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Interaction de Neisseria meningitidis avec lendothelium : Un rôle du récepteur béta-2-adrénergique ?

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Présentation au sujet: "Interaction de Neisseria meningitidis avec lendothelium : Un rôle du récepteur béta-2-adrénergique ?"— Transcription de la présentation:

1 Interaction de Neisseria meningitidis avec lendothelium : Un rôle du récepteur béta-2-adrénergique ?

2 Interaction Neisseria meningitidis et cellules endothéliales ? Ezrine recrutée et phosphorylée Rho Cdc 42 Polymerisation dactine Microvillosités ? ? Résistance au flux Internalisation ?

3 Formation des microvillosités Eugene, J Cell Sci 2002

4 PIP2 PIP2 P Rho kinase PKCα Nck interacting kinase PIP2 Recrutement et activation de lezrine Bretscher, Nat Rev Cell Biol 2002

5 Rôle possible des GPCR dans le recrutement et lactivation de lezrine Cant, Mol Biol Cell 2005 Induction de ruffles par lAch. Ces ruffles sont riches en ERM phosphorylée Induction de ruffles par lAch. Ces ruffles sont riches en ERM phosphorylée

6 Linduction des ruffles par Ach nécessite lezrine Linduction des ruffles par Ach nécessite lezrine Rôle possible des GPCR dans le recrutement et lactivation de lezrine Cant, Mol Biol Cell 2005

7 Rôle possible des GPCR dans le recrutement et lactivation de lezrine

8 GRK2 est capable de phosphoryler lezrine sur son site « habituel » dactivation in vitro. GRK2 est capable de phosphoryler lezrine sur son site « habituel » dactivation in vitro. Cette phosphorylation est dépendante de la présence de PIP2 et de G : nécessité activation récepteur ? Cette phosphorylation est dépendante de la présence de PIP2 et de G : nécessité activation récepteur ? Rôle possible des GPCR dans le recrutement et lactivation de lezrine Cant, Mol Biol Cell 2005

9 Le ruffling induit par ACh dépendant de GRK2 et de la phosphorylation de lezrine Le ruffling induit par ACh dépendant de GRK2 et de la phosphorylation de lezrine Dominant négatif GRK2 GRK2 sans activité kinase GRK2 non recrutable Rôle possible des GPCR dans le recrutement et lactivation de lezrine Cant, Mol Biol Cell 2005

10 Induction de lendocytose du récepteur 2 adrénergique par lisprotérénol (agoniste). Cette endocytose est connue pour être dépendante de lactine. Il existe une colocalisation avec les pERM Il existe une colocalisation avec les pERM Rôle possible des GPCR dans le recrutement et lactivation de lezrine Cant, Mol Biol Cell 2005

11 nécessite lezrine. Lendocytose du β2-AR induit par un agoniste, phénomène dépendant de lactine, nécessite lezrine. Rôle possible des GPCR dans le recrutement et lactivation de lezrine Cant, Mol Biol Cell 2005

12 rôle possible des GPCR dans les modifications du cytosquelette dactine rôle possible des GPCR dans la phosphorylation de lezrine via GRK2 certains GPCR sont endocytés après fixation de lagoniste, dans un processus nécessitant lezrine et la polymerisation dactine. Existe-t-il un lien entre la formation de la plaque corticale induite par Nm et un GPCR ? Rôle possible des GPCR dans le recrutement et lactivation de lezrine

13 CCR5 Β2-adrenergic R CXCR4ATI-R Il existe un recrutement de GPCR au niveau de la plaque corticale

14 Linduction de lendocytose (agoniste) du 2AR inhibe le recrutement dezrine Ezrin recruitment 0% 20% 40% 60% 80% 100% control Iso SDF1 MIP1β IL8 AT2 5 à10 x Kd % of recruiting colony β-agonist Ct0,00010,01110 Ezrin recruitment Isoproterenol (μM) 0% 20% 40% 60% 80% 100% % of recruiting colony

15 - 10µM 10µM 1µM 1µM Ezrin recruitment 0% 20% 40% 60% 80% 100% Isoproterenol Propranolol % of recruiting colony Cet effet est bien du à laction spécifique de lisoprotérénol sur son récepteur 2AR Linduction de lendocytose (agoniste) du 2AR inhibe le recrutement dezrine

16 % of recruiting colony Ezrin recruitment ControlPropranolol 10 uM β-antagonist Nm ninteragit pas avec le site actif du 2AR Linduction de lendocytose (agoniste) du 2AR inhibe le recrutement dezrine

17 Control PKA-PS 20uM10uM Forkolin M PKA-PSForkolin M Ezrin recruitment % of recruiting colony Le recrutement dezrine induit par linteraction Nm/ 2AR nest pas dépendant de la voie des protéines G Linduction de lendocytose (agoniste) du 2AR inhibe le recrutement dezrine

18 Il existe une deuxième voie de transduction du signal 2adrénergique

19 Lefkowitz, Science 2005 Il existe une deuxième voie de transduction du signal 2adrénergique

20 Beta-arrestin2-GFP ezrin GRK2-GFP ezrin Ezrin recruitment 0% 20% 40% 60% 80% 100% Control siRNA Arrestin 1+2 sirRNA FLNA sirRNAGRK2 sirRNA Ezrin Il existe une deuxième voie de transduction du signal 2adrénergique

21 30 min 2C43-GFP + isoproterenol 2C43-GFP 90 min150 min210 min270 min Nm, 2AR et microvillosités

22 + iso :

23 * séquence de recrutement des GPCR * si RNA 2AR * vérifier lactivation de 2AR (voie des protéines G) * screening des GRK impliqués A court terme …


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