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Groupe de Quantification VIH AC 12 Christine ROUZIOUX Jean-Christophe PLANTIER Réunion de lAction Coordonnée AC 12 29 février 2008.

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1 Groupe de Quantification VIH AC 12 Christine ROUZIOUX Jean-Christophe PLANTIER Réunion de lAction Coordonnée AC février 2008

2 ANRS : Working Group for HIV Quantification AC11 Working Group for alternative methods AC12 M Gueudin, JC Plantier (Rouen)M Gueudin, JC Plantier (Rouen) I Garrigue (Bordeaux)I Garrigue (Bordeaux) A Vabret (Caen)A Vabret (Caen) C Tamalet, Ph Colson (Marseille)C Tamalet, Ph Colson (Marseille) O Ghistau (Rennes)O Ghistau (Rennes) K Saune (Toulouse)K Saune (Toulouse) D Descamps (Bichat)D Descamps (Bichat) B Ammelal, (Pitié)B Ammelal, (Pitié) A Ganon, V AvettandA Ganon, V Avettand C Rouzioux (Necker)C Rouzioux (Necker) D Joulia (Côte d Ivoire) E Nerrienet (Cambodge) C T Kane (Sénégal) F Rouet (Burkina Faso) M Lien (Vietnam D Rousset, Havlin (Cameroun) M Peeters, Ph Van de Perre (Montpellier) E Menu (I Pasteur) JC Plantier Rouen) C Rouzioux ML Chaix (Necker)

3 Rappel des objectifs Développer des tests pour les essais et les études menées dans les sites ANRS :Développer des tests pour les essais et les études menées dans les sites ANRS : –Test de charge virale: ARN VIH plasmatique –Test de diagnostic de linfection de lenfant : ADN VIH plasmatique –Problème de la diversité génétique des virus VIH-1 –Couts et faisabilité des techniques commerciales Groupe danimation de Virologie : inciter les sites à poser des projets et à sapproprier le sujet de la prise en charge de la virologie sur les sites.Groupe danimation de Virologie : inciter les sites à poser des projets et à sapproprier le sujet de la prise en charge de la virologie sur les sites.

4 Bilan des activités de 2007 Année 2007 : Interactivités fortes des groupes Nord et Sud: grande demande des sites SudAnnée 2007 : Interactivités fortes des groupes Nord et Sud: grande demande des sites Sud Test ARN VIH ANRSTest ARN VIH ANRS –Test de PCR temps réel (LTR) –commercialisé par Biocentric (8 E) –Implantation en routine sur sites sud (Cote dIvoire, Cambodge, Vietnam, Burkina Faso, Cameroun Gabon, Congo). –Site de Kesho Bora : Bobo Dioulasso, Mombassa et Durban –Visibilité nationale et internationale : positionnement du test : académique de référence permettant daborder les deux problèmes posés par la quantification VIH: Les références de quantificationLes références de quantification Limpact de la diversité génétiqueLimpact de la diversité génétique

5 Evaluation du test ANRS au long cours Evaluations en amont et libération des lots sont faites à Necker (exemple) Sensibilité SpécificitéEvaluations en amont et libération des lots sont faites à Necker (exemple) Sensibilité Spécificité En 2008 Evaluation du suivi de qualité des lots sur les sites Témoin HIV++ Contrôle de Qualité Mars 2008En 2008 Evaluation du suivi de qualité des lots sur les sites Témoin HIV++ Contrôle de Qualité Mars 2008

6 Test ARN HIV : Suivi du Témoin HIV++ (Ct et log) selon lots Ct HIV++; n=87Log HIV++; n=87 Moyenne: 3,76 Médiane: 3,71 Moyenne: 32,8 Médiane: 32,8 Médiane +/- 0.3 log Reproductibilité du témoin HIV ++ correcte: variabilité par rapport à 3.7 log < +/-0.3log

7 Test ANRS : Programme 2007 Etude de la diversité génétiqueEtude de la diversité génétique –Etude des Séquences LTR, RT et ENV PANELS des groupes NORD et SUD (difficultés)PANELS des groupes NORD et SUD (difficultés) Virus sélectionnés sur site (plasmas), Cameroun, Cambodge et Burkina FasoVirus sélectionnés sur site (plasmas), Cameroun, Cambodge et Burkina Faso –Etude de son son impact sur la quantification di VIH par les techniques commerciales et par technique ANRS

8 Mosaic structures of HIV-1: Circulating Recombinant Forms (CRFs) n= 27 CRF01_AE CRF03_AB CRF02_AG CRF04_cpx CRF05_DF CRF06_cpx CRF07_BC CRF08_BC CRF10_CD CRF11_cpx CRF12_BF CRF13_cpx CRF14_BG CRF15_AEB CRF16_A 2 D ABC DEFGH JKUB A2 CRF01_AE

9 Comparaison des techniques bDNA Bayer et PCR temps réel ANRS (F Rouet J Aids 2007)

10 Comparaison des techniques Roche Cobas Monitor et PCR temps réel ANRS (F Rouet 2007)

11 COHORTE COPANA ANRS (patients en France inclus avant la mise sous traitement) –28 centres –540 patients VIH à J0 –5 techniques commerciales Quantification ARN VIH 1 en technique commerciale sur site «local» (n=505)Quantification ARN VIH 1 en technique commerciale sur site «local» (n=505) Cobas Amplicor n=202Cobas Amplicor n=202 Cobas taqman n=80Cobas taqman n=80 bDNA n=116bDNA n=116 Abbott real time n=38Abbott real time n=38 NASBA n=5NASBA n=5 « Autres» n=64« Autres» n=64 Quantification ARN-VIH 1 avec le kit LTR Biocentric ANRS sur site Necker (n=540)Quantification ARN-VIH 1 avec le kit LTR Biocentric ANRS sur site Necker (n=540) –Comparaison technique ANRS LTR avec chacune des techniques commerciales (n=505)

12 Comparaison du test ANRS à la technique Roche Taqman Etude de Corrélation n=80

13 Comparaison Techniques LTR-ANRS / Roche Cobas Taqman Méthode de Bland-Altman n=79

14 Roche Amplicor ,28 log 21% 21% 3% 3% Roche Taqman ,25 log 18% 18% 1% 1% b-DNA ,41 log 23% 23% 6% 6% Abbott38 + 0,22 log 11% 11% 5% 5% Roche Taqman ,38 log 26% 26% 3% 3% PRIMO Copan a Comparaisons de la technique ARN VIH ANRS avec les techniques commerciales N Difference > 0.7log < 0.7log LTR- T Com.

