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Gram+ Gram- Coques Bacilles TEST CATALASETEST OXYDASE StaphylococcusMicrococcus EnterococcusStreptococcus Bacillus Lactobacillus Neisseria Acinetobacter.

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1 Gram+ Gram- Coques Bacilles TEST CATALASETEST OXYDASE StaphylococcusMicrococcus EnterococcusStreptococcus Bacillus Lactobacillus Neisseria Acinetobacter PseudomonaceaeVibrionaceaeEnterobacteriaceae Cat+ Cat- Cat+ Cat- Oxy+ Oxy- Oxy+ Oxy- ORIENTATION DE LIDENTIFICATION DIAPO4

2 MACRO-GALERIE Exploration du: Métabolisme énergétique Métabolisme glucidique Métabolisme protidique

3 Métabolisme énergétique VF Hugh et Leifson Bouillon nitraté Type respiratoire Voie dattaque du glucose Présence de Nitrate réductase Différences entre respiration et fermentation Les bactéries chimiotrophes oxydent des molécules organiques et réduisent des coenzymes (NAD+, FAD+, NADP+...) Leur réoxydations passent : - par une chaîne de transporteurs avant de réduire un accepteur final, on parle de respiration (O2 = respiration aérobie, NO3-, NO2-, SO = respiration anaérobie) - par une molécule organique interne, on parle de fermentation

4 Un glucide utilisé prouve que la bactérie peut le faire pénétrer a les enzymes permettant son hydrolyse en ose et possède le métabolisme d'utilisation l'ose. Mise en évidence : d'un produit ou de l'utilisation du substrat d'une enzyme Lecture des résultats par acidification ou alcalinisation du milieu et virage d'un indicateur coloré par la mise en évidence d'un produit formé (chromogène) par culture sur un milieu présentant un substrat unique Métabolisme glucidique

5 Citrate Simmons Hajna Kligler Disque ONPG Mannitol mobilité nitraté Clark Lubs: VP et RM Utilisation du citrate comme source unique de C. Utilisation du glucose, du lactose Production de H 2 S, de gaz. Mise en évidence de lONPG hydrolase Utilisation du mannitol +Mobilité. + Présence de nitrate réductase. Type de fermentation: Acide mixte (RM), Butanediolique (VP).

6 On étudie –La capacité dhydrolyser une protéine –La dégradation de différents acides aminés ou de dérivés azotés comme lurée Mise en évidence –De produit de réaction enzymatique Lecture des résultats –par présence dun indicateur de pH (LDC,ODC, ADH, Uréase) –par lajout dun réactif (Tryptophanase) –par lutilisation dun produit visible à lœil nu (TDA) Métabolisme protidique

7 Urée indole ADH, LDC, ODC Gélatinase Présence de luréase Présence de la TDA Présence dune tryptophanase ou Production dindole Présence de larginine dihydrolase Présence de la lysine décarboxylase Présence de lornithine décarboxylase Présence dune protéase

8 Milieu VF OBSOBS: Culture dans tout le tube INTINT: Bactéries cultivant en présence et en absence dO 2 CC°:CC°: Bactéries aéro-anaérobies

9 Milieu Hugh et Leifson OBS:OBS: Virage coloré du vert au jaune en condition aérobie et anaérobie INT:INT: Acidification du milieu en condition aérobie et anaérobie CC°:CC°: Voie dattaque du glucose fermentaire sans exclure la voie oxydative

10 Métabolisme glucidique Citrate Simmons Hajna Kligler Mannitol mobilité nitraté Clark Lubs: VP et RM Utilisation du citrate comme source unique de C. Utilisation du glucose, du lactose Production de H 2 S, de gaz. Utilisation du mannitol. Mobilité. Présence de nitrate réductase. Type de fermentation: Acide mixte (RM), Butanediolique (VP).

