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1. Prélèvement bactérien. 1.1. Identification. 1.1.1. Quel type bactérien s'attend-on à trouver dans cet organe? Donner le nom du type de relation existant.

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1 1. Prélèvement bactérien Identification Quel type bactérien s'attend-on à trouver dans cet organe? Donner le nom du type de relation existant entre l'hôte et cette bactérie. Le gros intestin contient des E. coli. Ce sont des bactéries commensales.

2 Quel type bactérien s'attend-on à trouver dans cet organe? Donner le nom du type de relation existant entre l'hôte et cette bactérie. Le gros intestin contient des E. coli. Ce sont des bactéries commensales Commenter les observations. Présence de très nombreux Bacillus Indiquer le nom des différents éléments visibles au microscope électronique. cytoplasme membrane plasmque peptido glycane Les Bacillus sont caractéristiques de la flore vaginale. Un changement dans sa localisation a permis sa pathogénicité. 1. Prélèvement bactérien Identification Où ce type de germe se trouvent- il généralement dans le corps humain? Que peut-on en conclure?

3 Tracer les courbes de croissance sur Excel Croissance Comparer le comportement des deux bactéries. Léchantillon présente une vitesse de croissance plus rapide Calculer les vitesses spécifiques de croissance µ. Angie Echantillon µ = 0,0180 mn -1 µ = 0,0250 mn Prélèvement bactérien Identification.

4 2. Antibiotique Effet des Antibiotiques Donner le nom de ces trois molécules Croissance. Céphalosporine Méthicilline Pénicilline Quel est leur mode d'action? Expliquer le mécanisme moléculaire. Elles bloquent la synthèse de la paroi. Elles agissent comme des inhibiteurs compétitifs grâce à leur homologie avec la liaison peptidique des peptides inter-chaînes.

5 Calculer les vitesses de croissance dans chacun des cas. Flore dAngie Conclure. Echantillon La flore Angie présente une croissance plus faible que léchantillon. De plus, cette dernière est résistante aux 3 antibiotiques. 2. Antibiotique Effet des Antibiotiques.

6 Comment s'appelle cette méthode de mesure. Méthode à deux points Résistance Calculer la concentration en pénicilline des essais (on néglige l'intervention de l'extrait protéique sur le volume final de la solution). C pén = Ci x V pén / Vt V pèn TpC pén mL µg.L ,0 0,90,113,5 0,80,212,0 0,60,49,0 0,5 7,5 0,40,66,0 0,20,83,0 1,00,015, Quel est le rôle du dernier essai (en absence denzyme)? Il permet de mesurer la dégradation spontanée Calculer le coefficient de proportionnalité entre l'absorbance et la concentration en pénicilline. On trace la droite étalon. a = 0,09 L.µg Pourquoi n'avons nous pas le droit de l'appeler coefficient d'extinction molaire? A cause de lunité. est en L.mol -1.cm Antibiotique.

7 Calculer les vitesses initiales spécifiques (c'est à dire uniquement dues à l'enzyme) en Abs.mn -1. Ce calcul présente une double difficulté: On mesure une dégradation de substrat. Il existe une dégradation spontanée de lantibiotique Résistance. 2. Antibiotique.

8 Calculer les vitesses initiales spécifiques (c'est à dire uniquement dues à l'enzyme) en Abs.mn -1. Etape 1: mesure vitesse de dégradation. V = (Abs0 – Abs15) / t V pènicillineAbs0Abs à 15 sec mLAngieEch 11,3501,2050,671 0,91,2151,0720,551 0,81,0800,9390,433 0,60,8100,6760,210 0,50,6750,5450,108 0,40,5400,4150,015 0,20,2700,1630,000 1,01,3501,0701,200 V angie 1 = (1,350 – 1,205) / 0,25 = 0,580 Abs.mn-1 V pènicillineAbs0Abs à 15 secV apparente(Abs.mn -1 ) mLAngieEchAngieEch 11,3501,2050,6710,5802,72 0,91,2151,0720,5510,5722,66 0,81,0800,9390,4330,5622,59 0,60,8100,6760,2100,5372,40 0,50,6750,5450,1080,5202,27 0,40,5400,4150,0150,4982,10 0,20,2700,1630,0000,4301,54 1,01,3501,2801, Résistance. 2. Antibiotique.

