Les milieux de culture. titre Notions Théoriques Associées 12 TP 17

1 1. Composition d’un milieu de culture. Eau Le milieu de culture permet le développement des bactéries. Les éléments qui le constituent apportent: Intérêt du milieu Nutriments 1 Source de matière et d’énergie Facteurs de croissance Les peptones sont le produit d'une réaction d'hydrolyse de protéines par une enzyme (trypsine). sucres Protides = peptones Extraits de levures Composition Caractéristiques chimiques adaptées pH Force ionique Mode de préparation Différent types d’utilisation NaCl

2.1.1 2. Les milieux de culture fondamentaux. Ces milieux s’adressent à une large gamme de bactéries. Ils sont plus ou moins riches en fonction de l’exigence des germes visés. 2.1. Les milieux nutritifs ordinaires. 2.1.1. Les milieux de base. Staphylocoques Microcoques Entérobactéries Milieux adaptés aux bactéries non exigeantes. 2.1.1 Entérobactéries lactose: sucre Permet de déterminer le caractère « fermentation du lactose » Bromo-crésol pourpre: indicateur de pH

2.1.2 2. Les milieux de culture fondamentaux. 2.1. Les milieux nutritifs ordinaires. 2.1.2. Les milieux enrichis. Addition de peptones L’amidon neutralise les substances toxiques libérées lors des cultures. Streptocoques 2.1.2 Base nutritive à laquelle on ajoute du sang frais Il permet de déterminer le caractère hémolytique de la souche. Streptocoques

2.2.1 2. Les milieux de culture fondamentaux. Ces milieux inhibent la croissances de certains germes en respectant celle d’une ou plusieurs espèces déterminées. 2.2. Les milieux sélectifs. 2.2.1. Les milieux sélectifs des C+. Bouillon d’enrichissement Favorise la croissance d’un germe. Inhibe la croissance de certains germes. Permet l’obtention de colonies isolées. Gélose d’isolement 2.2.1 Staphylocoques Inhibiteur = NaCl Sucre = Mannitol Permet de déterminer le caractère « dégrade le mannitol » Indicateur coloré de pH = Rouge de phénol

2.2.2 2. Les milieux de culture fondamentaux. 2.2. Les milieux sélectifs. Inhibiteur = Cristal violet 2.2.2. Les milieux sélectifs des B-. Indicateur coloré de pH = Bleu de Bromothymol: Entérobactéries Sucre = lactose Permet de déterminer le caractère « dégrade le lactose » 2.2.2

Exclusivement sur gélose ! Il existe plusieurs variantes 3. Méthode d’isolement. L’isolement est la technique permettant d’obtenir des colonies isolées sur un milieu de culture. 3.1. Technique. Exclusivement sur gélose ! * On prélève l’inoculum avec une œse. * On l’étale sur la gélose jusqu’à épuisement (de l’inoculum) Technique des cadrans - On trace une strie sur la moitié de la boîte. 3.1 - On stérilise l’ œse. On ramasse de l’inoculum dans le cadran précédent. - On trace une strie perpendiculaire. - On stérilise l’ œse. - On trace une dernière strie. * On retourne la boîte et on l’incube 24 h. Il existe plusieurs variantes à 2, 3 ou 4 cadrans

3.2 3. Méthode d’isolement. 3.2. Résultats. Plus il est dense, plus il est long à s’épuiser, plus les colonies isolées se forment loin sur le strie. L’allure de la boîte dépend de la densité de l’inoculum. 3.2 Inoculum très dense. Inoculum peu dense. On recueille une colonie avec une œse pour l’ensemencer dans un milieu neuf (un bouillon le plus souvent). On obtient une culture pure.