Synthèse et évaluation de modulateurs de la protéine CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator) Soutenance de thèse de Benjamin Boucherle.

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1 Synthèse et évaluation de modulateurs de la protéine CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator) Soutenance de thèse de Benjamin Boucherle Le 9 décembre 2008 Directeur de thèse : Pr. Jean-Luc DECOUT Projet financé par l’association « Vaincre La Mucoviscidose »

2 Plan Contexte scientifique Objectifs du travail Résultats
Travaux antérieurs La protéine CFTR Modulation de la protéine CFTR Objectifs du travail Résultats Poursuite de l’évaluation biologique des premiers composés actifs Recherche de nouveaux composés actifs Recherche du pharmacophore Pharmacomodulation Conclusions et perspectives

3 Plan Contexte scientifique Objectifs du travail Résultats
Travaux antérieurs La protéine CFTR Modulation de la protéine CFTR Objectifs du travail Résultats Poursuite de l’évaluation biologique des premiers composés actifs Recherche de nouveaux composés actifs Recherche du pharmacophore Pharmacomodulation Conclusions et perspectives

4 Mise en évidence d’une nouvelle réaction
Contexte Scientifique Travaux antérieurs Mise en évidence d’une nouvelle réaction entre : Méthylglyoxal (MG) 1 α-aminoazahétérocycle 2 Adduits de deux molécules de MG sur l’hétérocycle Thèse C. Routaboul 2003 C. Routaboul et al. Chem. Comm. 2002 1

5 Mise en évidence d’une nouvelle réaction
Contexte Scientifique Travaux antérieurs Mise en évidence d’une nouvelle réaction Accès à une nouvelle famille d’hétérocycles (Famille I) Réaction stéréosélective et régiosélective Obtention de deux mélanges racémiques majoritaire a et minoritaire b Dans la suite de la présentation, un seul énantiomère du mélange racémique sera représenté 1

6 Réactivité en milieu basique
Contexte Scientifique Travaux antérieurs Réactivité en milieu basique Adduits MG-2-aminopyridine 3 Formation : 2-aminopyridine de départ 5 Nouveau composé 4 (famille II) issu de trois réactions en une seule étape : Décarboxylation Déshydratation Oxydation 81 % 2

7 Activité biologique des nouveaux composés
Contexte Scientifique Travaux antérieurs Activité biologique des nouveaux composés Parenté structurale entre Le composé de la famille II 4 Et un modulateur connu (MPB-07) de la protéine CFTR Evaluation de l’effet des composés des familles I et II sur la protéine CFTR 3

8 Plan Contexte scientifique Objectifs du travail Résultats
Travaux antérieurs La protéine CFTR Modulation de la protéine CFTR Objectifs du travail Résultats Poursuite de l’évaluation biologique des premiers composés actifs Recherche de nouveaux composés actifs Recherche du pharmacophore Pharmacomodulation Conclusions et perspectives

9 Contexte Scientifique
La protéine CFTR Structure Super famille des transporteurs ABC (ATP Binding Cassettes) qui comprend également P-gP et MDR Canal Chlorure 1480 acides aminés Répartis en deux séquences reliées par un domaine régulateur (R) comportant chacune : 6 domaines transmembranaires (MSD) composant le canal ionique 1 domaine de fixation aux nucléotides (NBD) 4

10 Localisation, Fonctions et Régulation
Contexte Scientifique La protéine CFTR Localisation, Fonctions et Régulation Localisée sur la face apicale des épithéliums polarisés Fonctions Canal Chlorure Grâce à l’énergie provenant de l’hydrolyse de l’ATP sur les NBD Régulation d’autres canaux ioniques Régulation en fonction du taux de phosphorylation du domaine R dépendant de la concentration en AMPc 5

11 Pathologies impliquant la protéine CFTR
Contexte Scientifique La protéine CFTR Pathologies impliquant la protéine CFTR Diarrhées sécrétoires (Choléra) Suractivation de la protéine CFTR Mucoviscidose (Cystic Fibrosis) Inhibition ou abolition de la fonction canal Cl- 6

