Lecture des résultats Culot = Glucose Pente = Lactose

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1 Lecture des résultats Culot = Glucose Pente = Lactose
Résultats: Pente / culot Acide = A Alcalin = K Gaz = G

2 Résultats C = Contrôle 2 = Glucose + lactose – 3 = Glu +, Lac -, H2S +
4 = Glu +. Lac +, Gaz + 5 = Glu +, Lac + H2S +

3 la production de H2S t e s t n é g a t i f : test pozitif:
E . c o l i E n t e r o b a c t e r a e r o g e n e s la production de H2S test pozitif: Salmonella sp. Proteus vulgaris

4 But: Mettre en évidence la phénylalanine désaminase.
La recherche de: APP (acide phényl pyruvique) TDA (tryptophane-phénylalanine désaminase) But: Mettre en évidence la phénylalanine désaminase. Principe: Détection de l’acide phényl pyruvique libéré par l’action de la désaminase sur l’acide aminé. Réactif: Chlorure ferrique

5 Résultats Milieu riche en phénylalanine Réactif : Chlorure ferrique
B = + vert intense

6 Résultats t e s t n é g a t i f : test positif: Proteus vulgaris
E . c o l i Résultats test positif: Proteus vulgaris Providencia sp.

7 La recherche de l’uréase
But: Mettre en évidence l’uréase Principe: L’urée du milieu est hydrolysée et donne de l’ammoniac. Le carbonate d’ammonium produit hausse le pH et change l’indicateur pH est le rouge de phénol.

8 Test de l’uréase

9 Test de l’uréase test négatif: test positif: Salmonella sp.
E.coli test positif: Proteus sp.

10 Tests qui présentent les nécessites nutritives minimales:
- l’utilisation du citrate de sodium - l’utilisation de l’acétate de sodium

11 Citrate But: Vérifier si la bactérie peut utiliser le citrate comme seule source de carbone Principe: Le milieu contient le citrate comme source de carbone et le phosphate d’ammonium comme source d’azote. Lorsque la bactérie utilise le C et le N le pH du milieu deviendra alcalin. L’indicateur bleu de bromothymol passera de vert à bleu.

12 l’utilisation du citrate de sodium
Citrate: source de C Phosphate d’ammonium : source de N Indicateur: Bleu de bromothymol Incubation: 24-48h

13 l’utilisation du citrate de sodium
test positif: Salmonella sp. Enterobacter sp. Klebsiella sp. test négatif: E.coli Shigella sp.

14 Test aditionale – la mobilité

15 Galerie API La première galerie API apparue dans le monde de la microbiologie a été la galerie Api 20E destinée à l'identification des Entérobactéries. Les tests conventionnels d'identification bactérienne utilisés jusque là en tubes y sont miniaturisés, l'inoculum bactérien est standardisé.

16 Etendu à l'identification d'autres micro-organismes, ce principe a généré tout une gamme de galeries : API® 20 NE ou API® 32 GN pour les bacilles à Gram négatif oxydase positif; API® Staph pour les Staphylocoques API® Listeria pour les Listeria API® Candida pour les levures API® NH pour les Neisseria et Haemophilus API® 20 A pour les anaérobies API® Strep pour les Streptococcus

17 Identification par galerie API®
Les galeries Api utilisent plusieurs types de tests : étude de la fermentation de divers glucides, recherche directe d'un enzyme. Chaque tubule contient un substrat différent sur lequel le micro-organisme considéré va réagir. Ils sont remplis d'une suspension bactérienne calibrée (de densité différente selon la galerie).

18 Identification par galerie API®
Pour les substrats dont le sigle est encadré, la cupule doit aussi être remplie de manière à créer un ménisque. Pour les substrats dont le sigle est souligné, la cupule doit être remplie d'huile de paraffine soit pour créer l'anaérobiose (absence d'oxygène), soit pour maintenir en solution les ions volatils produits par la réaction et ainsi assurer le virage de l'indicateur coloré de pH.

19 Identification par galerie API®
Les creux du support de la galerie doivent être remplis d'eau pour former une chambre humide, puis la galerie est posée dans le support et le couvercle par dessus. L'ensemble est incubé à une température adapté pendant 24 à 48h.

20 Galerie API 20E d'E.coli

21 Identification par galerie API®
Après addition des réactifs nécessaires à la révélation de différents tests, la galerie est lue conformément aux indications du fabricant et codée. Pour cela, les tests sont groupés par trois successivement de gauche à droite, les derniers triplets pouvant inclure des caractères bactériens comme la morphologie, le Gram, la mobilité, l'oxydase, la catalase, etc. qui ne sont étudiés dans la galerie mais qui sont indispensables à son interprétation.

22 Identification par galerie API®
Les tests négatifs sont toujours codés 0 alors que le code affecté aux tests positifs varie selon la position du test dans le triplet : 1 pour le premier test, 2 pour le second, 4 pour le troisième. Les 3 résultats du triplet sont additionnés (il existe seulement huit possibilités pour la somme d'un triplet : 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7).

23 Identification par galerie API®
Les sommes de chaque triplet lues de gauche à droite forment un code d'au moins 7 chiffres qui correspond au profil biochimique du micro- organisme étudié. La comparaison de ce code à ceux référencés dans la base de données gérée par Biomérieux permet en général d'identifier ce micro- organisme.

24 Identification par galerie API®
Si le code numérique obtenu ne figure pas dans cette base de données, il peut s'agir d'un profil ou d'un micro-organisme non référencé, mais la cause la plus fréquente reste un problème technique (inoculum non respecté, paraffine oubliée, réactifs périmés, etc.).

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28 Stafilococcus xylosus

29 Entérotubes Microméthode 12 tests

30 Microbac

31 BioMerieux VITEK2