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Méthodes détudes en biologie: Applications de la spectrophotométrie à la détermination dune vitesse réactionnelle. 1 Figure1:Un spectrophotomètre UV-visible(photo.

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1 Méthodes détudes en biologie: Applications de la spectrophotométrie à la détermination dune vitesse réactionnelle. 1 Figure1:Un spectrophotomètre UV-visible(photo personnel)

2 Le Principe dune mesure dabsorbance 2 Figure 2 : Schéma détaillant les organes dun spectrophotomètre (Daprès Yassine Mrabet- Wikipédia.com) Spectroscope à réseau: Sélection de la longueur donde Dipôle électrique où R=f(I)

3 Les étapes pour effectuer une mesure 3 Faire le Blanc Effectuer un spectre dabsorption Réaliser une courbe détalonnage qui fera le lien entre A et C Réaliser la mesure avec une cuve en quartz(UV) ou en plastique(visible)

4 Lien entre les mesures dabsorbances et la vitesse réactionnel 4

5 Un exemple dutilisation de labsorbance : Détermination de lactivité dune enzyme, la LDH 5 La LDH(lactatedéshydrogénase) catalyse selon sa composition en isoformes lun des sens de la réaction suivante: LactatePyruvate LDH NAD + NADH,H + Or le NADH,H + absorbe à 340nm On se placera donc en excès de substrat et de coenzyme pour mesurer lapparition ou la disparition de NADH,H + par spectrophotométrie ce qui conduira a la détermination de la vitesse maximale de la réaction qui est un indicateur de lactivité de lenzyme.

6 limites et contraintes 6 Labsorbption de la lumière nest pas le seul phénomène optique qui se produit Létude cinétique dune réaction implique de perturber le système Elle implique aussi un temps mort Si on veut faire varier les concentrations initiales, cela requiert de nombreuses manipulations différentes La loi de Beer-Lambert impose des concentrations tels que A<2

7 Sources et bibliographie Webographie: grenoble.fr/intra/Organisation/CESIRE/OPT/DocsOptique/Notices/Mo nochrom.pdf grenoble.fr/intra/Organisation/CESIRE/OPT/DocsOptique/Notices/Mo nochrom.pdf Bibliographie: Biochimie médicale-marqueurs actuels et perspective(2 éme édition)- p42-43 (disponible sur google books) 7


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