12 La mucoviscidose Nécessité d’un traitement curatif
Contexte Scientifique La protéine CFTR La mucoviscidose Maladie génétique autosomique récessive La plus fréquente dans les populations d’origine caucasienne Mutations du gène codant pour la protéine CFTR (plus de 1500 mutations décrites) Symptômes Nombreux et variables, principalement pulmonaires et digestifs Peu ou pas reliés au génotype Traitements actuels uniquement symptomatiques et préventifs Nécessité d’un traitement curatif 7

13 Les différentes classes de mucoviscidose
Contexte Scientifique La protéine CFTR Les différentes classes de mucoviscidose Six classes Principale mutation : ΔF508 ou delF508 Synthèse d’une protéine non adressée à la membrane Classe II 8

14 Perspectives thérapeutiques de la mucoviscidose
Contexte Scientifique La protéine CFTR Perspectives thérapeutiques de la mucoviscidose Thérapie génique Restauration du transport ionique par activation de transporteurs autres que CFTR Thérapie protéique « Through-reading » : classe I Correcteurs : classe II Activateurs de CFTR : classes II (en association avec un correcteur) III, IV et V 9

15 Plan Contexte scientifique Objectifs du travail Résultats
Travaux antérieurs La protéine CFTR Modulation de la protéine CFTR Objectifs du travail Résultats Poursuite de l’évaluation biologique des premiers composés actifs Recherche de nouveaux composés actifs Recherche du pharmacophore Pharmacomodulation Conclusions et perspectives

16 Modulation de la protéine CFTR
Contexte Scientifique Les modulateurs de CFTR Modulation de la protéine CFTR Type de modulation : Action sur le système de régulation de CFTR (Kinases, AMPc) Action directe sur la protéine Activateurs/Potentiateurs : traitement potentiel de la mucoviscidose Activateurs : actifs sans préactivation de CFTR par le système AMPc Potentiateurs : nécessitent une préactivation pour être actifs (Phosphorylation du domaine R) Inhibiteurs (outils pharmacologiques) 10

17 Les activateurs / potentiateurs de CFTR
Contexte Scientifique Les modulateurs de CFTR Les activateurs / potentiateurs de CFTR Très nombreux, de classes chimiques très variées La plupart sont moyennement actifs (activation à des concentrations autour du µM) et non sélectifs Un essai clinique en cours : VX-770 Phase II Sur patients portant la mutation G551D (Classe III) L’activation de CFTR est une perspective thérapeutique prometteuse 11

18 Les inhibiteurs de CFTR
Contexte Scientifique Les modulateurs de CFTR Les inhibiteurs de CFTR Très nombreux, de classes chimiques très variées La plupart sont moyennement actifs (inhibition à des concentrations autour du µM) et non sélectifs Le plus intéressant en tant qu’outil pour l’étude de CFTR est CFTRinh-172 Sélectif et assez actif IC50 (CHO-wt) = 1 µM Mais peu soluble dans l’eau et inactif sur tissus Ma et al. J Clin. Invest. 2002 Nécessité de développer d’autres inhibiteurs de CFTR 12

19 Les modulateurs développés au laboratoire
Contexte Scientifique Les modulateurs de CFTR Les modulateurs développés au laboratoire Collaboration avec l’équipe : Physiopathologie et Pharmacologie des Canaux ionique (UMR 6187), Pr F. Becq Evaluation par le test d’efflux d’ions iodures radioactifs Mesure de la vitesse de sortie des ions iodures en présence des composés à tester Mise en évidence d’un potentiateur GPact-11a : EC50 (CHO-wt) = 2,1 µM Composé de la famille I Adduit MG-9-propyladénine 13

20 Les modulateurs développés au laboratoire
Contexte Scientifique Les modulateurs de CFTR Les modulateurs développés au laboratoire Mise en évidence de plusieurs inhibiteurs dont : Le composé 4 de la famille II : IC50 (CHO-wt) = 5,1 nM GPinh-5a : IC50 (CHO-wt) = 71 pM Composé de la famille I Adduit MG-2’-désoxyadénosine 14

