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Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et HN, impliquées dans le mécanisme d’entrée cellulaire des virus parainfluenza.

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1 Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et HN, impliquées dans le mécanisme d’entrée cellulaire des virus parainfluenza humains et animaux. M ASTER 2 GBC – J UIN 2009 UCBL V IR P ATH CNRS FRE 3011 D R M ANUEL R OSA -C ALATRAVA P R B RUNO L INA J EAN -C HRISTOPHE L E B AYON ED 341 – E2M2

2 Virus Parainfluenza de type 2 Entrée du virus État de l’art Caractérisation des mutations Projet Encadrement Projet professionnel Adéquation 2

3 Famille : Paramyxoviridae Genre : Rubulavirus Avulavirus Terrier et al. (2008) Maladies respiratoires Maladies respiratoires Pas de vaccins/antiviraux Pas de vaccins/antiviraux Virus enveloppé Virus enveloppé Ø 200nm ARN négatif, simple brin 3 F et HN L’entrée dans la cellule est possible grâce aux GP F et HN

4 FHN Viral envelope Cellular membrane F1 HN S S F2 C N N C Fusion peptide Cytoplasmic tail Extracellular domain Transmembrane region HR1 HR2 F Takimoto et al. (2002)

5 hPIV-2 variants with increased cell-cell fusion: T96A mutation (Terrier et al., 2008) PIV-5 “HN-independent” F : L22P, K132E and V290A (Ito et al., 1998, 2009) PIV5 / hPIV2 PIV5 / hPIV2 F sequences: 51% identity 5 Functional characterization of F GP hPIV2 mutants : T96A and mutations transposed from PIV-5 Role in fusion and HN-F activation mechanisms ?

6  T96A: favorise l’activation par HN  I24P: F “indépendante” de HN  K133E: interaction entre F et HN et augmentation de la fusion  I294A: favorise l’activation par HN 6 Tête Tige I24P I294A T96A K133E  2 parties distinctes de la tête de F semblent être impliquées dans l’interaction F-HN

7 7  Expression de glycoprotéines (WB, FACS)  Interactions entre F et HN(CoIP)  Comportement des mutants dans un contexte viral ou pseudo-viral (VLP and Reverse Genetics)  Meilleure mesure de la fusion membranaire (RT lipid-mix assay)  Caractérisation de nouveaux mutants grâce à des variants (sequencing, fusion assay)

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10 Comprendre le mécanisme d’entrée du virus dans la cellule → Design de nouvelles molécules anti-virales

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14 Dr Olivier Terrier Dr Manuel Rosa-Calatrava Pr Bruno Lina Christelle Godard and Gaëlle Cartet for their technical support All VirPath team for their support


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