Groupe de Quantification VIH AC 12

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1 Groupe de Quantification VIH AC 12
Réunion de l’Action Coordonnée AC 12 29 février 2008 Groupe de Quantification VIH AC 12 Christine ROUZIOUX Jean-Christophe PLANTIER

2 ANRS : Working Group for HIV Quantification AC11 Working Group for alternative methods AC12
M Gueudin, JC Plantier (Rouen) I Garrigue (Bordeaux) A Vabret (Caen) C Tamalet, Ph Colson (Marseille) O Ghistau (Rennes) K Saune (Toulouse) D Descamps (Bichat) B Ammelal, (Pitié) A Ganon, V Avettand C Rouzioux (Necker) D Joulia (Côte d ’Ivoire) E Nerrienet (Cambodge) C T Kane (Sénégal) F Rouet (Burkina Faso) M Lien (Vietnam D Rousset, Havlin (Cameroun) M Peeters, Ph Van de Perre (Montpellier) E Menu (I Pasteur) JC Plantier Rouen) C Rouzioux ML Chaix (Necker)

3 Rappel des objectifs Développer des tests pour les essais et les études menées dans les sites ANRS : Test de charge virale: ARN VIH plasmatique Test de diagnostic de l’infection de l’enfant : ADN VIH plasmatique Problème de la diversité génétique des virus VIH-1 Couts et faisabilité des techniques commerciales Groupe d’animation de Virologie : inciter les sites à poser des projets et à s’approprier le sujet de la prise en charge de la virologie sur les sites.

4 Bilan des activités de 2007 Année 2007 : Interactivités fortes des groupes Nord et Sud: grande demande des sites Sud Test ARN VIH ANRS Test de PCR temps réel (LTR) commercialisé par Biocentric (8 E) Implantation en routine sur sites sud (Cote d’Ivoire, Cambodge, Vietnam, Burkina Faso, Cameroun Gabon, Congo). Site de Kesho Bora : Bobo Dioulasso, Mombassa et Durban Visibilité nationale et internationale : positionnement du test : académique de référence permettant d’aborder les deux problèmes posés par la quantification VIH: Les références de quantification L’impact de la diversité génétique

5 Evaluation du test ANRS au long cours
Evaluations en amont et libération des lots sont faites à Necker (exemple) Sensibilité Spécificité En 2008 Evaluation du suivi de qualité des lots sur les sites Témoin HIV++ Contrôle de Qualité Mars 2008

6 Test ARN HIV : Suivi du Témoin HIV++ (Ct et log) selon lots
Ct HIV++; n=87 Log HIV++; n=87 Médiane +/- 0.3 log Moyenne: 32,8 Médiane: 32,8 Moyenne: 3,76 Médiane: 3,71 Reproductibilité du témoin HIV ++ correcte: variabilité par rapport à 3.7 log < +/-0.3log

7 Test ANRS : Programme 2007 Etude de la diversité génétique
Etude des Séquences LTR, RT et ENV PANELS des groupes NORD et SUD (difficultés) Virus sélectionnés sur site (plasmas) , Cameroun, Cambodge et Burkina Faso Etude de son son impact sur la quantification di VIH par les techniques commerciales et par technique ANRS

8 Mosaic structures of HIV-1: Circulating Recombinant Forms (CRFs) n= 27
CRF01_AE CRF10_CD CRF02_AG CRF11_cpx CRF03_AB CRF12_BF CRF04_cpx CRF13_cpx CRF05_DF CRF14_BG CRF06_cpx Au dela de 2 recombinaisons entre sous type = forme complexe Nouveaux sous types ne sont pas forcement les plus complexes Les 10 derniers ont été décrit dans les 2 dernieres années CRF15_AEB CRF07_BC CRF16_A2D CRF08_BC A B C D E F G H J K U B A2 CRF01_AE

9 Comparaison des techniques bDNA Bayer et PCR temps réel ANRS (F Rouet J Aids 2007)

10 Comparaison des techniques Roche Cobas Monitor et PCR temps réel ANRS (F Rouet 2007)

11 COHORTE COPANA ANRS (patients en France inclus avant la mise sous traitement)
28 centres 540 patients VIH à J0 5 techniques commerciales Quantification ARN VIH 1 en technique commerciale sur site «local» (n=505) Cobas Amplicor n=202 Cobas taqman n=80 bDNA n=116 Abbott real time n=38 NASBA n=5 « Autres» n=64 Quantification ARN-VIH 1 avec le kit LTR Biocentric ANRS sur site Necker (n=540) Comparaison technique ANRS LTR avec chacune des techniques commerciales (n=505)