15 Panel Nord ANRS Composition

16 PCR ADN VIH ANRS Diagnostic de linfection de lenfant Recommandations OMS utilisation du test Roche

17 Test de quantification de lADN VIH :Test de quantification de lADN VIH : –Développement dun test de diagnostic NNé : unanimité dans les sites Sud : test sang total déposé sur buvard, avec extraction chelex (E Nerriennet et N Ngo)test sang total déposé sur buvard, avec extraction chelex (E Nerriennet et N Ngo) Test semi-quantitatif en Kit BiocentricTest semi-quantitatif en Kit Biocentric Étude de coût : 4/5 eurosÉtude de coût : 4/5 euros –Contrôle qualité ADN VIH (Nord/Sud)

18 Diagnostic précoce de linfection pédiatrique à VIH au Cambodge Utilisation de lapproche ANRS « PCR ADN en temps réel » sur papier buvard :.:. Ngin S. 1, Horm Srey V. 1, Nouhin J. 1, Ngo N. 2, Tun S. 1, Burgard M. 3, Ung V. 4 Kruy Leang.S. 5, Rouzioux C. 3, and Nerrienet E. 1 5 ( PARIS 2007) 98 échantillons de bébés : « Buffy coat » déposés sur buvards et testés par PCR ADN VIH en comparaison au plasma sanguin testé par PCR ARN VIH ADN VIH + ADN VIH - ARN VIH (- puis +) ARN VIH CONCLUSIONS : Technique de PCR ADN VIH faisable sur buvards (culots PBMC), Développements à poursuivre, avec essais de tests sur dépôts de 50 à 100 uL SANG TOTAL sur papiers buvards (par piqûre au talon pour faciliter les prélèvements en maternité)

19 Publications du test ANRS 20 publications ( ) 12 en Cote dIvoire, 2 au Cambodge, 1 en France 3 au Burkina Faso, 1 en Argentine, 1 au Kenya20 publications ( ) 12 en Cote dIvoire, 2 au Cambodge, 1 en France 3 au Burkina Faso, 1 en Argentine, 1 au Kenya 4 présentations orales 3 posters ( Kesho Bora : CROI) 1 thèse dUniversité (F Rouet) :1 thèse dUniversité (F Rouet) :

20 Projets du groupe Projets de site ou projets collectifs : demande de budget autonome (CSS6)Projets de site ou projets collectifs : demande de budget autonome (CSS6) Peditest DBS : projet de site Abidjan : mise en place du diagnostic BB sur papier buvards par PCR ADN VIH ANRS, pour permettre le passage à léchelle et étudier la faisabilité dans les conditions ivoiriennes (couvre la région dAbidjan) FINANCEPeditest DBS : projet de site Abidjan : mise en place du diagnostic BB sur papier buvards par PCR ADN VIH ANRS, pour permettre le passage à léchelle et étudier la faisabilité dans les conditions ivoiriennes (couvre la région dAbidjan) FINANCE 2008 Projet quantification Enfant : suivi virologique des enfants infectés ( E Nerrienet : Cambodge + Cameroun)2008 Projet quantification Enfant : suivi virologique des enfants infectés ( E Nerrienet : Cambodge + Cameroun) 2008 Projet Adultes Buvards : sérologie, CV, Résistance (JC Plantier AC 11/12),2008 Projet Adultes Buvards : sérologie, CV, Résistance (JC Plantier AC 11/12),

21 Utilisation des Papiers - Buvards : DBS Beaucoup de discussionsBeaucoup de discussions La décentralisation et la question de la biologieLa décentralisation et la question de la biologie Premier travail effectué au NORD (travail soumis) en multicentrique (6 labos AC 11) : la qualité des papiers est importante :attention à la collecte des échantillonsPremier travail effectué au NORD (travail soumis) en multicentrique (6 labos AC 11) : la qualité des papiers est importante :attention à la collecte des échantillons Nombreux problèmes non résolus : faisabilité, température de conservation (T ambiante, -20°c, -80°c),Nombreux problèmes non résolus : faisabilité, température de conservation (T ambiante, -20°c, -80°c),

22 Bilan Bilan plutot POSITIFBilan plutot POSITIF Le test ARN VIH : tests en 2007Le test ARN VIH : tests en 2007 Le test ADN VIH : prototype est au Cameroun, au Cambodge et en Cote dIvoireLe test ADN VIH : prototype est au Cameroun, au Cambodge et en Cote dIvoire Les équipes SUD sont motivées et enthousiastesLes équipes SUD sont motivées et enthousiastes

23 Perspectives –Passer à létape supérieure…comment?? –Les problèmes techniques sont quasi résolus –Role des test pour modifier les marchés –Problèmes dapprovisionnement de réactifs : plus simples que pour les tests commerciaux – Réflexion à engager sur la biologie, en particulier sur la CV, dans la prise en charge des patients dans les pays du SUD - recherches opérationnelles à engager - partenaires??


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