LES MILIEUX D’ISOLEMENT DES COQUES GRAM + La gélose trypticase soja Composition Peptone trypsique de caséine 15 g Peptone papaïnique de soja 5 g Chlorure de sodium 5 g Agar (gélose) 15 g ED qsp 1 L Source de C et N Source minérale pH = 7,2 Milieu d’isolement riche qui convient à tous les microorganismes exigeants

La gélose COLUMBIA Composition Mélange de peptones 23 g Amidon 1 g Chlorure de sodium 5 g Agar (gélose) 15 g ED qsp 1 L Source de C et N Source glucidique de C Source minérale pH = 7,1 Milieu d’isolement , servant de base pour la préparation des géloses au sang. Gélose riche qui peut être additionnée de nombreux suppléments, et la rendre sélective à certains groupes bactériens.

La gélose au sang frais Composition Base trypticase soja, Columbia Peptones riches en acides aminés et vitamines Amidon NaCl agar A ce milieu de base, il faut ajouter 5% de sang frais de mouton ou de cheval défibriné et stérile Milieu d’isolement riche qui convient à tous les microorganismes exigeants ou non. Il permet aussi une orientation en fonction du caractère hémolytique pour les streptocoques Préparation du milieu Pipette Pasteur stérile Couler par-dessus les gouttes de sang la gélose en surfusion à 45°C Homogénéiser en faisant des petits cercles concentriques. Déposer le volume de sang nécessaire en faisant des gouttes séparées dans le fond de la boîte de pétri.

Milieu d’isolement simple, sélectif et d’orientation La gélose BEA (bile – esculine – azide de sodium) Composition Source de C et N Peptone 20 g Extrait de levure 5 g Bile de boeuf 10 g Chlorure de sodium 5 g Citrate de sodium 1 g Esculine 1 g Citrate de fer ammoniacal 0,5 g Azide de sodium 0,25 g Agar (gélose) 13,5 g ED qsp 1 L Source de C, N, vitamines et minéraux Inhibiteur de croissance Source glucidique Ind des produits d’hydrolyse de l’esculine Inhibiteur de croissance pH = 7,1 Milieu d’isolement simple, sélectif et d’orientation L’azide de sodium empêche la croissance des bactéries Gram – et de tous les streptocoques sauf ceux du groupe D. La bile inhibe les bactéries Gram + sauf les streptocoques du groupe D. L’azide de sodium et la bile sélectionnent la culture des entérocoques et des streptocoques du groupe D.

Colonies d’ascpect variable, sans noircissment du milieu: ESCULINE – Orientation vers d’autres germes différents des Streptococcus D Lecture Petites colonies translucides entourées d’un halo noir: ESCULINE + Orientation vers les Streotococcus D dont fait partie le genre Enterococcus.

Lecture Halo clair (éclaircissement autour des colonies) Hémolyse totale des globules rouges : HEMOLYSE  Halo verdâtre autour des colonies Hémolyse partielle des globules rouges : HEMOLYSE  Milieu inchangé autour des colonies Absence d’hémolyse.