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Excès d absorption du fer au niveau duodénal et accumulation dans les organes parenchymateux Fatigue chronique, douleurs articulaires Retentissement sur.

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Présentation au sujet: "Excès d absorption du fer au niveau duodénal et accumulation dans les organes parenchymateux Fatigue chronique, douleurs articulaires Retentissement sur."— Transcription de la présentation:

1 Excès d absorption du fer au niveau duodénal et accumulation dans les organes parenchymateux Fatigue chronique, douleurs articulaires Retentissement sur trois organes principaux : le foie : hépatomégalie, cirrhose, hépatocarcinome le pancréas : diabète le cœur : tachycardie, cardiomégalie Traitement efficace (soustractions sanguines) si débuté avant linstallation de complications irréversibles importance du diagnostic précoce Hémochromatose

2 Hétérogénéité génétique Forme transmission gène impliqué localisation protéine Type 2 AR HJV 1q21 hémojuvéline (juvénile) AR HAMP 19q13.1 hepcidine Type 3 AR TFR2 7q22 récepteur 2 de la transferrine Type 4 AD SLC40A1 2q32 ferroportine Type 1 AR HFE 6p21.3 HFE

3 Hémochromatose génétique de type 1 (HFE) : maladie fréquente ou rare ? 3/1000 homozygotes C282Y mais pénétrance < 10% Facteurs liés à lhôte Gènes modificateurs

4 WT Hfe -/- B6 (C57BL/6)D2 (DBA/2) Fer intrahépatique ( g/g poids sec) Des gènes modificateurs modulent laccumulation du fer intrahépatique chez les souris Hfe -/-

5 X F1 Hfe -/- F2 Hfe -/- D2 Hfe -/- B6 Hfe -/- Distance moyenne entre les recombinaisons denviron 30 cM Intercross F2 X

6 1000 F2 Hfe -/- F1 Hfe -/- B6 Hfe -/- D2 Hfe -/- Fer intrahépatique ( g/g poids sec)

7 Criblage du génome sur des animaux F2 obtenus à partir du croisement entre souris B6 et D2 Hfe -/- > génotypes sur la plate-forme Génomique (Génopole de Toulouse)

8 Marqueurs microsatellites Régions flanquantes uniques Séquence répétée (ex : CA) Le nombre de répétitions est très variable entre individus (ici entre souches) B6 D2

9 Marqueurs microsatellites

10

11 Liaison significative avec 5 régions sur les chromosomes 3, 7, 8, 11 and 12 Liaison suggestive avec 5 autres régions FOIE

12 RATE Liaison significative avec une région sur le chromosome 11 Liaison suggestive avec 4 autres régions

13 X X XXX F1 F2 D2B6 89 lignées BXD génotypées pour SNPs Utilisation de lignées recombinantes consanguines BXD pour réduire les régions candidates

14 BXD 9 BXD 21 BXD cM on chr 3 15 cM on chr 7 28 cM on chr 8 64 cM on chr cM on chr 12 Ces trois lignées consanguines BXD présentent toutes une recombinaison dans au moins une des régions dintérêt B6 D2 Utilisation de lignées recombinantes consanguines BXD pour réduire les régions candidates

15 BXD Hfe +/+ D2 Hfe -/- B6 Hfe -/- F1 Hfe +/- X X XX F2 Hfe -/- F1 Hfe +/- F2 Hfe -/- Tests de ségrégation Corrélation génotype / fer intrahépatiquePas de corrélation Corrélation génotype / fer intrahépatiquePas de corrélation

16 Système BeadXpress (Illumina) Génotypage des descendants des 3 lignées (BXD9, 21 et 33) pour un jeu de 96 SNPs

17 BXD33 D2 F2 Hfe -/- Tests de ségrégation pour la lignée BXD33 et la région candidate sur le chromosome 7 BXD33 B6 (F2 Hfe -/-) BXD33 B6BXD33 D2 Hfe +/+ BBBDDD Corrélation génotype / fer intrahépatique (ANOVA; p<0.0001) BBBDDD Pas de corrélation génotype / fer intrahépatique (ANOVA; p=0.93)

18 Hep1 Hep2 B6 D2 2 gènes candidats : Hamp1 et Hamp2 variants influençant la structure vs. variants influençant le niveau dexpression dun transcrit?

19 B6 D2 Hamp1Hamp2 log2(expression génique) 2 gènes candidats : Hamp1 et Hamp2

20 Lexpression de Hamp2 a été mesurée chez 78 souris (B6 x D2) F2 Hfe -/- LightCycler 480 (Roche)7900 HT Real-Time PCR System (Applied Biosystems)

21 Lexpression de Hamp2 dans le foie est régulée en cis Position du gène Hamp2 Hamp2 cis-eQTL Lexpression de Hamp2 a été mesurée chez 78 souris (B6 x D2) F2 Hfe -/-

22 Lallèle B6 au locus Hamp2 est associé à une faible expression du messager Hamp2 et à une forte concentration en fer intrahépatique

23 GTG A CACAACCCTGT GTG G CACAACCCTGT GTG A CACAACCCTGT Hamp1 Hamp2 B6 D2 TGF- inducible early gene (TIEG) responsive element

24 120 souris (B6 x D2) F2 Hfe -/- 120 ARNs extraits du foie 120 ARNs extraits de la rate 120 ADNs 192 SNP génotypés par souris à laide du système BeadXpress (Illumina) tours de génome pour identifier les gènes régulés en cis dans le foie et/ou la rate 88 K mesures dexpression par souris, obtenues à laide de puces à ADN Agilent 4x44K

25 F2 intercross (120 souris F2 Hfe -/- ) Niveaux dexpression génique (44,000 transcrits dans le foie et la rate) Traits quantitatifs cliniques (fer dans le sérum, le foie, la rate…) cQTLeQTL Gènes modificateurs potentiels, à valider Recherche de QTLs Recherche de corrélations Co-localisation génomique Recherche de QTLs

26 B6 D2 Fer dans le foie ( g/g de poids sec) Log2(gene expression) CNRCNR CNR Hamp1Hamp2 AlimentationPuces Agilent 4x44 K Régulation du métabolisme du fer

27 CNRCNR Id1Atoh8 CNRCNR Bmp6Smad7 Log2(gene expression) B6 D2

28 P P TFR2HFE HJV Smad1/5/8 Smad4 HAMP Hepcidine BMPR-II BMPR-I ? ? P P BMP6 HEPATOCYTE Noyau Membrane plasmique Id1 ID1 Smad7

29 Léon Kautz Delphine MeynardValérie Darnaud Flavie Desneulin Hélène Coppin Maria Martinez MPR Aude Saint Pierre Patricia Martinez Olivier Rouquet


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