9 Calculer les vitesses initiales spécifiques (c'est à dire uniquement dues à l'enzyme) en Abs.mn -1. Etape 2: mesure vitesse vraie. V vraie = V – V spontanée V pènicillineAbs0Abs à 15 sec mLAngieEch 11,3501,2050,671 0,91,2151,0720,551 0,81,0800,9390,433 0,60,8100,6760,210 0,50,6750,5450,108 0,40,5400,4150,015 0,20,2700,1630,000 1,01,3501,0701,200 V pènicillineAbs0Abs à 15 secV apparente(Abs.mn -1 ) mLAngieEchAngieEch 11,3501,2050,6710,5802,72 0,91,2151,0720,5510,5722,66 0,81,0800,9390,4330,5622,59 0,60,8100,6760,2100,5372,40 0,50,6750,5450,1080,5202,27 0,40,5400,4150,0150,4982,10 0,20,2700,1630,0000,4301,54 1,01,3501,2801,313 V spontanée = (Abs0 – Abs15) / t V spontanée Angie = (1,350 – 1,280) / 0,25 = 0,280 Abs.mn -1 V pènicillineAbs0Abs à 15 secV apparente(Abs.mn -1 ) mLAngieEchAngieEch 11,3501,2050,6710,5802,72 0,91,2151,0720,5510,5722,66 0,81,0800,9390,4330,5622,59 0,60,8100,6760,2100,5372,40 0,50,6750,5450,1080,5202,27 0,40,5400,4150,0150,4982,10 0,20,2700,1630,0000,4301,54 1,01,3501,2801,3130,2800, Résistance. 2. Antibiotique.

10 Calculer les vitesses initiales spécifiques (c'est à dire uniquement dues à l'enzyme) en Abs.mn -1. Etape 2: mesure vitesse vraie. V spf = V – V spontanée V pènicillineAbs0Abs à 15 sec mLAngieEch 11,3501,2050,671 0,91,2151,0720,551 0,81,0800,9390,433 0,60,8100,6760,210 0,50,6750,5450,108 0,40,5400,4150,015 0,20,2700,1630,000 1,01,3501,0701,200 V pènicillineAbs0Abs à 15 secV apparente(Abs.mn -1 ) mLAngieEchAngieEch 11,3501,2050,6710,5802,72 0,91,2151,0720,5510,5722,66 0,81,0800,9390,4330,5622,59 0,60,8100,6760,2100,5372,40 0,50,6750,5450,1080,5202,27 0,40,5400,4150,0150,4982,10 0,20,2700,1630,0000,4301,54 1,01,3501,2801,313 V Angie = 0,580 – 0,280 = 0,300 Abs.mn -1 V pènicillineAbs0Abs à 15 secV apparente(Abs.mn -1 ) mLAngieEchAngieEch 11,3501,2050,6710,5802,72 0,91,2151,0720,5510,5722,66 0,81,0800,9390,4330,5622,59 0,60,8100,6760,2100,5372,40 0,50,6750,5450,1080,5202,27 0,40,5400,4150,0150,4982,10 0,20,2700,1630,0000,4301,54 1,01,3501,2801,3130,2800,15 V pènicillineAbs0Abs à 15 secV apparente(Abs.mn -1 )V spécifique (Abs.mn -1 ) mLAngieEchAngieEchAngieEch 11,3501,2050,6710,5802,720,3002,566 0,91,2151,0720,5510,5722,660,2922,507 0,81,0800,9390,4330,5622,590,2822,438 0,60,8100,6760,2100,5372,400,2572,250 0,50,6750,5450,1080,5202,270,2402,120 0,40,5400,4150,0150,4982,100,2181,950 0,20,2700,1630,0000,4301,540,1501,393 1,01,3501,0701,2000,2800, Résistance. 2. Antibiotique.

11 V pènicillineAbs0V spécifique (Abs.mn -1 ) mLAngieEch 11,3500,3002,566 0,91,2150,2922,507 0,81,0800,2822,438 0,60,8100,2572,250 0,50,6750,2402,120 0,40,5400,2181,950 0,20,2700,1501,393 1,01,350 V pènicillineAbs0Abs à 15 secV apparente(Abs.mn -1 )V spécifique (Abs.mn -1 ) mLAngieEchAngieEchAngieEch 11,3501,2050,6710,5802,720,3002,566 0,91,2151,0720,5510,5722,660,2922,507 0,81,0800,9390,4330,5622,590,2822,438 0,60,8100,6760,2100,5372,400,2572,250 0,50,6750,5450,1080,5202,270,2402,120 0,40,5400,4150,0150,4982,100,2181,950 0,20,2700,1630,0000,4301,540,1501,393 1,01,3501,0701,2000,2800, Convertir en µg de pénicilline dégradée.L -1.s -1 Etape 1: Calculer la concentration des tubes. C pén = Ci x Vi / Vt C pén1 = 15 x 1 / 1 V pènicillineAbs0V spécifique (Abs.mn -1 ) mLAngieEch 151,3500,3002, ,2150,2922,507 12,01,0800,2822,438 9,00,8100,2572,250 7,50,6750,2402,120 6,00,5400,2181,950 3,00,2700,1501,393 1,01, Résistance. 2. Antibiotique.

