Le projet TICE en 1ère STL BGB Milieux de culture Alexandrine Barbosa PLC 2 Biotechnologies Milieux de culture

Introduction à la présentation du projet Contexte : projet réalisé en soutien Objectifs de la séance : Au niveau du thème choisi Au niveau du support choisi Outils informatiques : power point, internet Matériel : ordinateurs, vidéo projecteur Milieux de culture

Déroulement de la séance TICE Présentation de la forme de la séance et explication du travail demandé Présentation power point : alternance de phases d’explication, de travail personnel et de discussion collective avec correction Test de mémoire Milieux de culture

Les différents milieux de culture Soutien microbiologie 1ère STL Milieux de culture

Les milieux de culture Milieux de culture NON SELECTIFS - les milieux usuels : GN, GTS, BCP, CLED - les milieux enrichis : gélose au sang SELECTIFS - les milieux sélectifs des Gram -Drigalski Cétrimide TCBS - les milieux sélectifs des Gram + : MRS Chapman et Baird-Parker Ces deux types de milieux peuvent contenir des constituants additionnels : substrats biochimiques et indicateurs pH, permettant de déterminer des caractères biochimiques métaboliques. Milieux de culture

Le métabolisme glucidique Le milieu Kligler Hajna : test d ’auto-évaluation Composition : Extrait de viande de boeuf 3 g Extrait de levure 3 g Peptone 20 g Chlorure de sodium 5 g Citrate ferrique 0,3 g Thiosulfate de sodium 0,3 g Lactose 10 g Glucose 1 g Rouge de phénol 0,05 g Agar (gélose) 12 g ED qsp 1 L Source de C et N Equilibre osmotique Mise en évidence de la formation H2S Source glucidique majoritaire Source glucidique minoritaire Indicateur de pH pH = 7,4 6,5 8,2 Milieux de culture

Le métabolisme glucidique 2 Le milieu Citrate de Simmons Sulfate de magnésium 0,2 g Phosphate monopotassique 1 g Phosphate bipotassique 1 g Citrate de sodium 2 g NaCl 5 g Bleu de Bromothymol 0,08 g Agar (gélose) 15 g ED qsp 1 L Sources minérales Seule source de carbone Equilibre osmotique Indicateur pH pH = 6,8 6 7,6 A partir des informations données ci-dessus, donnez la particularité et les modalités de lecture de ce milieu. Milieux de culture

Le métabolisme glucidique 3 Le milieu Clark et Lubs : à partir de la fiche technique, citez : - les 2 tests que l ’on peut réaliser après culture de ce milieu - les noms scientifiques des réactifs utilisés lors de ces tests - les caractères recherchés Quel test ? Quel résultat ? Milieux de culture

Le métabolisme protidique Les milieux de Falkow : à partir de l ’animation, expliquez la lecture de ces milieux. LDC + ODC - ADH + Milieux de culture

Les milieux usuels Milieux de culture Le milieu BCP : à l ’aide de la fiche technique, donnez les rôles des différents composants du milieu. Composants Rôles Peptones et extraits de viande Lactose Bromocrésol Pourpre Agar Eau Bacillus cereus Colonie lactose …? Milieux de culture

De quel milieu s ’agit-il ? Les milieux sélectifs Ce milieu permet de sélectionner les bacilles Gram- de culture facile. Il contient : peptones, extraits de viande et de levure, lactose, désoxycholate de sodium, cristal violet, BBT, thiosulfate de sodium, agar et eau. De quel milieu s ’agit-il ? Quels sont les constituants qui le rendent sélectif ? Citer un genre bactérien qui pourrait y cultiver. Pour vous aider Colonie ……………... + ou - ? Milieux de culture

Les milieux sélectifs 2 Milieux de culture La gélose au cétrimide : A l ’aide de vos connaissances, que déduisez vous de l ’observation de l ’image ci-contre ? A quel type de constituant correspond le cétrimide ? Le milieu TCBS : Etablissez sa fiche technique. Colonie …………..………… Suspicion de ………………. Pour vous aider Milieux de culture

Les milieux sélectifs 3 Milieux de culture Le milieu MRS : à partir de vos connaissances , répondez aux questions suivantes : - à partir de sa composition, donnez deux adjectifs pour qualifier ce milieu ? - pour l ’étude de quel genre bactérien l ’utilise t-on ? - quelles sont les conditions d’incubation préconisées ? Milieux de culture

Les milieux sélectifs 4 Chapman Baird Parker Milieux de culture colonie …………….? Baird Parker Staphylococcus aureus Milieux de culture

Staphylococcus aureus Quelle est la démarche d ’identification de cette espèce bactérienne ? 1/ Examen microscopique et test enzymatique Gram : coques Gram + Catalase + 2/ Galerie de genre : VF / MEVAG Staph / CTA + mannitol AAF / fermentatifs du glucose / mannitol + 3/ Milieux sélectifs : Chapman (médical) et Baird-Parker (alimentaire) mannitol + réduction des tellurites, halophile lécithinase +, protéinase + 4/ Tests d ’identification spécifique : recherche de l ’ADNase ADNase + Milieux de culture

Conclusion Milieux de culture Les sites utilisés : les sites académiques http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/index.html http://stlbioch.apinc.org/dossiers/dossiers.php?id_dossier=2 Connaissez vous un milieu permettant d ’identifier directement une espèce bactérienne ? King A et Pseudomonas aeruginosa Pourquoi ne pas avoir étudié le milieu urée-tryptophane lors du métabolisme protidique ? parce qu ’il n ’est pas un milieu de culture ! Il permet de réaliser des tests biochimiques, prochain thème abordé en soutien via les TICE. Milieux de culture

Critiques de la séance TICE Evaluation de l ’exercice Ont-ils été motivés ? Ont-ils travaillé sérieusement ? Problèmes rencontrés Milieux de culture

Conclusion Je recommencerai !!! Milieux de culture