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ANALYSE DE L’EXPRESSION DE PROTEINES D’ADHESION D’OSTEOBLASTES ET DE FIBROBLASTES CULTIVES SUR DU NITI DE 2 RUGOSITES DIFFERENTES

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Présentation au sujet: "ANALYSE DE L’EXPRESSION DE PROTEINES D’ADHESION D’OSTEOBLASTES ET DE FIBROBLASTES CULTIVES SUR DU NITI DE 2 RUGOSITES DIFFERENTES"— Transcription de la présentation:

1 ANALYSE DE L’EXPRESSION DE PROTEINES D’ADHESION D’OSTEOBLASTES ET DE FIBROBLASTES CULTIVES SUR DU NITI DE 2 RUGOSITES DIFFERENTES C. WIRTH, C. LAGNEAU, A.M. FREYRIA, D. DECORET, P. EXBRAYAT, M. LISSAC 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy

2 Le contexte buccal Matériaux ??? Biofilm Tissus Cellules épithéliales Cellules fibroblastiques Cellules ostéoblastiques Matériaux métalliques Céramiques Polymères S. mutans Actinomyces Lactobacillus ??? 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy

3 NiTi poli-miroir (NiTi 2400) NiTi rugueux (NiTi 400) Matériaux implantaires : Ticp, Ti6Al4V, NiTi ? 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy R a ≈ 0.07, ≈ 0.15 µm Dans notre étude, 2 états de surface  : C. WIRTH, V. COMTE, C. LAGNEAU, P. EXBRAYAT, M.LISSAC, N. JAFFREZIC, L. PONSONNET. Nitinol surface roughness modulates in vitro cell response: a comparison between fibroblasts and osteoblasts. Materials Science and Engineering C 2005, 25 :

4 Types cellulaires étudiés: Cellules ostéoblastiques de calvaria de rat obtenues par digestion enzymatique Cellules fibroblastiques de gencives humaines par technique des explants 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy immunomarquage biochimie (SDS-PAGE, Western Blot) biologie moléculaire (extraction ARN, RT-PCR) Techniques utilisées :

5 collagène de type I fibronectine ostéocalcine ostéopontine ostéonectine 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy noyau substrat membrane cellulaire protéine adhésive de la MEC intégrines complexe d’adhérence cytosquelette Protéines étudiées : Protéines adhésives de la MEC Protéines spécifiques des ostéoblastes

6 Réaction d’amplification en chaîne = PCR 5’ 3’ Séquence cible : ADN à amplifier Amorces Taq Polymérase Pol 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy

7 Premier cycle Étape 1 : DÉNATURATION  : 95°C  : 45 s 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy 5’ 3’ 5’3’

8 5’ 3’ 5’3’  : Tm  : 1 min 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy Étape 2 : HYBRIDATION

9 5’ 3’ 5’3’ Pol  : 72°C  : 1 min 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy Étape 3 : POLYMÉRISATION

10 5’3’ 5’ 3’  : 72°C  : 1 min 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy Pol Étape 3 : POLYMÉRISATION

11 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy 1 er cycle2 ème cycle3 ème cycle4 ème cycle

12 GAPDH (450pb) Collagène de type I (352pb) Fibronectine (442pb) 1000 pb ARN extraits de fibroblastes humains cultivés sur du NiTi poli-miroir et rugueux ARN extraits d’ostéoblastes de rat cultivés sur du NiTi poli-miroir et rugueux 1000 pb GAPDH (393pb) Collagène de type I (557pb) Fibronectine (351pb) Résultats des électrophorèses 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy Pas d’influence de la rugosité de surface sur la synthèse du collagène de type I et de la fibronectine par les ostéoblastes et les fibroblastes

13 22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai Nancy ARN extraits d’ostéoblastes de rat cultivés sur du NiTi poli-miroir et rugueux OP (688pb) ON (650pb) OC (760pb) 1000 pb OP : ostéopontine ON : ostéonectine OC : ostéocalcine L’expression de l’ostéocalcine est favorisée par un état de surface poli-miroir Résultats des électrophorèses Intensité de la bande plus importante sur le NiTi poli-miroir que le NiTi rugueux

14 Conclusion & Perspectives Étude de la synthèse d’autres protéines comme des intégrines, des cytoxines, des facteurs de croissance, des marqueurs d’apoptose par biologie moléculaire NiTi avec Ra=0.07µm  bon compromis pour obtenir un comportement optimum des ostéoblastes et des fibroblastes


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