12 Comparaison du test ANRS à la technique Roche Taqman Etude de Corrélation n=80

13 Comparaison Techniques LTR-ANRS / Roche Cobas Taqman Méthode de Bland-Altman n=79

14 Comparaisons de la technique ARN VIH ANRS avec les techniques commerciales
N Difference > 0.7log < 0.7log LTR- T Com. Roche Amplicor 196 + 0,28 log 21% 3% Roche Taqman 79 + 0,25 log 18% 1% b-DNA 107 + 0,41 log 23% 6% Abbott 38 + 0,22 log 11% 5% 117 + 0,38 log 26% Copana PRIMO

15 Panel Nord ANRS Composition

16 PCR ADN VIH ANRS Diagnostic de l’infection de l’enfant Recommandations OMS utilisation du test Roche

17 Test de quantification de l’ADN VIH :
Développement d’un test de diagnostic NNé : unanimité dans les sites Sud : test sang total déposé sur buvard, avec extraction chelex (E Nerriennet et N Ngo) Test semi-quantitatif en Kit Biocentric Étude de coût : 4/5 euros Contrôle qualité ADN VIH (Nord/Sud)

18 Diagnostic précoce de l’infection pédiatrique à VIH au Cambodge Utilisation de l’approche ANRS « PCR ADN en temps réel » sur papier buvard Ngin S.1, Horm Srey V.1, Nouhin J.1, Ngo N.2, Tun S.1, Burgard M.3, Ung V.4 Kruy Leang.S.5, Rouzioux C.3, and Nerrienet E.1 5 (PARIS 2007) : . 98 échantillons de bébés : « Buffy coat » déposés sur buvards et testés par PCR ADN VIH en comparaison au plasma sanguin testé par PCR ARN VIH ADN VIH ADN VIH - ARN VIH (- puis +) ARN VIH CONCLUSIONS : Technique de PCR ADN VIH faisable sur buvards (culots PBMC), Développements à poursuivre, avec essais de tests sur dépôts de 50 à uL SANG TOTAL sur papiers buvards (par piqûre au talon pour faciliter les prélèvements en maternité)

19 Publications du test ANRS
20 publications ( ) 12 en Cote d’Ivoire, 2 au Cambodge, 1 en France 3 au Burkina Faso, 1 en Argentine, 1 au Kenya 4 présentations orales 3 posters ( Kesho Bora : CROI) 1 thèse d’Université (F Rouet) :

20 Projets du groupe Projets de site ou projets collectifs : demande de budget autonome (CSS6) Peditest DBS : projet de site Abidjan : mise en place du diagnostic BB sur papier buvards par PCR ADN VIH ANRS, pour permettre le passage à l’échelle et étudier la faisabilité dans les conditions ivoiriennes (couvre la région d’Abidjan) FINANCE 2008 Projet quantification “Enfant” : suivi virologique des enfants infectés ( E Nerrienet : Cambodge + Cameroun) 2008 Projet Adultes Buvards : sérologie, CV, Résistance (JC Plantier AC 11/12),

21 Utilisation des Papiers - Buvards : DBS
Beaucoup de discussions La décentralisation et la question de la biologie Premier travail effectué au NORD (travail soumis) en multicentrique (6 labos AC 11) : la qualité des papiers est importante :attention à la collecte des échantillons Nombreux problèmes non résolus : faisabilité, température de conservation (T ambiante, -20°c, -80°c),

22 Bilan Bilan plutot POSITIF Le test ARN VIH : 50 000 tests en 2007
Le test ADN VIH : prototype est au Cameroun, au Cambodge et en Cote d’Ivoire Les équipes SUD sont motivées et enthousiastes

23 Perspectives Passer à l’étape supérieure…comment?? Les problèmes techniques sont quasi résolus Role des test pour modifier les marchés Problèmes d’approvisionnement de réactifs : plus simples que pour les tests commerciaux Réflexion à engager sur la biologie, en particulier sur la CV, dans la prise en charge des patients dans les pays du SUD - recherches opérationnelles à engager - partenaires??