21 Plan Contexte scientifique Objectifs du travail Résultats
Travaux antérieurs La protéine CFTR Modulation de la protéine CFTR Objectifs du travail Résultats Poursuite de l’évaluation biologique des premiers composés actifs Recherche de nouveaux composés actifs Recherche du pharmacophore Pharmacomodulation Conclusions et perspectives

22 Objectifs Poursuite des études biologiques sur les composés actifs
Identification du pharmacophore Pharmacomodulation des composés actifs 15

23 Plan Contexte scientifique Objectifs du travail Résultats
Travaux antérieurs La protéine CFTR Modulation de la protéine CFTR Objectifs du travail Résultats Poursuite de l’évaluation biologique des premiers composés actifs Recherche de nouveaux composés actifs Recherche du pharmacophore Pharmacomodulation Conclusions et perspectives

24 Poursuite de l’évaluation biologique
Résultats Evaluations Biologiques Poursuite de l’évaluation biologique Validation du potentiel thérapeutique des modulateurs ou de leur intérêt en tant qu’outils Nécessité d’obtention de quantités importantes Synthèses à plus grande échelle Optimisation des purifications Changement de phases de chromatographie 16

25 Evaluations Biologiques
Résultats Evaluations Biologiques Toxicité GPact-11a 4 GPinh-5a Cellulaire (Test au MTT) Pas de toxicité des molécules testées Génétique (Test d’Ames) Pas de toxicité des molécules testées sauf 4 composé de la famille II Induction d’enzymes hépatiques (Cyt P450) Pas d’induction par les molécules testées GPinh-15ab GPinh-5a GPinh-8ab GPact-11a 4 17

26 Evaluations Biologiques
Résultats Evaluations Biologiques Sélectivité Autre transporteur ABC : MRP1 Pas d’effet des molécules testées Canaux non-chlorures : les canaux cardiaques potassiques (Herg), sodiques et calciques D’autres canaux chlorures : les canaux calcium- et volume-activés Pas d’effet de GPinh-5a GPinh-15ab GPinh-5a GPinh-8ab GPact-11a 4 GPinh-5a GPact-11a 4 GPinh-5a 18

27 Influence de la stéréochimie
Résultats Evaluations Biologiques Influence de la stéréochimie Principaux inhibiteurs GPinh-15 GPinh-8 GPinh-5 GPinh-18 GPinh-17 Composés de la famille I IC50 sur cellules CHO-wt déterminées par le test d’efflux d’ions iodures Mélange a:b (proportions déterminées par spectrométrie de RMN) Mélange majoritaire a Mélange minoritaire b GPinh-17 4,4 µM (75:25) 1,8 µM 4,9 µM GPinh-18 5,7 µM (60:40) 4,2 µM 2,7 µM GPinh-5 Non Déterminée 71 pM 194 pM GPinh-15 2,2 nM (60:40) 2,1 nM 1,6 nM GPinh-8 2,5 nM (60:40) 3,0 nM C. Routaboul et al. JPET 2007 19

28 Evaluation sur différentes mutations de CFTR
Résultats Evaluations Biologiques Evaluation sur différentes mutations de CFTR Composés (proportions a:b déterminées par RMN) Mutations de CFTR (et type cellulaire) Expression endogène Expression hétérologue wt (Calu 3) ΔF508 (CF15) (CHO) G551D (CHO) G1349D (Cos7) Inhibiteurs IC50 (déterminées par le test d’efflux des ions iodures) Glibenclamide 11,7 µM 11,8 µM 14,7 µM 7,9 µM 9,0 µM CFTRinh-172 ND 1,2 µM GPinh-5a 93,3 pM 67,3 pM 71,0 pM 43,1 nM 72,3 pM GPinh-8ab (60:40) 15,7 nM 8,7 nM 2,5 nM 190 nM 79,4 nM GPinh-15ab (60:40) 2,3 nM 6,3 nM 3,4 nM 154 nM 7,0 nM GPinh-17ab (75:25) 11,2 µM 7,0 µM 4,4 µM 35,5 µM GPinh-18ab (60:40) 11,9 µM 6,0 µM 5,7 µM 110 µM 2,9 µM Potentiateur EC50 (déterminées par le test d’efflux des ions iodures) GPact-11a 2,1 µM inactif C. Routaboul et al. JPET 2007 20

