GlycoScopeTM Plateforme analytique haut débit de glycoanalyse basée sur l'utilisation de lectines Mars 2012 1.

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1 GlycoScopeTM Plateforme analytique haut débit de glycoanalyse basée sur l'utilisation de lectines Mars 2012 1

2 Plateformes Technologiques
Procognia Israel Ltd. Compagnie de biotechnologie offrant des solutions analytiques et thérapeutiques basées sur les glycanes pour les industries pharmaceutiques, de diagnostiques et de recherches Plateformes Technologiques Fondée : (TASE:PRCG) Employés: Location : Ashdod, Israel Buts : Biopharmaceuticals Biomarkers/Diagnostics Glyco-Pharma Stem Cells IP : familles de brevets Obtention de 25 brevets lectines array, algorithmes & applications) Analytique Diagnostique Thérapeutique Stem Cells Analytique : objet de notre présentation avec le Glycoscope Diagnostique : détection des cellules cancéreuses qui présentent un profil glycanique altéré Thérapeutique : Traiter les cellules cancéreuses grâce à la reconnaissance de leur profil glycanique (Ac spécifiques des profils altérés) Cellules souches : éviter de développer des cellules potentiellement tumorales et qui soient par ex toujours pluripotentes.

3 GlycoScopeTM Glycoanalyse haut débit, quantitative et précis avec des kits prêt à l'emploi

4 GlycoScopeTM : Technologie utilisable du clonage à la production
GlycoScopeTM : Technologie utilisable du clonage à la production. Permet l'optimisation des conditions de culture GlycoScopeTM permet le développent et la production des molécules plus rapide et plus efficace Quality by Design : Selection du clone et du milieu de culture optimaux Selection des conditions de cultures optimales Permet de cibler le profil désiré de glycosylation très rapidement Réduction des temps et des coûts de développement économie $MM Augmente la probabilité de succès pour le passage à la nouvelle phase de développement Mise sur le marché + rapide  ~$80M/mois en vente annuelle pour un produit à $1B Réduit le ratio de déchets jusqu'à la production Do It Right First Time

5 Les besoins de Glycoanalyse des industries pharmaceutiques

6 La Glycosylation affecte les protéines:
La Glycosylation joue un rôle important dans les produits biopharmaceutiques La Glycosylation affecte les protéines: Stabilité et demi-vie dans le sérum (e.g. Acide Sialique) Pharmaco-cinétiques et pharmacodynamiques (PK/PD) Immunogénicité (e.g. Gal α) Activité biologique ADCC antibody derivated cell cytotoxicity CDC complement-dependent cytotoxicity Les glycanes dans les Ac affectent la liaison au réception de la Fc ,: Affecte les bioactivitées ADCC and CDC; le facteur critique étant l'activité anti-tumorale

7 Les facteurs procédé qui affectent la Glycosylation du produit
Facteurs clés dans la production de molécules biologiques Lignée cellulaire Clone Composition du milieu Conditions de culture Type de Bioreacteur Température, PO2, pH… Nutriments Durée de la culture Conditions de purification Affecte la synthèse des carbohydrates sur les protéines Hétérogénéité Biosimilaires: des Glycosylations différentes donnent des produits différents non souhaités Inconsistence

8 Plateforme haut débit de Glycoanalyse pour le développement de produits Biopharmaceutiques
GlycoScopeTM  A partir de glycoprotéines intactes  IgG et non-IgG  Analyse complète et automatique des données 1mn/E  Rapide  Haut débit (1-96 échantillons/essai)  Aisée à utiliser  Faibles concentrations (0.1-15µg/ml)  Faible volume

9 GlycoScopeTM Matrices de Lectines Concept technologique intégré

10 Procognia’s Lectin-Array concepte technologique
Douzaines de lectines avec spécificités complémentaires et de chevauchements Profils sensibles à de très faibles changements dans les structures de glycane GlcNAc Glc/man complex Gal/GalNAc α-Gal β-Gal N-linked core Sialic acid untreated Sialic acid removed 1 2 3 4 5 Normalized intensity

