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Lambda Zap. Cosmids La sonde a identifie les clones 1 et 2 Une sonde faite à partir de la séquence le plus 3 du clone 2 va identifier les clones 3 et.

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1 Lambda Zap

2 Cosmids

3 La sonde a identifie les clones 1 et 2 Une sonde faite à partir de la séquence le plus 3 du clone 2 va identifier les clones 3 et 4

4 Les sondes ( probes) Une sonde est une séquence dADN ou dARN qui peut hybrider avec une séquence complémentaire Cible: 5 AATTCGTATCGATCGTAGATTTACAT 3 Sonde: 3 TTAAGCATAGCTAGCATCTAAATGTA 5 Il faut que lADN cible et la sonde soit dénaturer-simple brin-pour que la sonde puisse se fixer ( donc traitement avec la soude ou chauffé à 95°C pour lADN) Fabrication des sondes dADN: -Random priming -Transcriptase Inverse -Kinase

5 Les sondes et lhybridation Sondes radioactives: p32: B radiation-nucléotide avec le phosphate radioactif sur le alpha, beta ou gamma phosphate.

6 Hybridation des acides nucléiques Le stringence: Les conditions dhybridation et en particulier la concentration de sel et le température. Augmente la concentration de sel réduire la stringence Augmente la température augmente la stringence Sonde souris+banque souris-utilise une stringence forte car les séquences sont identiques Sonde souris+banque mouche-stringence moins forte car les séquences ont divergé pendant évolution. Conditions souvent employées: 0,8M NaCl/citrate, 65°C Formamide: en présence de formamide on réduit la température dhybridation 37°C. Le temps dune hybridation est variable: souvent la nuit Il faut laver les filtres après lhybridation: variable selon lexpérience

7 Sondes froides Digoxigenin: une stéroïde isolé des plantes Liaison covalent avec un nucléotide: incorporé dans une sonde comme les nucléotides normales. Détection avec des anticorps Utilisé le plus souvent dans les sondes ARN


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