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SITE DE CARNOULES (AsIII/AsV) = 0,59 (AsIII/AsV) = 0,23 (AsIII/AsV) = 0,10 (AsIII/AsV) = 0,95 AsIII-FeIII Stromatolites AsV-FeIII Précipités jaunes orangés.

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1 SITE DE CARNOULES (AsIII/AsV) = 0,59 (AsIII/AsV) = 0,23 (AsIII/AsV) = 0,10 (AsIII/AsV) = 0,95 AsIII-FeIII Stromatolites AsV-FeIII Précipités jaunes orangés = Tooéléite As=298 As=277 As=175 As=75,7

2 Isoler une espèce bactérienne utilisant l’arsenic comme source énergétique 2 Isoler une souche d’Acidithiobacillus ferrooxidans et étudier son rôle dans la bioremédiation de l’arsenic 1 Prélèvement où est observée une forte disparition de l’arsénite soluble STRATEGIES UTILISEES

3 oxyde les composés réduits du soufre et le fer ferreux acidophile Tolérance aux métaux mésophile source de carbone: CO 2 source d’azote: N 2, NH 4 + Gram négative Acidithiobacillus ferrooxidans

4 ROLE d’A. ferrooxidans % restant en phase aqueuse Titration de l ’arsenic et du fer en présence d’A. ferrooxidans dans le milieu de culture ,511,522,533,54 Jours As III As total Fe II AsIII As Total FeII AsV Disparition d ’AsIII, As et FeII en présence d ’A. ferrooxidans

5 ROLE d’A. ferrooxidans Energie Co-précipitation d ’AsIII et FeIII par A. ferrooxidans CC1 précipité A. ferrooxidans FeII précipité Absorbance normalisée

6 ISOLEMENT D’UNE BACTERIE OXYDANT L’ARSENIC Amplification et Séquençage du gène codant pour l'ARN ribosomal 16S Thiomonas et Burkholderia Prélèvement où est observée une forte disparition de l’arsénite soluble X mois X sous-cultures en milieu (9K pH3,5 + AsIII) oxyde AsIII en AsV n ’oxyde pas AsIII en AsV

7 Dosages arsénite, arséniate, arsenic total dans le surnageant de culture en milieu (9K pH3,5 + AsIII) de Thiomonas DOSAGES ARSENIC 0,51,01,52,02,53,0 Nombre de jours ,0 % restant dans la phase aqueuse As total [As total] ne varie pas AsIII Disparition de l’AsIII AsV Apparition de l’AsV Oxydation de l ’AsIII en AsV par Thiomonas

8 PHYLOGENIE Thiomonas C19 Thiomonas CO2 Thiomonas. thermosulfata ATCC51520 Thiomonas 3AS Thiomonas spYnys1 Thiomonas spYnys Thiomonas cuprina DSM A. caldus DSM8584 A. thiooxidans ATCC19377 A. ferrooxidans ATCC E. coli K

9 PHYSIOLOGIE DE Thiomonas acido-tolérante : pousse à des pH entre 3,5 et 7,6 mésophile : pousse entre 20°C et 37°C autotrophe métabolisme énergétique versatile, ses sources d’énergie étant soit organiques, soit inorganiques

10 ACTIVITE ENZYMATIQUE Extraits bruts « As » Extraits bruts Activité enzymatique plus importante dans les cellules cultivées en présence d’arsenic. Fraction soluble « As » Fraction soluble Fraction membranaire Fraction membranaire « As » Activité enzymatique au niveau des membranes.

11 Cenibacter arsenoxidans Thiomonas aoxA aoxB aoxC aoxDoxyS aoxA aoxB moaA phnD oxyS aoxA aoxB Alcaligenes faecalis ORGANISATION GENETIQUE DU LOCUS aox

12 NORTHERN BLOT Exposition 1h Exposition ON 3,25 9,49 7,46 4,40 2,37 1,35 0,24 Taille kb Le gène de l’arsénite oxydase appartient à un opéron. Taille kb 5,75 Régulation transcriptionnelle en présence de l’arsenic As

13 CONCLUSIONS Bioremédiation de l ’arsenic par précipitation (A. ferrooxidans) et oxydation (Thiomonas). Isolement d’une souche de Thiomonas ayant une arsénite oxydase. Arsénite oxydase localisée dans la fraction membranaire Le gène codant pour l’arsénite oxydase appartient à un opéron. Régulation transcriptionnelle de cet opéron par l’arsenic.

14 PERSPECTIVES Acidithiobacillus ferrooxidans : Etude du métabolisme énergétique du fer ferreux (transcriptome Fe/S 0 ) Analyse des substances exopolymériques extracellulaires Thiomonas sp. Etude de la physiologie de Thiomonas sp. Caractérisation des partenaires physiologiques de l’arsénite oxydase Etude de la régulation de l’opéron aox


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