11 Empreinte de la protéine
Fonctionnement du GlycoScopeTM Résultats en 4 heures Glycoprotéine Base de connaissance algorithmes Structure glycanique Détection Lectines Array Array scan Binding intact glycoproteins are bound via their glycans to the arrayed lectins. Bound glycoproteins are then detected using a fluorescently labeled protein specific probe. The lectin array is scanned using a microarray scanner to determine fluorescence intensities of spots in the array. The resulting image is converted into a histogram representing the glycan composition fingerprint.- The data from the fingerprints is further processed and deconvoluted by a set of proprietary algorithms to produce a quantitative glycan profile based on lectin-glycan recognition rules Empreinte de la protéine 11

12 GlycoScopeTM Value Proposition

13 GlycoScopeTM vs. HPLC Comparison technique
Application IgG et non-IgG Protocole d'exécution Simple ; travail de technicien Complexe et nécessite une expertise pour la réalisation de la mesure et son interprétation Temps d'obtention des résultats pour 96 échantillons 1 jour de travail 2-6 jours pour préparation des échantillons et LC/MS + 16 jours pour analyse des données Temps de réalisation 2-3 heures >10 jours Quantité d'échantillon 2µg µg Nombre d'échantillon traités/essai Jusqu'à 96 10-20 Temps d'analyse < 1,5 minute (analyse des données automatique) 1,5 hr Equipement nécessaire Slide Scanner HPLC/MS Coût direct/échantillon (Matériels +main d'oeuvre) $150-$200/échantillon $1,000-1,500 pour IgG, $2,000-$4,000 pour protéines complexes

14 Efficacité du GlycoScopeTM démontrée: Performance Comparable à l'HPLC
Pour anticorps monoclonaux (1) Épitopes >20% d'abondance (2) Épitopes <20% d'abondance

15 LeGlycoScopeTM montre des résultats comparables à l'HPLC sur toute la plage d'abondance des glycanes
20 échantillons de 3 différents IgGs testés au cours d'un procédé de dévelopement par le GlycoScope et l'HPLC

16 GlycoScopeTM vs. HPLC comparatif
Applications Screening de Clones Optimisation Milieu Développement à l'échelle Labo des conditions de culture Développement purification échelle Labo Scale up purification échelle labo 6. Contrôle procédé Non applicable Applicable si purifié  Applicable si purifiés Coût direct Faible : Nombreux échantillons/essai faible coût d'obtention Plus de données pour un moindre coût Très fort : Peu d'échantillons/essai à un coût de mise en œuvre 5-50 supérieur Temps pour résultats et capacité d'analyses Résultats même jour & haute capacité de glycoanalyse Prise de décision améliorée et efficace effectué pendant le développement  Développement + rapide et meilleure qualioté produit  Gains en mois & en $Millions Plusieurs jours & analyse peu nombreuses Prise de décision limitée et en retard à un moment critique du développement et de la production  Gros risques de devoir ré-itérer les phase de développement et beaucoup de perte

17 GlycoScopeTM vs. HPLC Comparison Résultats de comparaison additionnels par rapport à l'HPLC sont présentés en appendix B

18 2 ans - Minimise les itérations Do It Right the First Time
GlycoScopeTM: Une technologie unique qui permet d'offrir une grande valeur au développement pré-clinique L'utilisation du GlycoScopeTM (GS) pour la sélection des clones, des milieux et des conditions de culture permet de réaliser la struture de glycosylation désirée en parralèle avec une productivité forte, en moins de temps et à moindre coût Développement Procédé Without GS 2 ans + ~ 1 an d'itérations With GS 2 ans - Minimise les itérations Do It Right the First Time Economise temps et coût de développement  3-9 mois Haut débit et réponse rapide  Réponse en temps réel Sur le marché + rapidement  $80M/mois pour produit de $1B/an