29 Evaluation sur différentes mutations de CFTR
Résultats Evaluations Biologiques Evaluation sur différentes mutations de CFTR Composés (proportions a:b déterminées par RMN) Mutations de CFTR (et type cellulaire) Expression endogène Expression hétérologue wt (Calu 3) ΔF508 (CF15) (CHO) G551D (CHO) G1349D (Cos7) Inhibiteurs IC50 (déterminées par le test d’efflux des ions iodures) Glibenclamide 11,7 µM 11,8 µM 14,7 µM 7,9 µM 9,0 µM CFTRinh-172 ND 1,2 µM GPinh-5a 93,3 pM 67,3 pM 71,0 pM 43,1 nM 72,3 pM GPinh-8ab (60:40) 15,7 nM 8,7 nM 2,5 nM 190 nM 79,4 nM GPinh-15ab (60:40) 2,3 nM 6,3 nM 3,4 nM 154 nM 7,0 nM GPinh-17ab (75:25) 11,2 µM 7,0 µM 4,4 µM 35,5 µM GPinh-18ab (60:40) 11,9 µM 6,0 µM 5,7 µM 110 µM 2,9 µM Potentiateur EC50 (déterminées par le test d’efflux des ions iodures) GPact-11a 2,1 µM inactif C. Routaboul et al. JPET 2007 20

30 Evaluation sur différentes mutations de CFTR
Résultats Evaluations Biologiques Evaluation sur différentes mutations de CFTR Composés (proportions a:b déterminées par RMN) Mutations de CFTR (et type cellulaire) Expression endogène Expression hétérologue wt (Calu 3) ΔF508 (CF15) (CHO) G551D (CHO) G1349D (Cos7) Inhibiteurs IC50 (déterminées par le test d’efflux des ions iodures) Glibenclamide 11,7 µM 11,8 µM 14,7 µM 7,9 µM 9,0 µM CFTRinh-172 ND 1,2 µM GPinh-5a 93,3 pM 67,3 pM 71,0 pM 43,1 nM 72,3 pM GPinh-8ab (60:40) 15,7 nM 8,7 nM 2,5 nM 190 nM 79,4 nM GPinh-15ab (60:40) 2,3 nM 6,3 nM 3,4 nM 154 nM 7,0 nM GPinh-17ab (75:25) 11,2 µM 7,0 µM 4,4 µM 35,5 µM GPinh-18ab (60:40) 11,9 µM 6,0 µM 5,7 µM 110 µM 2,9 µM Potentiateur EC50 (déterminées par le test d’efflux des ions iodures) GPact-11a 2,1 µM inactif C. Routaboul et al. JPET 2007 20

31 Evaluation sur différentes mutations de CFTR
Résultats Evaluations Biologiques Evaluation sur différentes mutations de CFTR Composés (proportions a:b déterminées par RMN) Mutations de CFTR (et type cellulaire) Expression endogène Expression hétérologue wt (Calu 3) ΔF508 (CF15) (CHO) G551D (CHO) G1349D (Cos7) Inhibiteurs IC50 (déterminées par le test d’efflux des ions iodures) Glibenclamide 11,7 µM 11,8 µM 14,7 µM 7,9 µM 9,0 µM CFTRinh-172 ND 1,2 µM GPinh-5a 93,3 pM 67,3 pM 71,0 pM 43,1 nM 72,3 pM GPinh-8ab (60:40) 15,7 nM 8,7 nM 2,5 nM 190 nM 79,4 nM GPinh-15ab (60:40) 2,3 nM 6,3 nM 3,4 nM 154 nM 7,0 nM GPinh-17ab (75:25) 11,2 µM 7,0 µM 4,4 µM 35,5 µM GPinh-18ab (60:40) 11,9 µM 6,0 µM 5,7 µM 110 µM 2,9 µM Potentiateur EC50 (déterminées par le test d’efflux des ions iodures) GPact-11a 2,1 µM inactif C. Routaboul et al. JPET 2007 20

