Dilution de la couleur de la robe chez le bovin: Possible implication du gène Par-2 (Proteinase Activated Receptor 2).

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1 Dilution de la couleur de la robe chez le bovin: Possible implication du gène Par-2 (Proteinase Activated Receptor 2).

2 Gasconne Aubrac Prim’Holstein Limousine Blonded’Aquitaine SalersCharolaise Simmental Brune des alpes Normande Highland Froment du Leon TarentaiseVosgienne Dexter Pinzgauer ShorthornHerefordBrahmanLithuanienne Quelque phénotypes de couleurs de robe chez le bovin

3 OBJECTIFS -Contribuer à élucider les mécanismes impliqués dans la dilution de la couleur de la robe chez le bovin. -Etude du polymorphisme de la partie codante de PAR-2 de différentes races. -Analyse de la régulation transcriptionnelle du gène PAR2 au niveau de la peau de différentes races bovines.

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5 Boissy 2003 Etablissement de la coloration

6 Exon 1, 83 bpExon 2, 1109 bpIntron, 7.5 kb Bovin Humain Exon 1, 85 bpExon 2, 1113 bpIntron, 14 kb Souris Exon 1, 92 bp Exon 2, 1110 bpIntron, 10.75 kb Structure de Gène PAR-2

7 Clivage par Trypsine Tethered ligand Les domaines extracellulaires GTP Phopholipase C Gαq GDP Gβ Gγ SLIGKV région C-terminale Cytosol

8 Gαq GTP Phospholipase C SLIGKV PKC Ca +2 Réticulum endoplasmique GDP IP3 Phosphatidyl 4,5 biphosphate Diacy l C- fos C-jun MAK NFkB Gβ Gγ Protéin e Rho

9 Homme ……….S 33 K G R S L I G K V 42……………….. Bovin ……….S 31 K G R S L I G N V 40………………. S L 40 I G R L 44…………….. Souris ……….S 35 K G R S L 40 I G R L 44…………….. Mutations étudiées PAR-2 murin PAR-2 humain (Au niveau du peptide activateur)(Au niveau de la 2 ème boucle) P L I G R L S A I G R L S L I G A L Al-Ani et al 2004 Compton et al 2000

10 Allèles du gène PAR-2 chez le bovin S L I G N V S K G R S L I G N V PAR-2 TCT AAA GGA AGA AGC CTC ATT GGT AAC GTG S F I G N V S K G R S F I G N V par-2.1 TCT AAA GGA AGA AGC TTC ATT GGT AAC GTG S L M G N V S K G R S L M G N V par-2.2 TCT AAA GGA AGA AGC CTC ATG GGT AAC GTG

11 PAR2/PAR2 Silver = ∆TCT/SI Extension= e/e BL 192 par2.1/par2.1 Silver = ∆TCT/SI Extension = e/e BL193 BL185 PAR2/par2.1 Silver = ∆TCT/∆TCT Extension = e/e PAR2/par 2.1 Silver = ∆TCT/∆TCT Extension = e/e BL 182

12 GénotypesFréquences Allèliques Races PAR2 Par2.1 PAR2 Par2.2 Par2.1 Par2.2 TotalePAR2Par2.1Par2.2 Belgian Blanc Bleu -11110--220.270.700.02 Blonde d’Aquitaine 7823--200.600.350.05 Chianina1341121220.200.390.41 Italian Brown 11-191-220.070.910.02 Italian Friesian 110-11--220.270.730.00 Limousine19181-200.300.650.05 Maine-6-14--200.150.850.00 Fréquence génotypique du PAR2

13 Génotypesfréquences Allèliques Races PAR2 Par2.1 PAR2 Par2.2 par2.1 Par2.2 par2.2 TotalePAR2Par2.1Par2.2 Maremmana-2-20--220.050.950.00 Marchigiana28-93-220.270.660.07 Parthenese-5-10--150.170.830.00 Piemontese1101 --220.300.680.02 Pezzata Rossa Italiana 17-14--220.200.800.00 Romagnola69-7--220.480.520.00 Salers3539--200.350.580.08 2494121451712930.260.680.05

14 Test fonctionnel du récepteur  Expression stable de trois allèles mutants (Nt-FLAG-PAR2-Ct).  Analyse par Western Blot.  Analyse Calcium intracellulaire par spectrofluorometre.

15 Merci de votre attention.