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Les Bacillus. Aspect microscopique Bacilles Gram + présentant une spore Distinction de trois groupes: Bacillus à spore ovale non déformante, Bacillus.

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1 Les Bacillus

2 Aspect microscopique Bacilles Gram + présentant une spore Distinction de trois groupes: Bacillus à spore ovale non déformante, Bacillus à spore ovale déformante, Bacillus à spore ronde déformante À lEF : mobiles le plus souvent par ciliature péritriche

3 Observation au MEB Forme végétative : bacilles à bouts arrondis Forme de résistance : spore dans un environnement favorable permet le développement dun nouveau Bacillus.

4 Bacillus anthracis Observation microscopique Grand bacille (5 µm de long, 1 µm de large), Gram +, Formant une spore ovalaire centrale non déformante. immobiles capsulé Il élabore une toxine comprenant trois facteurs agissant en synergie: facteur I oedématogène facteur II immunogène facteur III létal Caractères biochimiques: AAF, glucose +, non exigeant, VP + (caractère de la classification des Bacillus), gélatinase +, uréase -, maltose +, saccharose +

5 Les milieux de culture des Bacillus Gélose à lamidon Gélose nutritive à 1% damidon de riz ou de pomme de terre Ensemencer par une strie centrale à partir dune suspension bactérienne. Ou en faisant 5 ou 6 dépôts döse sur la gélose Incuber 24 heures à 37°C

6 Gélose à loeuf Gélose trypticase-soja à 10% de jaune dœuf stérile Ensemencer par une strie centrale à partir dune suspension bactérienne. Ou en faisant 5 ou 6 dépôts döse sur la gélose Incuber 24 heures à 37°C

7 Milieu TCA Composition Peptone trypsique de caséine20 g Chlorure de sodium5 g Sulfite de sodium0,5 g Cystine0,5 g Rouge de phénol0,017 g Gélose2,5 g EDqsp 1 L Source N Source de C et N Indicateur de pH pH = 6,8 à 7 Ensemencement Sources minérales Régénérer les milieux 20 min au BM à 100°C. Refroidir les tubes à 45°C. Incorporer le sucre désiré pour une concentration finale de 1% (10g.L -1 ). Solidifier les milieux sous leau froide. Ensemencer par piqûre centrale. Incuber 24 heures à 37°C.

8 Milieu de Mossel Composition Extrait de viande 1 g Peptone10 g Mannitol10 g Chlorure de sodium10 g Rouge de phénol0,025 g Agar12 g EDqsp 1 L Source N Indicateur de pH pH = 7,1 Sources minérales Sources de carbone Au moment de lemploi, ajouter à 90 mL de milieu: 10 mL de jaune dœuf dilué au ½ dans de leau physiologique 1, 2, 5 ou 10 mL de polymyxine à 1 mg/mL (Inhibiteur) Ensemencement Isolement par la technique des quadrants. Cest un milieu disolement sélectif des Bacillus de lespèce Bacillus cereus à partir des aliments ou des selles.

9 Gélose au lait Gélose blanche à 2,5 à 3% dagar en solution dans leau dans laquelle on ajoute la même quantité de lait stérile. Ensemencer en faisant 5 ou 6 dépôts döse sur la gélose Incuber 24 heures à 37°C

10 Recouvrir de lugol la gélose après culture Pas de coloration noire autour des cultures: absence damidon il a été hydrolysé par les bactéries, test positif Coloration noire autour des cultures: présence d amidon test négatif Gélose à lamidon Lecture des milieux Gélose à lœuf Lecture directe: Éclaircissement du milieu de culture les bactéries ont hydrolysé les lécithines du jaune d œuf, test positif Pas de changement du milieu test négatif

11 Gélose Mossel Colonies rouges entourées dun halo opaque et blanchâtre suspicion de Bacillus cereus, LECITHINASE +++ Présence d un halo: hydrolyse des lécithines par une lécithinase, en choline soluble et diglycéride insoluble qui précipite dans le milieu en formant un trouble. Colonies rouges pas d utilisation de mannitol par les bactéries MANNITOL -

12 Lecture directe après culture Halo clair autour de la culture hydrolyse de la caséine, test positif Pas de modification du milieu autour de la culture test négatif, la caséine n est pas hydrolysée. Gélose au lait

13 Correction du TP 1er jour N° impair: Bacilles en chaînette Gram + N° pair: Bacilles en chaînette Gram + présence dune spore déformante dans le bacille.

14 2nd jour N° pair: présence dune spore centrale ovoïde déformante Coloration des spores au vert de Malachite

15 Lecture du VF N° impair: culture en surface AS N° pair: culture dans tout le tube AAF 1ère orientation: bacilles Gram +, mobiles, catalase +, VP+, non exigeants,(sporogène), AS orientation vers le genre Bacillus. 1ère orientation: Bacilles Gram +, mobiles, VP+, non exigeants, sporogènes, AAF orientation vers le genre Bacillus.

16 Lecture des milieux CTA N° impair glucos e Virage de lindicateur de pH glucose + xylose Virage de l indicateur de pH xylose + arabinos e Virage de l indicateur de pH arabinose +

17 N° pair glucos e Virage de l indicateur de pH glucose + xylose Pas de virage de l indicateur de pH xylose - arabinos e Pas de virage de l indicateur de pH arabinose -

18 Lecture de la gélose à lamidon (n°pair et impair) Pas de coloration autour de la culture absence d amidon qui a été hydrolysée par l -amylase des Bacillus. Lecture de la gélose au lait (n°pair et impair) Présence dun halo déclaircissement autour de la culture de la caséine a été hydrolysée par les protéases des Bacillus.

19 Lecture de la gélose à lœuf Présence dun halo clair autour de la culture les lécithines ont été hydrolysées par la lécithinase des Bacillus. n° pair n° impair Pas de modification autour de la culture les lécithines n ont pas été hydrolysées.

20 Lecture de la gélose de Mossel n° pair Colonie rose pas d utilisation du mannitol par les Bacillus MANNITOL - Présence d un halo clair autour de la culture les protéines du jaune d oeuf ont été hydrolysées par les protéases des Bacillus. Présence d un halo opaque autour de la culture les lécithines ont été hydrolysées par la lécithinase des Bacillus. Suspicion de Bacillus cereus Identification de l espèce: Bacillus présentant divers enzymes ( -amylase, lécithinase, protéases), glc +, xylose-, arabinose -, culture caractéristique sur Mossel Bacillus cereus.

21 Lecture de la gélose de Mossel n° impair Colonie jaune Utilisation du mannitol par les Bacillus MANNITOL + Absence d un halo opaque autour de la culture les lécithines n ont pas été hydrolysées par les Bacillus. Il s agit d un Bacillus autre que Bacillus cereus Identification de l espèce: Bacillus présentant divers enzymes ( -amylase, protéases), glc +, xylose+, arabinose + Bacillus subtilis (tableau p 132 du livre).


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