La présentation est en train de télécharger. S'il vous plaît, attendez

La présentation est en train de télécharger. S'il vous plaît, attendez

La culture des bactéries CIVEL / Microbiologie. La culture des bactéries I. Multiplication des bactéries Bactérie mère AllongementInvaginationDivision.

Présentations similaires


Présentation au sujet: "La culture des bactéries CIVEL / Microbiologie. La culture des bactéries I. Multiplication des bactéries Bactérie mère AllongementInvaginationDivision."— Transcription de la présentation:

1 La culture des bactéries CIVEL / Microbiologie

2 La culture des bactéries I. Multiplication des bactéries Bactérie mère AllongementInvaginationDivision 2 bactéries filles La scissiparité

3 La culture des bactéries II. Techniques détude des caractères culturaux Lisolement : Obtention dune colonie pure (ensemble de clones bactériens) En milieu solide : méthode des quadrants

4 méthode des quadrants 2 : Diviser la boîte de petri en 4 quadrants 3 : soulever le couvercle de la boite de Pétri et déposer linoculum (à laide de loese) sur une petite surface au point initial. 4 : stériliser loese et après refroidissement faire des stries serrées sur toute la surface des quadrants 1 et 2 5 : stériliser de nouveau loese et faire des stries serrées sur les quadrants 2 et 3. 6 : stériliser de nouveau loese et faire des stries serrées sur les quadrants 3 et 4. 7 : stériliser loese et placer la boite (correctement identifiée) à lenvers (couvercle vers le bas) dans létuve

5 Isolement sur milieux solides, par la méthode des quadrants

6 Zone riche Colonies isolées Le dépôt est effectué en zone 1- 2, les colonies y sont serrées et petites. - La fin de lisolement se fait en zone 4 : on retrouve des colonies isolées

7 Lisolement : Obtention dune colonie pure (ensemble de clones bactériens) Colonie isolée

8 Lisolement : Obtention dune colonie pure (ensemble de clones bactériens) Variantes

9 Lisolement : Obtention dune colonie pure (ensemble de clones bactériens) Initiales, N°de poste, référence de la souche Ne jamais écrire sur le couvercle !!

10 La culture des bactéries II. Techniques détude des caractères culturaux Lisolement : Obtention dune colonie pure (ensemble de clones bactériens) En milieu solide : méthode des quadrants En milieu solide : méthode par épuisement

11 Face Profil

12 En milieu solide : méthode par épuisement Gélose inclinée Vue de profil Vue de face Stries

13 La culture des bactéries II. Techniques détude des caractères culturaux Lisolement : Obtention dune colonie pure (ensemble de clones bactériens) En milieu solide : méthode des quadrants En milieu solide : méthode par épuisement Lexamen macroscopique En milieu liquide

14 Lexamen macroscopique : En milieu liquide SURFACE : Voile, Anneau CULOT : Couleur, adhérence Importance du trouble + (bulles ? Homogénéïté, couleur…)

15 Lexamen macroscopique : En milieu liquide

16 La culture des bactéries II. Techniques détude des caractères culturaux Lisolement : Obtention dune colonie pure (ensemble de clones bactériens) En milieu solide : méthode des quadrants En milieu solide : méthode par épuisement Lexamen macroscopique En milieu liquide En milieu solide

17 Lexamen macroscopique : Sur milieu solide Létude de colonies

18 Lexamen macroscopique : Sur milieu solide Létude de colonies Taille, forme, relief, contour, aspect de la surface, transillumination, consistance, couleur, présence dun halo…

19

20

21 Halo opaque Halo clair Centre noir (colonie)

22 La culture des bactéries III. Conditions dune culture bactérienne et milieux de culture

23 La culture des bactéries III. Conditions dune culture bactérienne et milieux de culture III.1. Définitions -Milieux de culture = préparation dans laquelle un microorganisme peut se multiplier. Il doit donc comporter tous les éléments nutritifs et les conditions physico-chimiques (pH, T°, concentration en ions…) nécessaires au développement du germe étudié. -Ensemencer = cest introduire un microorganisme dans ou sur un milieu de culture. -Culture = cest le résultat de la multiplication dun microorganisme. -Culture pure = milieu ne contenant quune seule espèce bactérienne. (Notion de clone bactérien)

