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Microbiologie LÉtude des Microorganismes. Définition dun Microorganisme Dérivé du grec: Mikros, «petit» et Organismos, «organisme» –Organisme microscopique.

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1 Microbiologie LÉtude des Microorganismes

2 Définition dun Microorganisme Dérivé du grec: Mikros, «petit» et Organismos, «organisme» –Organisme microscopique qui comprend soit une seule cellule (unicellulaires) ou amas de cellules identiques (non différentiées) –Ils comprennent les bactéries, les champignons, les algues, les virus, et les protozoaires 2

3 Travailler en Microbiologie La Technique Stérile

4 Le Matériel Le matériel utilisé pour la culture et la manipulation de microorganismes doit être stérile et maintenu stérile –Milieu de culture –Éprouvettes –Assiettes de Pétris –Boucle densemencement –Etc.

5 Utiliser la technique stérile pour tous les transferts de microorganismes –Préviens la contamination de vos cultures –Préviens la contamination de votre environnement –Préviens la contamination de soi Toutes les bactéries sont des opportunistes

6 Transferts par la Technique Stérile Stériliser la boucle densemencement au bruleur –Le fil entier doit devenir rouge Ne pas déposer sur la table! Laisser refroidir Boucle densemencement

7 Transferts par la Technique Stérile Retirer le capuchon avec le petit doigt de la main qui tient la boucle dinoculation –Ne pas déposer le capuchon sur la table! Enlever capuchon

8 Transferts par la Technique Stérile Chauffer louverture du tube au bruleur –Garder lorientation du tube aussi prêt de lhorizontal que possible –Garder louverture du capuchon vers le bas Réchauffement de louverture

9 Transferts par la Technique Stérile Utiliser la boucle stérile pour retirer linoculum –Liquide de bouillons –Solide de géloses –Solide de pentes Retirer linoculum

10 Transferts par la Technique Stérile Chauffer louverture du tube au bruleur encore une fois! –Garder lorientation du tube aussi prêt de lhorizontal que possible Réchauffement de louverture

11 Transferts par la Technique Stérile Remettre le capuchon sur la culture pure Retourner le tube au support à éprouvettes Refermer le tube

12 Transferts par la Technique Stérile Répéter les mêmes étapes pour inoculer le nouveau tube –Retirer capuchon –Chauffer louverture –Inoculer –Chauffer louverture –Fermer le tube Inoculation

13 Microorganismes en Laboratoire Les Milieux de Croissance

14 Buts Croissance sous des conditions contrôlées Maintien Isolation de cultures pures Tests métaboliques

15 Types Liquides (bouillons) –Permets la culture en suspension –Distribution uniforme des éléments nutritifs, environnementaux et autres –Permets la croissance de grands volumes Milieux Solides –Mêmes que milieux liquides + agent de solidification Lagar : Polysaccharide dérivé dune algue

16 La Croissance en Bouillon Non-inoculé Limpide Turbide + sédiment Limpide + sédiment Turbide

17 Croissance sur Gélose Croissance sur surface solide Croissance isolée Permets lisolation de colonies simples Permets lisolation de cultures pures Colonie simple

18 Milieux Solides (suite) Pente –Croissance en surface et en profondeur –Différentes disponibilités doxygène –Entreposage à long terme Tube profond –Milieu semi-solide –Entreposage à long terme –Faible disponibilité doxygène

19 La Microscopie Les Colorations

20 Colorations Simples Coloration positive –Coloration du spécimen –Coloration indépendante de lespèce Colorations Négatives –Coloration de lenvironnement de fond –Coloration indépendante de lespèce

21 Méthodes Coloration simple: –Un seul agent de coloration –Permet de déterminer la taille, la forme, et larrangement des cellules

22 Les Formes Cellulaires Coccus: –Sphères –Division sur 1,2 ou 3 plans –Nombre de plans de division donne différents arrangements –Arrangements typiques de différents genres bactériens

23 Les Cocci (Coccus) Diplococcus Streptococcus (4-20) Tétrade Staphylococcus ArrangementsPlans de division

24 Les Formes Cellulaires (suite) Bacilles: –Bâtonnets –Division sur 1 plan seulement –Arrangements typiques de différents genres bactériens

25 Les Bacilles Diplobacille Streptobacille ArrangementsPlans de division

26 Quantifier les Microorganismes Mesure de turbidité: densité optique Comptes viables Nombre le plus probable Comptes directs

27 Mesure de la Turbidité Mesure la quantité de lumière qui peut traverser un échantillon Le moins de lumière qui traverse léchantillon le plus dense est la population Mesure la densité optique ou le pourcentage de transmission 27

28 Mesure de la Turbidité Spectrophotomètre (A600): –Mesure de la Densité Optique 28 Lumière 600nm Détecteur….lecture Lecture différente

29 D.O. 600nm % Transmission Densité cellulaire

30 Comptes Viables Dilutions en séries de léchantillon Étalement des dilutions sur milieu approprié Chaque colonie simple est originaire dune unité formatrice de colonie (UFC) Le nombre de colonies équivaut à une approximation du nombre de bactéries vivantes dans léchantillon

31 63 UFC/0.1 ml de UFC/1.0 ml de UFC/ml X 10 5 = 6.3 x 10 7 /ml dans léchantillon original

32 :Avantages: –Dénombre les microorganismes viables –Peu distinguer différents microorganismes Limites: –Pas de milieu universel –Nécessite la croissance du microorganisme –UFC une bactérie Ex. Un UFC de Streptococcus un de E.coli = ?


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