Les Enterobacteriaceae

Les Entériques La famille des Enterobacteriaceae est souvent connue comme les “entériques” Quatre caractéristiques majeures: Ils fermentent tous le glucose (dextrose) Ils réduisent tous les nitrates aux nitrites Ils sont tous oxydase négatifs Plusieurs se retrouvent dans les intestins des humains et d’autres mammifères Pathogénicité diverse: Commensaux, opportunistes ou pathogènes

Diagnostic en Laboratoire des Entérique Fermentation des sucres Bouillon phénol rouge Trois sucres + fer (TSI) Méthyl Rouge - Vogues Proskauer SIM Dégradation du tryptophane et de la cystéine; motilité Utilisation du Citrate Production d’Uréase Désaminase de la Phénylalanine Tests de Décarboxylases

Bouillon de Phénol Rouge Détermine source de carbone préférée et métabolisme (Oxydation ou fermentation) Contiens des sources de carbones simples: Peptone (protéines  acides aminés) Sucre désiré est ajouté Contiens un indicateur de pH Phénol rouge Jaune - pH acide - Fermentation Orange – pH neutre - Oxydation Rouge – pH alcalin - Oxydation

Bouillons Phénols Rouges Jaune (acide) + gaz = Fermentation du sucre Jaune(acide) pas de gaz = Fermentation du sucre Orange (neutre) pas de gaz = Oxydation du sucre Rouge (alcalin) pas de gaz = Oxydation des protéines Non inoculé

TSI — Trois Sucres + Fer Pente rouge/Bout rouge Pente rouge/Bout jaune Pas de fermentation Catabolisme des protéines Pente rouge/Bout jaune Fermentation du glucose seulement Pente jaune/Bout jaune Fermentation du lactose et/ou sucrose

Test de Méthyl Rouge Test pour la fermentation avec accumulation d’acide Source de carbones: Glucose et protéines Glucose  pyruvate  Acide lactique et/ou acétique + CO2 Indicateur –Méthyl rouge MR +: Rouge (pH < 5.2) MR - : Jaune (pH > 5.2) Neutre Acide

- + Test Voges-Proskauer Utilisé pour déterminer s’il y a fermentation avec production de sous produits neutres Glucose  pyruvate  acétoine  butanediol Réactifs Acétoine + -naphthol + KOH + O2  Couleur rouge - +

Test Sim : Sulfide, Indole, Motilité Sulfide: Identifie les bactéries capables de métaboliser la cystéine Cysteine  H2S; H2S + FeSO4  Précipité noir Indole: Identifie les bactéries capables de métaboliser le tryptophane Conversion du tryptophane en indole et acide pyruvique par l’enzyme la tryptophanase Réactif de Kovac réagit avec l’indole pour donner une couleur rouge

Non-motile Non Inoculé Indole + - H2S et motile

Utilisation du Citrate Sodium citrate seule source de carbone Indicateur de pH - bromothymol bleu Sodium citrate → Acide pyruvique + acide Oxalacetique acid + CO2 L’excès de sodium du Sodium Citrate + CO2 + H2O → Na2CO3 (pH : vert → bleu) + -

Test d’Uréase Utilisé pour différentier les organismes d’après leur capacité de faire l’hydrolyse de l’urée par l’enzyme uréase L’indicateur de pH, phénol rouge, est utilisé pour déceler la dégradation de l’urée et la production d’ammoniaque L’accumulation de produits alcalins, NH4(CO3)2, change le phénol rouge au rose + -

Test de Désaminase de la Phénylalanine Utilisé pour identifier les bactéries qui possèdent l’enzyme de la désaminase de la phénylalanine La désaminase de la phénylalanine convertit la phénylalanine à l’acide phénylpyruvique + NH3 Le chlorure ferrique (FeCl3) réagit avec l’acide phénylpyruvic et change la couleur du jaune au vert + -

Tests de Décarboxylase Contient du glucose, acide amine test et un indicateur de pH La fermentation du glucose génère des acides (milieu devient jaune) et active la décarboxylase Si la décarboxylase est présente, elle génère des produits alcalins et change l'indicateur de pH au violet (positif). Si aucune décarboxylase n'est présente, le milieu reste acide et jaune (négatif)

Bouillon de Décarboxylase de l’Ornithine Interprétation Tubes 1 –aa & +aa: Réaction acide – fermentation du glucose; pas de décarboxylation Tube 2 -aa: Réaction acide – Fermentation du glucose Tube 2 +aa: Réaction acide – Fermentation du glucose suivi de la décarboxylation (réaction alcaline) - aa +aa -aa +aa 1 2

Lysine Décarboxylase Pente de Lysine avec fer Contiens de la lysine, du glucose, des peptones, du pourpre de bromocrésol (indicateur de pH), du thiosulfate de sodium La décarboxylation de la lysine est un procédé anaérobie qui se produit dans le bout La décarboxylation de la lysine génère un produit aminé qui réagit avec l'indicateur de pH pour donner une couleur mauve dans le bout Décarboxylation négative: bout jaune

Lysine Désaminase Pente de Lysine avec fer La désamination de la lysine est un procédé aérobie qui se produit sur la pente La désamination de la lysine génère de l’ammoniaque qui réagit avec l'indicateur de pH pour produire un couleur rouge foncé sur l'inclinaison Désamination négative: Pente mauve

Pente de Lysine avec Fer Pente et bout mauve Décarboxylase positif Pente mauve et bout jaune Décarboxylase négatif Pente mauve et bout noir Pente rouge et bout jaune Désaminase positif

Test de Nitrate Réductase Utilisé pour détecter la capacité d'un organisme de réduire le nitrate (NO3) en nitrite (NO2) ou en un autre composé azoté, tel que l'azote moléculaire (N2) en utilisant l'enzyme nitrate réductase

Étape 1: Test pour nitrite Nitrate Réductase NO3- + 2 H+ + 2 e-  H2O + NO2-  Nitrate Nitrite NH3 or N2 Étape 1: Test pour nitrite NO2- + acide sulfanilique et alpha naphtylamine  HNO2 Couleur rouge indique la présence du Nitrite Nitrate a été réduit Couleur jaune indique l’absence de Nitrite Nitrate n’a pas été réduit Nitrate a été réduit au Nitrite qui a été réduit + ?

Nitrate Réductase (Suite) Interprétation de résultats ambigus après l’étape 1 Étape 2: Test pour la présence du nitrate NO3- + Zn (s)  NO2- + - Couleur rouge indique la présence du Nitrate Nitrate n’a pas été réduit par la bactérie. A été réduit par le Zn Couleur jaune indique l’absence du nitrate Nitrate a été réduit au Nitrite qui a été réduit

NO3- + 2 H+ + 2 e-  H2O + NO2-  Nitrate Nitrite