24 La culture des bactéries III.2 : composition chimique moyenne sèche d'une bactérie ÉlémentsPourcentage (en masse sèche) Carbone50 Oxygène20 Azote14 Hydrogène8 Phosphore3 Soufre1 Potassium1 Sodium1 Calcium0,5 Magnésium0,5 Chlore0,5 Fer0,2 divers0,3 III. Conditions dune culture bactérienne et milieux de culture

25 La culture des bactéries III.3. Composition dun milieu de culture - Source de C et N et dénergie (glucides (C), lipides (C et P), protides (C et N = peptone)) = elles fournissent de lénergie et des matériels cellulaires aux bactéries. Peptones (muscles, cervelle d'animaux, caséine, gélatine, soja...) : contient des aa, fact de croissance, ions, glucides !! - Eléments minéraux = Na +, K +, Cl -, PO 4 2-, Mg 2+ … Ils ont un rôle dans léquilibre physico-chimique (pression osmotique) et les besoins en minéraux de la bactérie (+ CoEnzyme) III. Conditions dune culture bactérienne et milieux de culture

26 La culture des bactéries III.3. Composition dun milieu de culture -Eau = (solvant indispensable à la vie sur terre) rôle majeur dans les réactions de solvatation, hydratation, réactions chimiques et enzymatiques se réalisent majoritairement en milieu aqueux. -Facteurs de croissance = ils stimulent la croissance et sont indispensables à certaines bactéries dites exigeantes (éléments que les bactéries ne savent pas synthétiser). -Agar = composé présent dans les milieux solides. Cest un polyoside extrait dalgues japonaise (=gélose) qui à la propriété dêtre liquide à >56°C et solide à 40°C. (- Autres : indicateur de pH, agents sélectifs…) III. Conditions dune culture bactérienne et milieux de culture

27 La culture des bactéries Exemple : la gélose ordinaire (GO) Peptones = hydrolysat de protéines (source daa) 5 g source dA, N, énergie + facteurs de croissance + apporte des ions Extrait de viande = macération de viande contenant des protéines, glucides, vitamines et sels minéraux. 1g NaCl5gMaintien de la pression osmotique Agar15gSolidifiant, support pour colonie EauQsp 1L Solvatation, hydratation, permet les réactions biochimiques III. Conditions dune culture bactérienne et milieux de culture

28 La culture des bactéries Exemple : le citrate de Simmons Citrate de Sodium1gSeule source de C NaCl5gMaintien de la pression osmotique Sulfate de magnésium0,2gCofacteur enzymatique Dihydrogenophosphate1g Système tampon (limite les variations de pH) Hydrogénophosphate de potassium 1g Bleu de bromothymol0,08gIndicateur de pH Agar15gSolidifiant, support pour colonie EauQsp 1L Solvatation, hydratation, permet les réactions biochimiques III. Conditions dune culture bactérienne et milieux de culture

29 La culture des bactéries IV. Les différents types de milieux de culture Milieux empiriques Milieux synthétiques Milieux semi-synthétiques

30 La culture des bactéries IV. Les différents types de milieux de culture Exemple : la gélose ordinaire (GO) – Nature du milieu : Milieu Empirique Peptones = hydrolysat de protéines (source daa) 5 g source dA, N, énergie + facteurs de croissance + apporte des ions Extrait de viande = macération de viande contenant des protéines, glucides, vitamines et sels minéraux. 1g NaCl5gMaintien de la pression osmotique Agar15gSolidifiant, support pour colonie EauQsp 1L Solvatation, hydratation, permet les réactions biochimiques

31 La culture des bactéries IV. Les différents types de milieux de culture Exemple : le citrate de Simmons – Nature du milieu : Milieu synthétique Citrate de Sodium1gSeule source de C NaCl5gMaintien de la pression osmotique Sulfate de magnésium0,2gCofacteur enzymatique Dihydrogenophosphate1g Système tampon (limite les variations de pH) Hydrogénophosphate de potassium 1g Bleu de bromothymol0,08gIndicateur de pH Agar15gSolidifiant, support pour colonie EauQsp 1L Solvatation, hydratation, permet les réactions biochimiques