11 Milieu Hajna Kligler : un exemple Culot: OBS OBS:Virage du RP du rouge au jaune. INT: INT: Acidification du milieu donc le Glu a été fermenté en composés acides. CC°: CC°:Glu+ OBS: OBS:Présence de bulles. INT: INT: La fermentation du glucose saccompagne dune production de gaz provoquant la fragmentation de la gélose. CC°: CC°: Gaz+Pente: OBS: OBS: Virage du RP du rouge au Jaune. INT: INT: Acidification du milieu, le glucose est utilisé en 1er mais comme il est en faible quantité la croissance se poursuit grâce à lutilisation du Lactose. CC°: CC°: Lac+ Jonction culot-pente: Pas de production dH2S. H2S-

12 Test ONPG OBS:OBS: Apparition dune coloration jaune INT:INT: Hydrolyse de lONPG en ONP CC°:CC°: Présence de beta galactosidase Bactérie beta galactosidase +

13 Citrate Simmons OBS:OBS: Absence de culture sur milieu citrate Simmons INT:INT: Bactérie ne pouvant pas cultiver avec le citrate comme seule source de C. CC°:CC°: Bactérie Citrate -

14 Milieu Mannitol mobilité Nitraté OBS:OBS: Virage coloré du rouge au jaune INT:INT: Acidification du milieu Utilisation du mannitol CC°:CC°: Bactérie Man+ OBS:OBS: Trouble autour de la piqûre centrale. INT:INT: Diffusion de la bactérie dans la gélose CC°:CC°: Bactérie Mob+ OBS:OBS: Coloration rouge après ajout de Réactif de Griess CC°:CC°: Bactérie a transformé les nitrates du milieu en nitrites Bactérie NRB+ INT:INT: Présence de nitrites.

15 Test RM Test VP +RM +Naphtol +NaOH Milieu Clark Lubs

16 Test RM OBS:OBS: Coloration rouge INT:INT: Acidification du milieu Utilisation du glucose et production dacides mixtes pH<4.5 CC°:CC°: Bactérie RM+ réalisant la fermentation acide mixte

17 Test VP OBS:OBS: Absence de Coloration rouge vif en surface INT:INT: Présence dacétoine CC°:CC°: Bactérie VP+ réalisant la fermentation butanediolique

18 Métabolisme protidique Urée indole ADH, LDC, ODC Présence de luréase Présence de la TDA Production dindole Présence de larginine dihydrolase Présence de la lysine décarboxylase Présence de lornithine décarboxylase

19 Milieu urée-indole Ensemencé avec la bactérie TDA - TDA + INDOLE - INDOLE + Lecture directe de luréase UREASE - UREASE + + FeCl 3 +Kovacs

20 Test uréaseTest TDATest Indole Milieu Urée Indole

21 Test uréase OBS:OBS: Milieu orangé INT:INT: Absence de dégradation de lurée CC°:CC°: Bactérie uréase-

22 Test TDA OBS:OBS: Milieu jaune INT:INT: Pas de production dacide indole pyruvique, la bactérie ne possède pas la tryptophane désaminase. CC°:CC°: Bactérie TDA-

23 Test Indole OBS:OBS: Coloration rouge vif en surface INT:INT: Production dindole grâce à la présence chez la bactérie dune tryptophanase. CC°:CC°: Bactérie indole+

24 ADHLDCODC ADH, LDC, ODC

25 Test ADH OBS:OBS: Coloration jaune du milieu INT:INT: Les bactéries ont acidifié le milieu à partir du glucose mais ne lont pas réalcalinisé en utilisant larginine, les bactéries ne possèdent pas darginine dihydrolase. CC°:CC°: Bactérie ADH-

26 Test LDC OBS:OBS: Coloration violette du milieu INT:INT: Les bactéries ont acidifié le milieu à partir du glucose puis réalcalinisé en décarboxylant lacide aminé la lysine CC°:CC°: Bactérie LDC+

27 Test ODC OBS:OBS: Coloration violette du milieu INT:INT: Les bactéries ont acidifié le milieu à partir du glucose puis réalcalinisé en décarboxylant lornithine. CC°:CC°: Bactérie ODC+

28 Bactéries: Bacille Gram-, oxydase-, AAF, voie dattaque fermentative, NR+. –Enterobactérie Glc+, Lac+, H 2 S-, Gaz+, Man+, Mob +, ODC+, LDC+, ADH-, Ind+ uré-, TDA-, RM+, VP-,.

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