32 Evaluation sur différentes mutations de CFTR
Résultats Evaluations Biologiques Evaluation sur différentes mutations de CFTR Composés (proportions a:b déterminées par RMN) Mutations de CFTR (et type cellulaire) Expression endogène Expression hétérologue wt (Calu 3) ΔF508 (CF15) (CHO) G551D (CHO) G1349D (Cos7) Inhibiteurs IC50 (déterminées par le test d’efflux des ions iodures) Glibenclamide 11,7 µM 11,8 µM 14,7 µM 7,9 µM 9,0 µM CFTRinh-172 ND 1,2 µM GPinh-5a 93,3 pM 67,3 pM 71,0 pM 43,1 nM 72,3 pM GPinh-8ab (60:40) 15,7 nM 8,7 nM 2,5 nM 190 nM 79,4 nM GPinh-15ab (60:40) 2,3 nM 6,3 nM 3,4 nM 154 nM 7,0 nM GPinh-17ab (75:25) 11,2 µM 7,0 µM 4,4 µM 35,5 µM GPinh-18ab (60:40) 11,9 µM 6,0 µM 5,7 µM 110 µM 2,9 µM Potentiateur EC50 (déterminées par le test d’efflux des ions iodures) GPact-11a 2,1 µM inactif C. Routaboul et al. JPET 2007 20

33 Test en chambre de Ussing
Résultats Evaluations Biologiques Test en chambre de Ussing Test tissulaire Mesure de l’intensité du courant transépithélial Sur intestin de souris Inhibiteur GPinh-5a Inhibe dès 20 pM Nécessite une préincubation Activateur GPact-11a EC50 de 135 µM après stimulation par la forskoline EC50 de 256 µM sans stimulation par la forskoline GPact-11a n’est pas seulement un potentiateur mais également un activateur 21

34 Evaluations Biologiques
Résultats Evaluations Biologiques Test in vivo Sur la salivation de souris (collecte de la salive produite) Après stimulation et en présence des modulateurs Inhibiteur GPinh-5a Inhibe dès 20 pM Nécessite une préincubation Activateur GPact-11a EC50 de 7,2 µM après stimulation Inactif sur souris KO (CFTR -/-) 22

35 Plan Contexte scientifique Objectifs du travail Résultats
Travaux antérieurs La protéine CFTR Modulation de la protéine CFTR Objectifs du travail Résultats Poursuite de l’évaluation biologique des premiers composés actifs Recherche de nouveaux composés actifs Recherche du pharmacophore Pharmacomodulation Conclusions et perspectives

36 Simplifications structurales
Résultats Recherche du pharmacophore Simplifications structurales Petites molécules contenant le pharmacophore Modifications de la famille I Modification des groupements méthyles Famille II Décarboxylation 23

37 Sélection de molécules
Résultats Recherche du pharmacophore Sélection de molécules Comprenant le pharmacophore supposé 24

38 Recherche du pharmacophore
Résultats Recherche du pharmacophore Activités IC50 (CHO-wt) = 1 mM IC50 (CHO-wt) = 96 µM Aucun potentiateur 5 composés inhibiteurs 2 atomes de carbone entre les hétéroatomes Conforte la structure du pharmacophore proposé IC50 (CHO-wt) = 25 µM IC50 (CHO-wt) = 220 µM IC50 (CHO-wt) = 4 µM 25