32 La culture des bactéries III.4. Caractéristiques physico-chimiques - pH = voisin de la neutralité (7 < pH < 7,5). RQ : certaines bactéries peuvent soit alcaliniser soit acidifier le milieu au cours de leur croissance ce qui peut finir par entraver leur multiplication. On a donc recours à des systèmes tampons pour limiter les écarts de pH (Ex : système KH 2 PO 4 et K 2 HPO 4 ) + Conditions dincubation : - T°C = elle doit être choisie en fonction du germe étudié (en général 37°C) - atmosphère = présence ou absence dO 2 … III. Conditions dune culture bactérienne et milieux de culture

33 La culture des bactéries IV. Les différents types de milieux de culture

34 La culture des bactéries IV.1. Conditionnement - Les milieux liquides = on parle de bouillon de culture. - Les milieux solides = on parle de gélose. Ils peuvent être conditionnés en boite de Pétri ou en tube (gélose inclinée) / agar- agar Isolement : Macroscopie / vérification de pureté IV. Les différents types de milieux de culture

35 La culture des bactéries IV.2. Classification 421. Selon la composition - Milieux empiriques = composition non connue exactement (extrait de viande…) - Milieux synthétiques = composition qualitative et quantitative exactement connue. - Milieux semi-synthétiques = la base est empirique et on additionne une molécule connue. IV. Les différents types de milieux de culture

36 La culture des bactéries IV.2. Classification 422. Selon lutilisation - Milieux de conservation = milieu en général très pauvre - Milieux didentification = milieux servant à identifier le germe (un caractère) - Milieux disolement = milieux servant à séparer les bactéries contenues dans un échantillon polymicrobien pour pouvoir, par la suite, les étudier séparément. IV. Les différents types de milieux de culture

37 La culture des bactéries IV.2. Classification On distingue : a) les milieux disolement non sélectifs : permettent la culture de la plupart des bactéries. (GO, GTS, BCP…) Milieux usuel ou ordinaire : pour les microorganismes non exigeant (peptones, glucide, ions, eau) Milieux enrichis : addition de vitamines, sang... b) les milieux sélectifs = contiennent un inhibiteur ou de conditions de culture défavorable qui empêche la culture des germes sauf celui quon étudie. IV. Les différents types de milieux de culture

38 Les milieux sélectifs : Présence dagents sélectifs Agents sélectifs nature Ex de milieux Bactéries inhibées Cristal violetColorants Drigalski Bactéries Gram positif Desoxycholate Dérivé des sels biliaires Bile BEA Bactéries Gram négatif (et certaines Gram positif) Azide (de Sodium) ? Drigalski BEA

39 Les milieux sélectifs : Présence dagents sélectifs Agents sélectifs nature Ex de milieux Bactéries inhibées Cristal violetColorants Drigalski Bactéries Gram positif Desoxycholate Dérivé des sels biliaires Bile BEA Bactéries Gram négatif (et certaines Gram positif) Azide (de Sodium) ? Acide nalidixique + colimycine Antibiotiques GS + ANC Bactéries à Gram négatif NaCl à 75g/LSelChapman Gram- et certains Gram + (Enterococcus et Streptococcus) CétrimideAntiseptique Gélose au Cétrimide Toutes bactéries sauf les Pseudomonas (et quelques exeptions) Drigalski BEA Chapman

40 Les milieux sélectifs : Présence dose et dindicateur de pH

41

42 La culture des bactéries IV. Les différents types de milieux de culture Milieux empiriques Milieux synthétiques Milieux semi-synthétiques Milieux de conservation Milieux didentification Milieux disolement non sélectifs Milieux disolement sélectifs Milieux denrichissement

43 La culture des bactéries CIVEL / Microbiologie

44


Télécharger ppt "La culture des bactéries CIVEL / Microbiologie. La culture des bactéries I. Multiplication des bactéries Bactérie mère AllongementInvaginationDivision."

Présentations similaires


Annonces Google