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Milieux de culture Alexandrine Barbosa PLC 2 Biotechnologies.

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1 Milieux de culture Alexandrine Barbosa PLC 2 Biotechnologies

2 Milieux de culture Introduction à la présentation du projet Contexte : projet réalisé en soutien Objectifs de la séance : –Au niveau du thème choisi –Au niveau du support choisi Outils informatiques : power point, internet Matériel : ordinateurs, vidéo projecteur

3 Milieux de culture Déroulement de la séance TICE Présentation de la forme de la séance et explication du travail demandé Présentation power point : alternance de phases d’explication, de travail personnel et de discussion collective avec correction Test de mémoire

4 Milieux de culture Les différents milieux de culture Soutien microbiologie 1 ère STL

5 Milieux de culture Les milieux de culture NON SELECTIFS - les milieux usuels : GN, GTS, BCP,BCP CLED - les milieux enrichis : gélose au sang SELECTIFS - les milieux sélectifs des Gram - Drigalski Drigalski Cétrimide TCBS - les milieux sélectifs des Gram + : MRS MRS Chapman et Baird-Parker Ces deux types de milieux peuvent contenir des constituants additionnels : substrats biochimiques et indicateurs pH, permettant de déterminer des caractères biochimiques métaboliques. caractères biochimiques métaboliques

6 Milieux de culture Le métabolisme glucidique Le milieu Kligler Hajna : test d ’auto-évaluationtest d ’auto-évaluation Composition : Extrait de viande de boeuf3 g Extrait de levure 3 g Peptone20 g Chlorure de sodium5 g Citrate ferrique0,3 g Thiosulfate de sodium0,3 g Lactose 10 g Glucose 1 g Rouge de phénol0,05 g Agar (gélose)12 g EDqsp 1 L Equilibre osmotiqueMise en évidence de la formation H 2 S Indicateur de pH 6,5 8,2 pH = 7,4 Source glucidique majoritaireSource glucidique minoritaireSource de C et N

7 Milieux de culture Le métabolisme glucidique 2 Le milieu Citrate de Simmons Sulfate de magnésium0,2 g Phosphate monopotassique 1 g Phosphate bipotassique1 g Citrate de sodium2 g NaCl 5 g Bleu de Bromothymol0,08 g Agar (gélose)15 g EDqsp 1 L Equilibre osmotique Indicateur pH pH = 6,8 Sources minérales Seule source de carbone 6 7,6 A partir des informations données ci-dessus, donnez la particularité et les modalités de lecture de ce milieu.

8 Milieux de culture Le métabolisme glucidique 3 Le milieu Clark et Lubs : à partir de la fiche technique, citez :fiche technique - les 2 tests que l ’on peut réaliser après culture de ce milieu - les noms scientifiques des réactifs utilisés lors de ces tests - les caractères recherchés Quel test ? Quel résultat ?

9 Milieux de culture Le métabolisme protidique Les milieux de Falkow : à partir de l ’animation, expliquez la lecture de ces milieux.l ’animation LDC + ODC - ADH +

10 Milieux de culture Les milieux usuels Le milieu BCP : à l ’aide de la fiche technique, donnez les rôles des différents composants du milieu.fiche technique Composants Rôles Peptones et extraits de viande Lactose Bromocrésol Pourpre Agar Eau Bacillus cereus Colonie lactose …?

11 Milieux de culture Les milieux sélectifs Ce milieu permet de sélectionner les bacilles Gram- de culture facile. Il contient : peptones, extraits de viande et de levure, lactose, désoxycholate de sodium, cristal violet, BBT, thiosulfate de sodium, agar et eau. De quel milieu s ’agit-il ? Quels sont les constituants qui le rendent sélectif ? Citer un genre bactérien qui pourrait y cultiver. Pour vous aider Colonie ……………... + ou - ?

12 Milieux de culture Les milieux sélectifs 2 La gélose au cétrimide : A l ’aide de vos connaissances, que déduisez vous de l ’observation de l ’image ci-contre ? A quel type de constituant correspond le cétrimide ? Le milieu TCBS : Etablissez sa fiche technique. Pour vous aider Colonie …………..………… Suspicion de ……………….

13 Milieux de culture Les milieux sélectifs 3 Le milieu MRS : à partir de vos connaissances, répondez aux questions suivantes : - à partir de sa composition, donnez deux adjectifs pour qualifier ce milieu ? - pour l ’étude de quel genre bactérien l ’utilise t-on ? - quelles sont les conditions d’incubation préconisées ?

14 Milieux de culture Les milieux sélectifs 4 Staphylococcus aureus Chapman colonie …………….? Baird Parker

15 Milieux de culture Staphylococcus aureus Quelle est la démarche d ’identification de cette espèce bactérienne ? 1/ Examen microscopique et test enzymatique Gram : coques Gram + Catalase + 2/ Galerie de genre : VF / MEVAG Staph / CTA + mannitol AAF / fermentatifs du glucose / mannitol + 3/ Milieux sélectifs : Chapman (médical) et Baird-Parker (alimentaire) mannitol + réduction des tellurites, halophile lécithinase +, protéinase + 4/ Tests d ’identification spécifique : recherche de l ’ADNase ADNase +

16 Milieux de culture Conclusion Les sites utilisés : les sites académiques http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/index.html http://stlbioch.apinc.org/dossiers/dossiers.php?id_dossier=2 Connaissez vous un milieu permettant d ’identifier directement une espèce bactérienne ? King A et Pseudomonas aeruginosa Pourquoi ne pas avoir étudié le milieu urée-tryptophane lors du métabolisme protidique ? parce qu ’il n ’est pas un milieu de culture ! Il permet de réaliser des tests biochimiques, prochain thème abordé en soutien via les TICE.tests biochimiques

17 Milieux de culture Critiques de la séance TICE Evaluation de l ’exercice Ont-ils été motivés ? Ont-ils travaillé sérieusement ? Problèmes rencontrés

18 Milieux de culture Conclusion Je recommencerai !!!


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