12 Convertir en µg de pénicilline dégradée.L -1.s -1 Etape 2: Convertir. V = V spf / 0,09 V pènicillineAbs0V spécifique (Abs.mn -1 ) mLAngieEch 151,3500,3002, ,2150,2922,507 12,01,0800,2822,438 9,00,8100,2572,250 7,50,6750,2402,120 6,00,5400,2181,950 3,00,2700,1501,393 1,01,350 C pènicilline Vitesse spécifique (en µg.L -1.mn -1 ) µg.L -1 AngieEch 15,0 3,328,5 13,5 3,227,9 12,0 3,127,1 9,0 2,925,0 7,5 2,723,6 6,0 2,421,7 3,0 1,715, Résistance. 2. Antibiotique.

13 C pènicilline Vitesse spécifique (en µg.L -1.mn -1 ) µg.L -1 AngieEch 15,0 3,328,5 13,5 3,227,9 12,0 3,127,1 9,0 2,925,0 7,5 2,723,6 6,0 2,421,7 3,0 1,715, Calculer les Vm et Km des 2 enzymes grâce aux 4 représentations classiques. Lineweaver et Burk1/V = f ( 1/C ) Vm = 1 / b (en µg.L -1.mn -1 ) Km = a / b (en µg.L -1 ) AngieEchantillon 4,4436, Résistance. 2. Antibiotique.

14 C pènicilline Vitesse spécifique (en µg.L -1.mn -1 ) µg.L -1 AngieEch 15,0 3,328,5 13,5 3,227,9 12,0 3,127,1 9,0 2,925,0 7,5 2,723,6 6,0 2,421,7 3,0 1,715, Calculer les Vm et Km des 2 enzymes grâce aux 4 représentations classiques. Hanes - WoolfS/V = f ( S ) Vm = 1 / a (en µg.L -1.mn -1 ) Km = b / a (en µg.L -1 ) AngieEchantillon 4,4436, Résistance. 2. Antibiotique.

15 C pènicilline Vitesse spécifique (en µg.L -1.mn -1 ) µg.L -1 AngieEch 15,0 3,328,5 13,5 3,227,9 12,0 3,127,1 9,0 2,925,0 7,5 2,723,6 6,0 2,421,7 3,0 1,715, Calculer les Vm et Km des 2 enzymes grâce aux 4 représentations classiques. Eadie - HofsizeV = f ( V/S ) Vm = b (en µg.L -1.mn -1 ) Km = a (en µg.L -1 ) AngieEchantillon 4,4436, Résistance. 2. Antibiotique.

16 C pènicilline Vitesse spécifique (en µg.L -1.mn -1 ) µg.L -1 AngieEch 15,0 3,328,5 13,5 3,227,9 12,0 3,127,1 9,0 2,925,0 7,5 2,723,6 6,0 2,421,7 3,0 1,715, Calculer les Vm et Km des 2 enzymes grâce aux 4 représentations classiques. Eisenthal et Cornish-Bowden Vm (en µg.L -1.mn -1 ) Km (en µg.L -1 ) AngieEchantillon 4,4436,11 54 AngieEchantillon AngieEchantillon 4,4436, Résistance. 2. Antibiotique.

17 Indiquer l'activité des deux extraits en µg.mn -1.mL -1 d'extrait. Vm (en µg.L -1.mn -1 ) Km (en µg.L -1 ) AngieEchantillon 4,4436,11 54 activité = Vm / V extrait AngieEchantillon 4,4436,11222,21805,6 Vm (en µg.L -1.mn -1. mL -1 ) 2.2. Résistance. 2. Antibiotique.

18 Que nous apprends ce type d'étude sur la conformation d'une protéine. 3. Conformation. Les parties polaire sont en contact avec le milieu aqueux, tandis que les partie apolaires sont situées à lintérieure de la protéine Pourquoi n'avons nous pas le droit de l'appeler coefficient d'extinction molaire? est exclusivement en L.cm.mol Peut-on localiser le site actif de cette manière? Si les sites actifs se comportent de façon différente, cest quils sont différents Résistance. 2. Antibiotique.


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