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1 µg dARN total amplifié et marqué au Cy-5 (avant) ou au Cy-3 (après) 6 sujets témoins (4, 2, BMI = 22 ± 1) Biopsies de muscle avant et après clamp hyperinsulinémique.

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Présentation au sujet: "1 µg dARN total amplifié et marqué au Cy-5 (avant) ou au Cy-3 (après) 6 sujets témoins (4, 2, BMI = 22 ± 1) Biopsies de muscle avant et après clamp hyperinsulinémique."— Transcription de la présentation:

1 1 µg dARN total amplifié et marqué au Cy-5 (avant) ou au Cy-3 (après) 6 sujets témoins (4, 2, BMI = 22 ± 1) Biopsies de muscle avant et après clamp hyperinsulinémique euglycémique Analyse de la fluorescence des lames Sélection des spots (signal 2.5 x bruit de fond) Normalisation des intensités de fluorescence Calcul des rapports (Cy5/Cy3) Analyse des données (Cluster Software) Comparaison des différentes lames Sélection des ADNc avec un signal dans les 6 expériences Analyse statistique des modifications dexpression Estimation du « false-discovery rate (FDR) » Identification des gènes régulés

2 1- Enzymes 2- Récepteurs/transporteurs 3- Transcription/ Traduction Traduction 4- Signalisation 5- Cytosquelette/ trafic intracellulaire 6- Ubiquitin / Proteasome 7- autres 8- EST et inconnus Expression augmentée : n = 478 Diminuée : n = 284 Résultats :

3 Cytoskeleton Glucose Insulin Glucose Glucose-6P Glycogen Pyruvate Lactate O2O2 CO 2 Hexokinase II ATP Respiratory chain Transport Carbohydrate metabolism Signaling Phosphatases cAMP pathway Kinases 10 n = number of up-regulated genes n = number of down-regulated genes Vesicle trafficking Lipid metabolism 2 8 J. Biol. Chem, 2003

4 Insulin nucleus Transcriptional regulation RNA splicing and transport mRNA Translational regulation Proteins Post-translational modifications Protein catabolism Ubiquitin pathway Proteasome Other proteinases n = number of up-regulated genes n = number of down-regulated genes Ribosomal proteins J. Biol. Chem, 2003

5 Même étude chez les diabétiques de type 2 (5 sujets) : Régulation similaire aux témoins :129 (98 augmentés et 31 diminués) Régulation inverse aux témoins : 119 (89 augmentés et 28 diminués chez témoins ) Absence de régulation : 442 gènes (345 augmentés dont HKII, p85 PI3Kinase, FAT/CD36 et 98 diminués chez témoins ) Sur les 762 ARNm cibles de linsuline identifiés chez les témoins, 689 ont pu être analysés chez les diabétiques

6 noyau ARNm Protéines cytosol ? Diminution de la réponse à linsuline insuline Signalisation Gènes affectés p85 PI-3Kinase Hexokinase II SREBP1c ? + Nombreux Autres !!

7 noyau ARNm Protéines cytosol ? Diminution de la réponse à linsuline insuline Signalisation Gènes affectés p85 PI-3Kinase Hexokinase II SREBP1c Autres gènes… ? Mécanismes en cause ?

8 noyau ARNm Protéines cytosol ? Diminution de la réponse à linsuline insuline Signalisation Gènes affectés p85 PI-3Kinase Hexokinase II SREBP1c Autres gènes… ? Etude des promoteurs et identification des facteurs de transcription Etude des voies de signalisation de linsuline


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