Titre. 1 1. Prologue. 2.1.1 1. Prologue. 2. Voyage dans la matrice. 2.1. Diagnostic différentiel. 2.1.1. Quest-ce que le PDGF?« platelet derived growth.

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1 titre

2 1 1. Prologue.

3 2.1.1 1. Prologue. 2. Voyage dans la matrice. 2.1. Diagnostic différentiel. 2.1.1. Quest-ce que le PDGF?« platelet derived growth factor » = facteur de croissance dérivé des plaquettes. 2.1.2. Expliquer le concept d'inhibition de contact. Une culture cellulaire ne dépasse pas une certaine densité. La confluence bloque la croissance.

4 2.2.1 1. Prologue. 2. Voyage dans la matrice. 2.2. Hyaluronate. 2.2.1. Expliquer les valeurs des témoins. niveau de base cicatrisation = synthèse hyaluronate niveau le plus bas de dégradation Post cicatrisation = dégradation de lexcès de hyaluronate niveau le plus haut de dégradation

5 2.2.2 1. Prologue. 2. Voyage dans la matrice. 2.2. Hyaluronate. 2.2.2. Mesurer l'activité du sérum de Bruce Willis. Vm = 1/b = 16 nmol.L -1.mn -1 = 16.10 -3 µmol.L -1.mn -1 = 16.10 -3 UE 10 µL de sérum= 16.10 -3 UE/10µL = 16.10 -1 UE/mL 1,6 UE.mL -1 en cours de cicatrisation 2.2.3. Comparer avec les normes et conclure.

6 2.3.1 1. Prologue. 2. Voyage dans la matrice. 2.2. Hyaluronate. 2.3.1. Pourquoi une si grande proportion de glycine? La glycine est le plus petit des acides aminés -----> Sa chaîne latérale entre dans lespace restreint entre les chaînes Sa présence permet de casser la structure en hélice plus ample. 2.3.2. Expliquer la présence de la proline. 2.3. Collagène.

7 2.3.3 2. Voyage dans la matrice. 2.3.3. Quelle est la bande à 450 kD? Collagène 2.3.4. Expliquer l'allure des deux gels à t = 6 minutes. si neutralisation SRP à 6 mn -----> présence dans lumière RE -----> absence dans cytoplasme 2.3.5. Que s'est-il passé sur les pistes 0 mn? si neutralisation SRP à 0 mn -----> absence dans lumière RE Pas de translocation 2.3.6. Justifier la position de la bande sur la piste cyto. Forme collagène plus lourd -----> présence du peptide signal non excisé. 2.3.7. Expliquer l'allure des deux pistes 3. 50% de forme transloquée 50% de forme précurseur 3 mn représente le temps critique pour le démarrage de la translocation. 2.3. Collagène.

8 2.3.8 1. Prologue. 2. Voyage dans la matrice. 2.2. Hyaluronate.2.3. Collagène. 2.3.8. Quel est le rôle des protéines SRP? Elles bloquent la traduction à 3 mn Elles reconnaissent le récepteur canal

9 2.3.9 1. Prologue. 2. Voyage dans la matrice. 2.2. Hyaluronate.2.3. Collagène. 2.3.9. Calculer le coefficient d'extinction molaire des chaînes. Les concentrations à t = 0 peuvent servir de gamme étalon. C t = 0t = 15t = 5 µmol.L-1sansavec 00,000 20,0050,0240,101 40,0100,0400,172 80,0200,0600,268 120,0290,0720,329 150,0370,0790,362 C t = 0t = 15t = 5 µmol.L-1sansavec 00,000 20,0050,0240,101 40,0100,0400,172 80,0200,0600,268 120,0290,0720,329 150,0370,0790,362 a = 0,00245 µmol.L -1.mn -1 = 10 6. a = 2 450 mol.L -1.mn -1

10 2.3.10 1. Prologue. 2. Voyage dans la matrice. 2.2. Hyaluronate.2.3. Collagène. 2.3.10. Convertir les vitesses initiales en µmol.L -1.mn -1. 2 étapes: C t = 0t = 15t = 5 µmol.L-1sansavec 00,000 20,0050,0240,101 40,0100,0400,172 80,0200,0600,268 120,0290,0720,329 150,0370,0790,362 Abs -----> C C = Abs / Abs -----> Abs SH Dans le cas d'une réaction équimolaire C = CSH = Ct SH.C.l = t.Cl –.C.l SH = t - a SH = = 12 500 – 2 450 =10 050 mol.L-1.cm-1 Vi = C / ( x t) Vi = C / t pour les puristes: Vi = C / t sans ascorbate t = 15 mn avec ascorbate t = 5 mn C sansvit C µmol.L-1 0 0,00 2 0,162,00 4 0,273,43 8 0,405,33 12 0,486,55 15 0,527,20 µmol.L -1.mn -1 C'est une simplification honteuse car la stœchiométrie n'est pas connue:

11 2.3.11 1. Prologue. 2. Voyage dans la matrice. 2.2. Hyaluronate.2.3. Collagène. 2.3.11. Déterminer l'effet de l'ascorbate sur la formation du collagène. C t = 0t = 15t = 5 µmol.L-1sansavec 00,000 20,0050,0240,101 40,0100,0400,172 80,0200,0600,268 120,0290,0720,329 150,0370,0790,362 C sansvit C µmol.L-1 0 0,00 2 0,162,00 4 0,273,43 8 0,405,33 12 0,486,55 15 0,527,20 µmol.L -1.mn -1 Lascorbate active la synthèse du collagène

12 2.3.12 2. Voyage dans la matrice. 2.3. Collagène. 2.3.12. Quel est le nom de la maladie dont souffrait les marins par carence en ascorbate? Le scorbut

13 2.4.1 2. Voyage dans la matrice. 2.4.1. Analyser lallure des deux pistes. 2.3. Collagène.2.4. Fibronectine. La sonde A reconnaît 1 fragment La sonde B reconnaît 2 fragments dont le fragment A 2.4.2. Comment expliquer la présence de deux bandes reconnues par la sonde B? La sonde B est « à cheval » sur deux fragments 2.4.3. Comment expliquer la présence d'une bande commune avec les sondes A et B? Les deux sondes reconnaissent deux parties dune même séquence

14 2.4.4 2. Voyage dans la matrice. 2.4. Fibronectine. 2.4.4. Formuler une hypothèse expliquant l'ensemble des résultats. gène Sonde ASonde B Enzyme de restriction Sonde ASonde B

15 2.4.5 2.4. Fibronectine. 2.4.5. Analyser le cliché. Identifier les éléments qui le constituent. Segments épais Boucles fines Segments bicaténaires hybridés Segments monocaténaires 2.4.6. Expliquer la présence de boucles. Séquences présentes sur lADN et absentes de lARN. 2. Voyage dans la matrice. ADN ARN 2.4.7. Que peut-on en conclure? Transcription morcelée intron / exon

16 2.4.8 2.4. Fibronectine. 2.4.8. Analyser l'allure des pistes. Les sondes A et B reconnaissent plusieurs segments dADN. 2. Voyage dans la matrice. Certains sont en commun. 2.4.9. Expliquer la présence de bandes communes entre les deux pistes. A et B reconnaissent deux parties du même gène. 2.4.10. Comment justifier la présence de bandes différentes selon la sonde employée? Bandes différentes -----> ARN différents

17 2.4.11 2.4. Fibronectine. 2.4.10. Que peut-on conclure au sujet de l'ARNm de la fibronectine? Le même gène est transcrit en plusieurs versions dARNm -----> tous codent pour une version différente de fibronectine. 2. Voyage dans la matrice.

18 3.1.1 3.1.1. A quelle phase du cycle les cellules s'arrondissent-elles? Phase M = mitose 3. Cycle. 3.1. Les différentes phases du cycle. 3.1.2. Comment s'appelle la division cytoplasmique de la cellule? Cytodiérèse 3.1.3. Donner le nom de la période séparant deux divisions. Interphase 3.1.4. Quel évènement majeur à lieu pendant la phase S? Réplication

19 3.1.5 3.1.5. Calculer la vitesse spécifique de croissance de la culture. 3. Cycle. 3.1. Les différentes phases du cycle. µ = a = 0,0124 h -1 3.1.6. Déterminer la durée d'un cycle cellulaire. G = Ln ( 2 ) / µ = 0,69 / 0,0124 = 56 h

20 3.1.7 3.1.7. Justifier la méthode employée pour calculer les durées des différentes phases du cycle. 3. Cycle. 3.1. Les différentes phases du cycle. Le pourcentage de cellules dans une phase est le reflet de la durée de cette phase 3.1.8. Pour que cette méthode soit valide, la culture doit obéir à un impératif, lequel? La population cellulaire doit être en croissance asynchrone 24 h 1 / 12 phase M = 1 / 12 x 24 = 2 h

21 3.1.9 boîte 1boîte 2boîte 3 Cell totales 169213181 Cell mitotiques 243026 Cell marquées 273429 boîte 1boîte 2boîte 3moy Cell totales 169213181188 Cell mitotiques 24302627 Cell marquées 27342930 3.1. Les différentes phases du cycle. boîte 1boîte 2boîte 3moy Cell totales 169213181188% Cell mitotiques 243026270,143 Cell marquées 273429300,161 M = T cycle x % = 56 x 0,143 = 8 h 3. Cycle. 3.1.9 Déterminer la durée de la phase M.3.1.10. Quelle est l'autre phase mesurée? Quelle est sa durée? boîte 1boîte 2boîte 3moy Cell totales 169213181188% Cell mitotiques 243026270,143 Cell marquées 273429300,161 S = 56 x 0,161 = 9 h incorporation de la thymine pendant la réplication 3.1.10. Quelle est l'autre phase mesurée? Quelle est sa durée?