39 Modification des groupements méthyles
Résultats Recherche du pharmacophore Modification des groupements méthyles Changement de l’α–oxoaldéhyde : éthylglyoxal (EG) Résultats antérieurs : Réaction entre : l’éthylglyoxal et la 2-aminopyridine Formation d’adduits voisins de ceux du MG Extension de la réaction aux adduits EG-1-aminoisoquinoléine 26

40 Influence de l’α-oxoaldéhyde (MG Vs EG)
Résultats Recherche du pharmacophore Influence de l’α-oxoaldéhyde (MG Vs EG) Remplacement des groupements méthyles par éthyles compatible avec l’activité (encombrement) Adduit EG-2-aminopyridine : IC50 (CHO-wt) = 18 µM Influence de la lipophilie ? 27

41 Nouveaux composés de la famille II
Résultats Recherche du pharmacophore Nouveaux composés de la famille II Extension de la réaction à 3 nouveaux adduits : Adduits MG-1-aminoisoquinoléine Adduits MG-benzamidine Adduits EG- 2-aminopyridine Produits attendus non obtenus à partir des adduits MG-dérivés de l’adénine (GPact-11a et GPinh-5a notamment) 28

42 Recherche du pharmacophore
Résultats Recherche du pharmacophore Famille II Voie d’accès à des pyrimidines substituées 2 composés inhibiteurs Confirmation du pharmacophore 48 % (2 étapes) IC50 (CHO-wt) = 5 nM IC50 (CHO-wt) = 17 nM 29

43 Accès à un nouveau type de composés : Famille III
Résultats Recherche du pharmacophore Accès à un nouveau type de composés : Famille III Essai de modification des adduits de la famille I en milieu basique Différent de NaOH : tBuOK Mise en évidence d’une nouvelle famille de composés Résultant d’une décarboxylation des adduits de la famille I Evaluation sur CFTR en cours Famille I GPact-11a Famille III 30

44 Formation des composés de la famille III
Résultats Recherche du pharmacophore Formation des composés de la famille III Stéréochimie des composés Deux isomères observés par spectrométrie de RMN Deux diastéréoisomères Ou deux mélanges racémiques Le même mélange d’isomères est obtenu A partir du mélange racémique majoritaire a de la famille I A partir des deux mélanges racémiques a et b 31

45 Proposition de mécanisme
Résultats Recherche du pharmacophore Proposition de mécanisme Déprotonation Elimination du carboxylate Arrachement concerté du proton en α Reprotonation 32

46 Proposition de mécanisme
Résultats Recherche du pharmacophore Proposition de mécanisme Deux mélanges racémiques A partir du mélange racémique majoritaire a de la famille I A partir des deux mélanges racémiques a et b 33

47 Plan Contexte scientifique Objectifs du travail Résultats
Travaux antérieurs La protéine CFTR Modulation de la protéine CFTR Objectifs du travail Résultats Poursuite de l’évaluation biologique des premiers composés actifs Recherche de nouveaux composés actifs Recherche du pharmacophore Pharmacomodulation Conclusions et perspectives

48 Structure des « chefs de file » et voies de synthèse
Résultats Pharmacomodulation Structure des « chefs de file » et voies de synthèse Le meilleur inhibiteur et le potentiateur diffèrent uniquement par le groupement en position 9 Modifications de l’adénine en position 7 ou 9 et/ou 8 et/ou 2 GPinh-5a GPact-11a 34

49 Modulations réalisées
Résultats Pharmacomodulation Modulations réalisées 35

50 Dérivés de la 2’-désoxyadénosine
Résultats Pharmacomodulation Dérivés de la 2’-désoxyadénosine Lors de la réaction avec le MG Formation des adduits attendus Et d’adduits ne portant plus le 2’-désoxyribose Difficultés de purification Accès à des dérivés de l’adénine modifiée en position 8 36