19 Réduit le ratio d'échecs  économie de $KK- $MM
GlycoScopeTM est une technologie unique qui permet de haute valeur ajoutée pour la production GlycoScopeTM permet de piloter le procédé en temps réel pour assurer la qualité et la consistance du produit Les changements de Glycosylation peuvent être détectés au cours d'une de la culture par le GlycoScopeTM Pilotage et réponse en temps réel  Evite le rejet de votre production Réduit le ratio d'échecs  économie de $KK- $MM

20 GlycoScopeTM est un outil analytique de Glycoanalyse bien validé
La précision et la répétabilité du GlycoScopeTM ont été validés avec des douzaines de glycoprotéines et des milliers d'échantillons au cours des phases de développement et de prodcution Avastin, Humira, Rituxan, Erbitux, Herceptin, Remicade, FSH, EPO, FVII, FVIII, et plus envore La plateforme GlycoScopeTM est basée sur des douzaines de lectines, couvrant une large variété de glycanes et ont été vérifiés par HPLC. Cette plateforme a été développée en utilisant une base de plus de 80 glycoprotéines et glycovariants ce qui explique sa grande capacité à identifier les variations de glycosylation, même très faible. Procognia a été impliquée avec succès pour de nombreux projets de développement d'Ac et de complexes protéiques : Biosimilaires et nouvelle molécules avec des compagnies comme Teva, Ferring et d'autres, ainsi que nombreux instituts de recherche

21 Quality Control Procognia est certifié ISO 13485
Les lectines arrays sont produits au standards de l'assurance qualité pharmaceutique SOP’s approuvées Contrôle qualité Documentation (enregistrement des lots, des modifications de contrôle etc.) Les essais de Glycoanalyse incluent: Un standard de calibration Un standard interne Des critères d'acceptation et de rejet des analyses Les équipements de calibration et de maintenance

22 Regulatory Authorities
EMEA La plateforme de glycoanalyse haut débit GlycoScopeTM a été présentée en Octobre 2008 au BMWP FDA La plateforme de glycoanalyse haut débit GlycoScopeTM a été présentée en Novembre 2008 à la FDA 22

23 GlycoScopeTM Etudes de cas

24 GlycoScopeTM Augmente les capacité de sélection du bon clone
Est ce que plus grand producteur est le meilleur clone ? GlycoScopeTM ajoute une nouvelle dimension à votre sreening de clones  Surveille la glycosylation de votre molécule pendant le screening  Sélectionne le clone optimal (la bonne Glycosylation + Productivité) et augmente votre succès en réduisant vos risques

25 GlycoScopeTM Optimisation du milieu de culture
Clone CHO poussant dans différents milieux SFM montre des différences dans les concentration de Galactose * Les barres de même couleur représentent le même échantillon testé en duplicata indépendant Les barres vertes représentent le profil de glycosylation de l'IgG générique de référence

26 Exemple B Effet du milieu sur le profil de Glycosylation
Clone CHO-DG44 poussant sur different SFM montre des différences des contenus en Galactose, High Mannose et Core Fucose * Les barres de même couleur représentent le même échantillon testé en duplicata indépendant Les barres vertes représentent le profil de glycosylation de l'IgG générique de référence

27 Le GlycoScopeTM permet une sélection efficace du meilleur clone et milieu de culture
Différents Clones montrent des différences de contenu en Galactose, High Mannose et Core Fucose * Les barres de même couleur représentent le même échantillon testé en duplicata indépendant Les barres vertes représentent le profil de glycosylation de l'IgG générique de référence

28 Three representative bioreactor runs under different conditions
GlycoScopeTM Permet de sélectionner les conditions optimales de cultures Three representative bioreactor runs under different conditions

