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Hépatites A, Hépatites A, lintérêt de la PCR Les 8éme Journées de RHEVIR 23/09/05 BENOIT PONSEILLÉ

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1 Hépatites A, Hépatites A, lintérêt de la PCR Les 8éme Journées de RHEVIR 23/09/05 BENOIT PONSEILLÉ

2 Hépatites A, Hépatites A, lintérêt de la PCR Les 8éme Journées de RHEVIR 23/09/05 BENOIT PONSEILLÉ

3 Introduction 1 ère cause dhépatite aiguë chez lenfant 1 ère cause dhépatite aiguë chez lenfant –Pays sous développé –Pays industrialisé Transmission: Transmission: –oro-fécale +++ –parentérale (facteur VIII) Virus ARN simple brin Virus ARN simple brin Virus nu résistant ++ Virus nu résistant ++

4 Moyens diagnostics Diagnostic indirect ++ Diagnostic indirect ++ –Sérologie : ELISA Diagnostic direct Diagnostic direct –Culture –Antigénémie –Recherche du génome par PCR IgM= Hépatite aigue

5 Technique damplification génomique: PCR Faible variabilité génomique entre les souches Faible variabilité génomique entre les souches Virus à ARN Virus à ARN Nécessité de quantification de la virémie Nécessité de quantification de la virémie Reverse transcription PCR ( RT-PCR) PCR quantitative en temps réel

6 RT- PCR qualitative ciblé sur 3 régions différentes (VP3/VP1;VP1/VP2;VTR) RT- PCR qualitative ciblé sur 3 régions différentes (VP3/VP1;VP1/VP2;VTR) Technique « maison » Technique « maison » Très sensible et spécifique Très sensible et spécifique Pas de quantification Pas de quantification Technique damplification génomique: PCR

7 RT PCR kit light cycler RT PCR kit light cycler –Kit commercial – facile dutilisation –Permet quantification gamme d étalonnage

8 Diagnostic Diagnostic –Précocité du diagnostic Virémie présente: Virémie présente: – 30 jours avant survenue des symptômes – en moyenne 10 jours avant lapparition des IgM. 80% PCR HAV + 14 jours avant 80% PCR HAV + 14 jours avant le pic ALT Virémie persiste 70 jours Virémie persiste 70 jours Intérêt de la PCR

9 - Contagiosité Charge virale moyenne retrouvée: Charge virale moyenne retrouvée: –Sanguine: 10.5 cp/ml –Selles : 10.9 cp/ml –Salive : 10.3 cp/ml –Urines : pas excrétion urinaire Voie sanguine infectieux que voie fécale Voie sanguine infectieux que voie fécale PCR HAV + dans les selles PCR HAV + dans les selles –49 jours en moyenne – 21 jours après début symptômes Intérêt de la PCR Intérêt de la PCR

10 Intérêt de la PCR –Quantification charge virale sérique (CHU Lapeyronie, service virologie) (CHU Lapeyronie, service virologie) AgeSexeIgMPCR(IU/ml) 163M+ 2,6. 10³ 228M ³ 345M+ 3,3. 10³ 427M+ 9,2. 10³ 536M+ 0,25. 10³ 626M ³ 747M ³ 814M ³ 97M ³ 1040F ³ 1134M+ 4,2. 10³

11 Pronostic Pronostic –Pas corrélation entre charge virale/ durée virémie et gravité –Cas à part: Hépatite fulminante Virémie indétectable ou effondrée Virémie indétectable ou effondrée Faible virémie = marqueur fortement associé à une défaillance hépatique ( réponse immunitaire) Faible virémie = marqueur fortement associé à une défaillance hépatique ( réponse immunitaire) Intérêt de la PCR -Aide au choix de la transplantation; Encéphalopathie +V effondré+ virémie indétectable

12 Epidemiologique Epidemiologique –Séquencage du virus amplifié génotype des virus Intérêt de la PCR Génotype Ia et Ib les plus fréquents - Impact du génotype aucun sur la charge virale et virulence aucun sur la charge virale et virulence Virémie plus longue en cas de Génotype Ia Virémie plus longue en cas de Génotype Ia Différenciation cas isolé – début dépidémie

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