51 Activité des adduits MG-dérivés de l’adénine
Résultats Pharmacomodulation Activité des adduits MG-dérivés de l’adénine En position 9 R = Evaluation par le test d’efflux d’ions iodures (CHO-wt) Activité EC50 IC50 H - x 4,2 µM CH3 CH2-CH3 CH2-CH2-CH3 + 2 µM CH2-CH2-CH2-CH3 CH2-Ph CH2-CH2-CH2-Ph 2’-désoxyribose 71 pM ribose Pas de 100 % inhibition R = Evaluation par le test d’efflux d’ions iodures (CHO-wt) Activité EC50 IC50 CH-(CH3)2 x CH2-CH=CH2 + 3 µM CH=CH2-CH3 CH2-C≡CH CH2-CH2-CH2-OH 37

52 Activité des adduits MG-dérivés de l’adénine
Résultats Pharmacomodulation Activité des adduits MG-dérivés de l’adénine En position 8 et/ou 9 R1 = R2 = Evaluation par le test d’efflux d’ions iodures (CHO-wt) Activité EC50 IC50 dRib SH ? CH3-CH2-S x CH3-CH2-O H Br + 23 µM CH2-CH2-CH3 OH CH3-S CH3-O 38

53 Plan Contexte scientifique Objectifs du travail Résultats
Travaux antérieurs La protéine CFTR Modulation de la protéine CFTR Objectifs du travail Résultats Poursuite de l’évaluation biologique des premiers composés actifs Recherche de nouveaux composés actifs Recherche du pharmacophore Pharmacomodulation Conclusions et perspectives

54 Conclusions sur le pharmacophore
Conclusions et Perspectives Conclusions sur le pharmacophore Sélection de petites molécules contenant le pharmacophore : Mise en évidence de nouveaux inhibiteurs de la protéine CFTR Structure nécessaire mais pas suffisante pour observer une activité Peu d’informations sur les groupements voisins nécessaires à l’activité Modification de la famille I Accès à d’autres composés de la famille II Accès à une nouvelle famille 39

55 Conclusions sur la pharmacomodulation
Conclusions et Perspectives Conclusions sur la pharmacomodulation Mise en évidence de deux nouveaux potentiateurs Peu de variations sur la position 9 permettent de conserver une activité En attente de résultats complémentaires pour les positions 2 et 8 40

56 Conclusions et Perspectives
Mode d’action ? Hypothèses : Liaison directe à la protéine Site d’action identique pour inhibiteurs et activateurs Site localisé à proximité de la Glycine 551 41

57 Conclusions et Perspectives
Mode d’action ? Cl- MSD NBD1 NBD2 R Milieu extracellulaire intracellulaire P P P 42 P

58 Conclusions et Perspectives
Mode d’action ? Cl- MSD NBD1 NBD2 R P P P P 43

59 Conclusions et Perspectives
Mode d’action ? Cl- MSD NBD2 NBD2 NBD1 R P P P P 44

60 Conclusions et Perspectives
Poursuite de l’évaluation des composés actifs Association de GPact-11a et d’un correcteur : effet sur delF508 ? Compétition avec l’ATP Mutagenèse dirigée Modélisation in silico Etude par docking : identification d’un site de liaison Couples d’acides aminés portant des charges opposées se situant à proximité dans les modèles 3D de la protéine CFTR 45

61 Perspectives (2) Recherche de potentiateurs
Conclusions et Perspectives Perspectives (2) Recherche de potentiateurs Combinaison des modifications favorables en positions 9 et 8 Poursuite des variations structurales Adduits de l’EG sur 9-propyladénine Essais avec d’autres α-oxoaldéhydes GPact-11a Nouveau potentiateur mis en évidence Composé à synthétiser 46

62 Conclusions et Perspectives
Poursuite de la simplification structurale Obtention d’un seul énantiomère 7-méthylguanosine chef de file ? 47

63 Remerciements Vaincre la Mucoviscidose
Jean-Luc Décout, Marie-Carmen Molina, Antoine Fortuné, Equipe CBO Equipe PPCI : Frédéric Becq, Caroline Norez, Johanna Bertrand, Patricia Melin Ensemble du DPM

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66 Mécanisme Famille I

67 Mécanisme Famille II

68 Mécanisme Famille III