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ANALYSE CLONALE SOMATIQUE Pour quoi faire? - analyse de mutations récessives létales. - génération de tissus mosaïque. - test dautonomie cellulaire. Conditions:

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1 ANALYSE CLONALE SOMATIQUE Pour quoi faire? - analyse de mutations récessives létales. - génération de tissus mosaïque. - test dautonomie cellulaire. Conditions: - induire des crossing-over dans des cellules en mitose. - pouvoir marquer le clone. Définition dun clone: groupe de cellules de même génotype (issu dun même fondateur), au sein dun individu de génotype différent. (par ex.: -/- au sein de +/-)

2 + m + + m m + m + m Génotype: + / m

3 + + m m + + m m + + m m + m + m + m + + Phénotype Recombinaison mitotique

4 Analyse clonale somatique : SYSTEME FRT-FLP flp Sites FRT Recombinaison site spécifique + + m m + + m m m + flp Génotype: + / m ; HS-FLP / +

5

6 + + m m + + m m m + flp Marquage des clones UB-GFP Choc thermique Génotype: +, UB-GFP, FRT / m, +, FRT ; HS-FLP / + Clones jumeaux (« twin-spot » + + m m + + m m m + flp myc-tag Choc thermique Génotype: +, FRT / m, mycTag, FRT ; HS-FLP / +

7 + + m m + + m m m + flp Marquage des clones : négatif (GFP) UB-GFP Choc thermique Génotype: +, UB-GFP, FRT / m, +, FRT ; HS-FLP / + Clones jumeaux (« twin-spot »

8 Prolifération, croissance Clones jumeaux (« twin-spot ») Twin-spots HS-FLP ; FRT ras c40b mycTag / FRT, +, + ; en-GAL4, UAS-P35

9 + + m m m + flp Marquage des clones : positif (GFP) Système MARCM UAS-GFP Promoteur Ubiquitaire GAL4 Génotype: +, UB-GAL80, FRT / m, +, UAS-GFP, FRT ; UB-GAL4, HS-FLP / + GAL80 répresseur Promoteur HS répresseur m m UAS-GFP

10 maternel zygotique Activation du génome zygotique m m + z z 123

11 L ovocyte se développe dans un cyste

12 Fs m Phénotype CLONES GERMINAUX : technique « FLP-DFS » Fs m m flp Génotype: Fs, +, FRT / +, m, FRT ; HS-FLP / Fs m + + m + + m m flp Fs + m + + m +

13 Promoteur HSP 70 p-actine FRT yellow GAL4 FRT p-actine GAL4 UAS GFP UAS gène X

14 ELEMENTS TRANSPOSABLES : P

15 TRANSFORMATION : LIGNEES TRANSGENIQUES transposase LacZ GAL4 UAS Gène X rosy white G418 + transposase

16 APPLICATIONS ET TYPES D'ELEMENTS P - vecteurs d'expression (gène X; lacZ; GAL4; GFP; FRT; Flipase;...) - pièges ("enhancer-trap"; "gene-trap" ; "protein-trap") - rapporteur (UAS;) - mutagène

17 Vecteur d'expression gène X; lacZ.... promoteur

18 ENHANCER-TRAP LacZ Promoteur minimal ENHANCER

19 "PROTEIN-TRAP" GFP SDSA

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21 UAS (5X) Gène X GAL4 "GENE-TRAP" DEREGULATION phénotype GAL4 tissu-spécifique

22 WT en-GAL4 sans effetRégulateur positif Régulateur négatif

23

24

25 TRACAGE DES CELLULES

26

27 Cycle rétroviral

28

29 Nicolas, J.F. et al. Development : Eloy-Trinquet, S. et al Curr Top Dev Biol :33-80 P7 GENES RAPORTEURS

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