expression Dorsale et Ventrale Expression réduite à lèvre caudale

9 Expression de Met Caudal OK Défauts en allant vers le pôle antérieur Perte de lexpression épaxiale Expression ectodermique

10 Régulation de Met par Six1 et 4, indépendamment de Pax3 Faible expression Post dans le limb bud alors que Pax3 toujours présent Expression réduite dans le dermomyotome Pas dexpression dans le Ant limb bud

11 Expression de Lbx1 Perte dexpression : - chorde hypoglossale - bourgeon de membre antérieur

12 Lbx1 Expression faible: - quelques somites au niveau du bourgeon de membre postérieur

13 Bandshift Test de retard sur gel Mise en évidence des interactions ADN-protéines

14 Bandshift Interaction entre Six1 et le promoteur de lbx1 Interaction entre Six1, Eya1 et le promoteur de lbx1 Régulation directe?

15 Expression de Pax7 Peu de différences Baisse dexpression à hauteur du bourgeon de membre antérieur

16 Localisation de la protéine Pax3 E10.5, dermomyotome Immunofluorescence Région caudale Co-expression Six1 et Pax3 Phénotype normal

17 Localisation de la protéine Pax3 Bourgeon membre postérieur, somites caudales Co-expression dans la région qui ne migre pas

18 Localisation de la protéine Pax3 Membre postérieur, somites rostrales Les protéines ne co- localisent plus Perte dexpression de Pax3 antérieurement

19 Localisation de la protéine Pax3 Membre antérieur Mauvaise localisation de Pax3, désorganisation, pas dentrée dans le limb bud

20 Perte didentité des cellules sans Pax3 et migration anormale Laminine: cellules à destinée musculaire En présence de Pax3, expression de laminine normale Myotome organisé En absence de Pax3, myotome désorganisé

21 Gènes MRFs Myf5, MyoD1, Myogénine, Mrf4: gènes de détermination myogénique = facteurs de transcription de la famille Mrf Exprimés dans le myotome, avant la différenciation des cellules

22 Gènes MRFs Diminution expression Myf5 Diminution expression myogénine

23 Gènes MRFs Diminution expression MyoD Disparition Mrf4 Les protéines Six régulent les gènes mrfs

24 Six et FGFs Baisse dexpression de Fgf6 et du récepteur à Fgf4

25 Six et FGFs Scleraxis sous le contrôle de Fgf Formation des vertèbres et des cotes Baisse dexpression signalling de Fgf est altéré.

26 Conclusion/Discussion Protéines Six contrôlent: – Pax3 dans la lèvre ventrale –la délamination et la migration des précurseurs myogéniques hypaxiaux En absence de Pax3, perte didentité cellulaire, mauvaise migration et la mort pas apoptose Semblent contrôler -directement Met, indépendamment de Pax3 - directement Lbx1 Absence de Six entraîne une baisse dexpression: - des Mrfs - des Fgfs Fonctions partagées entre Six1 et Six4 Somites rostrales plus affectées que caudales différents pathways myogéniques

27 Conclusion/Discussion


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