22 3.1.10 3.1. Les différentes phases du cycle. 3. Cycle. 3.1.10. Analyser les résultats et conclure. Phase mitotique plus longue que la normale. 56 heures 8h 9h >> 2h

23 3.2.1 3.1. Les différentes phases du cycle. 3. Cycle. 3.2.1. Formuler deux hypothèses sur lorigine de ces phénomènes. activité kinase > 3.2. Phosphorylation. [Ez] > apparition dune nouvelle enzyme

24 3.2.2 3. Cycle. la présence de PDGF active les kinases 3.2. Phosphorylation. 3.2.2. Analyser les activités enzymatiques des cellules dans les quatre expériences. Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 T Sans PDGF 1520 T Avec PDGF 22020 B.W. Sans PDGF 908 B.W. Avec PDGF 30016 B.W. >> T cest normal!

25 3.2.3 3. Cycle. 3.2. Phosphorylation. Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 T Sans PDGF 1520 T Avec PDGF 22020 B.W. Sans PDGF 908 B.W. Avec PDGF 30016 3.2.3. Ces résultats permettent-ils de départager les deux hypothèses? 90 = 15 + 75 300 = 220 + 80 Ez normale + Ez nouvelle Km = cte Km = une seule enzyme moyenne de deux enzymes Apparition dune activité enzymatique nouvelle.

26 3.3.1 3. Cycle. 3.2. Phosphorylation.3.3. Traitement. 3.3.1. Jack doit-il choisir des inhibiteurs compétitifs ou non compétitifs? Justifier. Il doit choisir des INC! Les IC ne sont pas spécifiques d'une iso-enzyme particulière: ils bloqueraient l'ensemble du métabolisme kinase

27 3.3.2 3. Cycle. 3.2. Phosphorylation. 3.3.2. Calculer les paramètres enzymatiques dans chaque cas. cyclospérine amphoricol tryptodol ouabaïne cyclospérineamphoricolouabaïnetryptodol Vm1020030075 nmol.L -1.mn -1 Km16211610 µmol.L -1 T Sans PDGF T Avec PDGF B.W. Sans PDGF B.W. Avec PDGF Vm1522090300 nmol.L -1.mn -1 Km2030816 µmol.L -1 3.3.3. Quelle est l'action de la oubaïne? Ce choix est-il judicieux?

28 3.3.3 3. Cycle. 3.2. Phosphorylation. 3.3.3. Quelle est l'action de la oubaïne? Ce choix est-il judicieux? La oubaïne est un inhibiteur des pompes Na,K, ATPase Rien à voir avec les kinases Choix malheureux. T Sans PDGF T Avec PDGF B.W. Sans PDGF B.W. Avec PDGF Vm1522090300 nmol.L -1.mn -1 Km2030816 µmol.L -1 cyclospérineamphoricolouabaïnetryptodol Vm1020030075 nmol.L -1.mn -1 Km16211610 µmol.L -1 cyclospérineamphoricoltryptodol Vm1020075 nmol.L -1.mn -1 Km162110 µmol.L -1

29 3.3.4 3. Cycle. 3.2. Phosphorylation. 3.3.4. Quelle est l'action de chacun d'eux? La cyclospérine agit sur toutes les kinases. Inhibiteur non spécifique Choix malheureux! T Sans PDGF T Avec PDGF B.W. Sans PDGF B.W. Avec PDGF Vm1522090300 nmol.L -1.mn -1 Km2030816 µmol.L -1 cyclospérineamphoricoltryptodol Vm1020075 nmol.L -1.mn -1 Km162110 µmol.L -1 cyclospérineamphoricoltryptodol Vm1020075 nmol.L -1.mn -1 Km162110 µmol.L -1 T Sans PDGF T Avec PDGF B.W. Sans PDGF B.W. Avec PDGF Vm1522090300 nmol.L -1.mn -1 Km2030816 µmol.L -1 cyclospérineamphoricoltryptodol Vm1020075 nmol.L -1.mn -1 Km162110 µmol.L -1 T Sans PDGF T Avec PDGF B.W. Sans PDGF B.W. Avec PDGF Vm1522090300 nmol.L -1.mn -1 Km2030816 µmol.L -1 Le tryptodol rétablit l'activité de l'iso-enzyme. Inhibiteur de la kinase normale Choix malheureux! cyclospérineamphoricoltryptodol Vm1020075 nmol.L -1.mn -1 Km162110 µmol.L -1 T Sans PDGF T Avec PDGF B.W. Sans PDGF B.W. Avec PDGF Vm1522090300 nmol.L -1.mn -1 Km2030816 µmol.L -1 L'amphoricol rétablit l'activité normale. Inhibiteur de l'iso-enzyme C'est le bon choix! 3.3.5. Quelle molécule choisir?