29 Cible la Glycosylation désirée pendant la culture

30 GlycoScopeTM Permet de sélectionner les conditions optimales d'ajout de nutriments

31 combination optimale en titre et G0 Faible titre - Optimale G0
Analyse de clusters Screening de 230 échantillons combination optimale en titre et G0 Faible titre - Optimale G0 Titre Haut – faible G0

32 Etude de cas additionnels sont présentés en Appendix C

33 Conclusions des études de cas
Le type de clone et les paramètres procédé, milieu et conditions de culture ont un impact évident sur la productivité et le profil de glycosylation de la protéine : Ils interagissent en plus entre eux Par conséquent, afin de parvenir à un processus optimal, productivité la plus élevée et profil de glycosylation désiré, il est important d'évaluer, à un stade très précoce de la mise au point, une matrice de variété des conditions pour surveiller le profil de glycosylation en plus de la productivité

34 GlycoScopeTM Kit & Services
Générique & Validé Kit pour MAbs Dévéloppement du kit (non-MAb) Formation des utilisateurs Appui technique et analytique Services de Glycoanalyse Optimisation de la préparation de l'échantillon et du domaine d'application Préparation et test d'échantillons de Glyco variant Ajustement des algorithmes d'analyse de la Glycoanalyse (si nécessaire) Libération définitive du protocole de dosage Qualification test Fournitures des kits

35 GlycoScopeTM en résumé
GlycoScopeTM est la méthode de glycoanalyse la plus rapide, la plus facile et efficace sur le marché pour optimiser les processus de développement biologique tout comme assurer un meilleur contrôle du manufacturing Une surveillance étroite de la glycosylation produit tout au long du développement du procédé peut augmenter de manière significative la probabilité de réussite  réduction significative des coûts et des délais de commercialisation  résultat gain potentiel se chiffrant en MM $ La surveillance en temps réel de la glycosylation des produits en cours de production (IPC) permet d'augmenter le niveau de contrôle et peut réduire les résultats incohérent et le ratio de déchets en cas de dysfonctionnement ou d'écarts par rapport aux valeurs de consigne définies GlycoscopeTM increase your chance to succeed

36 Thank You

37 Appendix A Glycoanalyse Centre d'Excellence

38 Glycoanalysis Centre d'Excellence One Stop Shop pour un large éventail de besoins Glycoanalyse
Sur la base de son équipe scientifique hautement qualifiée et d'une vaste expérience dans les défis très complexe de la glycosylation, Procognia propose une large gamme de solutions pour répondre aux divers besoins de glycoanalyse : Analyse GlycoScopeTM  Haut débit  IgG et non-IgG  Faibles concentration & volume Vérifié par HPLC (MALDI) N & O glycanes  Détermination Ratio NANA/NGNA Dossier validation complet Développement procédé Optimisation milieu Contrôle en ligne Manufacturing Etudes de comparabilité Discovery et Recherche Structure - Activité des profils de glycoproteine

39 Comparaison avecl'HPLC
Appendix B Platformed Procognia’s GlycoScopeTM Comparaison avecl'HPLC Février 2012 39 39

40 The GlycoScopeTM Demonstration de résultats Comparables à ceux obtenus par HPLC
Résultats en routine sur un Mab#3 testés par le GlycoScopeTM , comparés aux résultats obtenus par HPLC mAb3/581 HPLC GS mAb3/582 mAb3/382 mAb3/386 mAb3/397 N-linked % High Mannose 2.6 3.0 3.5 5 4.3 6 3.3 Complex 97.4 100 97.0 96.5 95 95.7 94 96.7 G0 71.5 75 70.8 74 74.8 79 77.3 81 78 G1 20.5 23 20.7 24 19 16 12.8 12 15.4 20 G2 2.8 2 1 4.1 Sialic Acid n.d 1.1 1.3 Gal a1-3 Gal Core Fucose 95.0 94.5 93 85 90.7 91.4

