LA GALERIE API 20E (travail de Roland FERRY CANNES) 1- Présentation de la galerie Galerie de 20 microtubes prêts à l’emploi permettant de réaliser 23 tests biochimiques afin d’identifier des bacilles Gram – appartenant à la famille des ENTEROBACTERIACEAE. cupule microtube contenant le milieu déshydraté La suspension bactérienne introduite dans le tube dissout les substrats déshydratés.
d’une souche pure sur GNI LA GALERIE API 20E 2- Préparation de l’inoculum 1 seule colonie sur GO isolement Prélèvement d’une souche pure sur GNI 5 mL d’eau distillée stérile Souche pure sur GNI
LA GALERIE API 20E 3- Ensemencement de la galerie API 20 E Introduire la suspension bactérienne dans chaque tube à l’aide d’une pipette Pasteur stérile ouverte, pointe appuyée à l’intérieur et sur le côté pour éviter la formation de bulles Pour certains caractères: Remplir le tube de suspension puis recouvrir d’huile de paraffine Pour les tests : ADH, LDC, ODC, H2S, URE Remplir de suspension le tube et la cupule Pour les tests : CIT VP GEL
LA GALERIE API 20E 4- Lecture de la galerie API 20 E Après 24h d’incubation à 37°C, dans quelles cupules doit-on rajouter des réactifs ? Chlorure de fer III Napht-1-ol Naphtyl-1-amine
LA GALERIE API 20E Tests négatifs Tests positifs 4- Lecture de la galerie API 20 E Les 10 premiers tests Tests négatifs + Réactif TDA + Réactif Kovacs + Réactifs VP 1 et 2 Tests positifs + Réactif TDA + Réactif Kovacs + Réactifs VP 1 et 2
LA GALERIE API 20E Tests négatifs Tests positifs 4- Lecture de la galerie API 20 E Les 10 derniers tests Tests négatifs Tests positifs Après ajout des réactifs Nit 1 et Nit 2 : lecture de la NR (ici NR +)
Lecture directe ou indirecte TABLEAU DE LECTURE DE LA GALERIE MINIATURISÉE API 20E Microtube Substrat : Caractère recherché : Révélateur Lecture directe ou indirecte Test (si nécessaire) Résultat - Résultat + ONPG ONPG = Ortho-Nitro-Phényl-Galactoside ADH LDC ODC Arginine Lysine Ornithine CIT Citrate H2S Thiosulfate de sodium URÉ Urée TDA Tryptophane IND VP Pyruvate de sodium GEL Gélatine GLU à ARA = zymogramme Substrat carboné (glucide) NO2- / N2 Nitrates (NO3-) Beta galactosidase Lecture directe Arginine Dihydrolase Lysine Décarboxylase Ornithine Décarboxylase Rouge de Phénol Lecture directe Utilisation du citrate BBT Lecture directe Production d’H2S Lecture directe Rouge de Phénol Uréase Lecture directe Lecture indirecte Ajouter une goutte de réactif chlorure de fer III Tryptophane désaminase Lecture indirecte Ajouter une goutte de réactif Kovacs Tryptophanase ou production d’indole Lecture indirecte Ajouter 1 goutte de VP1 et VP2 Attendre 10 minutes production d’acétoïne (3-hydroxybutanone gélatinase Lecture directe Utilisation de substrats carbonés (glucides) BBT Lecture directe Lecture indirecte Ajouter 1 goutte de NIT1 et NIT2 et zinc éventuellement Nitrate réductase
LA GALERIE API 20E 5- Identification de la souche Résultats de la galerie : - + + + + 5 2 1 5 7 7 3 5 5 Résultats reportés sur la fiche d’identification Code n°: 5 215 773 (55) Se référer au catalogue pour identifier la souche à l’aide du code