41 The GlycoScopeTM suite
Résultats en routine sur un Mab#3 testés par le GlycoScopeTM , comparés aux résultats obtenus par HPLC mAb3/401 HPLC GS mAb3/402 mAb3/405 mAb3/406 mAb3/410 N-linked % High mannose 2.8 3 4 3.5 4.3 7.5 6 Complex 97.2 97 96 96.5 95.7 92.5 94 G0 74.9 79 73.1 80 79.6 81 78.2 74.7 G1 14.9 17 15.2 15 10.5 14 10.7 12.1 G2 4.7 1 4.9 4.4 2.5 Sialic Acid 1.3 2 n.d 1.5 1.8 1.7 Gal a1-3 Gal Core Fucose 91 90.8 88 91.8 83 89.7 82 86 90

42 The GlycoScopeTM suite
Résultats en routine sur un Mab#3 testés par le GlycoScopeTM , comparés aux résultats obtenus par HPLC pendant le procédé de développement sur un an (N=22)

43 The GlycoScopeTM Suite (Customer B)
5 échantillons de Mab#2 testés par le GlycoScopeTM et comparé à l'HPLC Ref. 1 HPLC GS mAb2/3 mAb2/4 mAb2/5 mAb2/6 N-linked % High mannose 1.4 3 2.4 3.1 1 1.6 2.3 2 complex 98.6 97 96.5 99 96.8 96.7 98 G0 77.7 80 71.3 71 69.1 70 63.4 57 73.4 65 G1 17.3 16 22 25 23.6 27 28.9 36 20.8 29 G2 3.6 4.2 6.1 6 4.4 Sialic Acid n.d 4 Gal a1-3 Gal Core Fucose 94.2 88.9 96 93.1 95 1.3 1.1 7

44 The GlycoScopeTM Résultats comparables avec l'HPLC (Customer C)
Resultats de 6 échantillons d'IgG#1 sous différentes conditions de culture testés pour customer C par GlycoScopeTM et comparés à l'HPLC Conditions de culture montrent des différences en G0 détectées GlycoScope et confirmées par HPLC

45 Les signaux des Lectines sont en corrélation linéaire avec la concentration de l'échantillon et comparable à l'HPLC (Customer D)

46 The GlycoScopeTM résultats comparables à l'HPLC (Customer D)
4 échantillons de Mab# testés par GlycoScopeTM et comparés aux résultats HPLC

47 Exemples de cas d'étude utilisant le GlycoScopeTM
Appendix C Effets des paramètres procédé sur le profile de Glycosylation Exemples de cas d'étude utilisant le GlycoScopeTM

48 Impacte du clone/procédé sur le N-glycosylation
Temp shift Feed Rate Clone Media type G1 G2 G0 Gal alpha

49 Effet des paramètres procédé sur la glycosylation des glycoprotéines (Comparaison Bioréacteurs vs. µBioréacteurs 2 types de conditions ont été testées sur des bioréacteurs et desµ Bioreactors: GlycoScopeTM détecte les effets des paramètres procédé sur la glycosylation en temps réel Profiles similaire sont obtenus dans les deux échelles Les résultats du procédé A montrent un G0&SA similaire le D un HMsimilaire

50 Pas d'effet signification du taux de dilution

51 Le niveau d'oxygène dissous affecte la Sialylation
Une augmentation de l'oxygène dissous de 10.5% à 20% augmente de environ 124% (91-176%) l'abondance de l'acide sialique

52 L'augmentation de l'oxygène dissous réduit les niveaux de Core Fucose
Une augmentation de l'oxygène dissous de 10.5% à 20% conduit à une réduction de 15% (8-22%) en Core Fucose L'effet de la concentration d'oxygène dissous sur le % de Core Fucose a été démontré dans 2 essai indépendant experiments

53 Oxygène dissous n'a pas d'effet signification sur G0 et GalAlpha