Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Biochimie et Machines Moléculaires ATP synthase Une moteur rotatif.

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1 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Biochimie et Machines Moléculaires ATP synthase Une moteur rotatif

2 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotatif – Preuves – Contraintes P N Membrane.nH + ATP + nH + ADP + P i Très conservé structure et fonction dans evolution très similaire dans les Archaea, les Eubacteries et le Eucarya.

3 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotatif – Preuves – Contraintes P N Membrane.nH + ATP + nH + ADP + P i Deux rôles: tantot fabrication d'ATP grace au gradiant à protons, tantot génération d'un gradiant à protons grace à l'ATP – reversible

4 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Separation par lavage au sel en une partie membranaire F 0 (ab 2 cn) et une partie soluble F 1 ( 33 ) Interactions electrostatiques...

5 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes F 1 est une ATP'ase P N Membrane.nH + ATP + nH + ADP + P i

6 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes F 0 est un trou a protons P N Membrane.nH + ATP + nH + ADP + P i

7 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes

8 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes F1F1 F0F0

9 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes

10 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Toutes les ATP'ase ont des structures très similaires mais il y des petites différences. Plus de sous-unités et variables. Domgall et al. (2002) J. Biol. Chem., 277: 13115-13121

11 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Toutes les ATP'ase ont des structures très similaires mais il y des petites differences. Architecture semblable mais 3 conections! Domgall et al. (2002) J. Biol. Chem., 277: 13115-13121

12 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Toutes les ATP'ase ont des structures très similaires mais il y des petites differences. Domgall et al. (2002) J. Biol. Chem., 277: 13115-13121

13 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Trois techniques: Pontage chimique (Cross 1995) PARAP (Junge 1996) Vidéo (Yoshida 1997)

14 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Pontage chimique Biochimie Introduire des cysteines en et. Purifier un complexe ponté. Reconsituer avec du Repurifier des complexes.

15 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Pontage chimique Biochimie Zhou et al. 1997 PNAS 94: 10583- 10587

16 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes PARAP (Junge 1996) Spectroscopie Un colorant Eosine se fixe sur une cysteine de la sous unité. -F 1 s'accroche à une bille de CM- sepharose... Immobile.

17 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Regarde persistance d'anisotropie apres un eclair, si elle persiste il n-y a pas rotation si elle recupere il y a une rotation. Sabbert et al. 1997 PNAS 94: 4401- 4405

18 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Regarde persistance d'anisotropie après un eclair! Sabbert et al. 1997 PNAS 94: 4401- 4405

19 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Vidéo (Yoshida 1997) Physique Noji et al. (1997) Nature, 386: 299 – 302.

20 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Omote et al. (1999) PNAS, 96: 7780-7784

21 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Capable de beaucoup de force, déplacement d'un énorme filament d'actine. Une torque d'environ 50pN nm Omote et al. (1999)

22 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Stator et Rotor

23 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Introduction ● Les fonctions ● L'architecture – Plus complexe que BR ● Les ATP synthase – Thème et variations F et V ● Un moteur rotative – Preuves – Contraintes Stator et Rotor Pontage chimique a definit les deux parties: Rotor c n Stator ab 233

24 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique

25 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique 20Å

26 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Les sous- unités et sont très similaires. L'organisatio n générale est six sous- unités 33 autour de la sous-unité.

27 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Les 3 paires de sous-unités ont des structures différentes et les lient des cofacteurs differents. Notamment du site actif!

28 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Les sous- unités et serrent la sous-unité.

29 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Les interfaces sont largement hydrophobe (graisse) sauf a milieu et un peu au pied de la sous-unité.

30 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Les trois sites ont des propriétés différentes ● Ouvert:Faible affinité ● Lâche:Plus forte pour ADP et Pi préfère ADP à ATP ● Fermé:Préfère ATP, haute affinité.

31 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique

32 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique

33 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique

34 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique La sous unité c est très hydrophobe, elle forme deux hélices transmembranaires avec une boucle elle a un résidu acid au milieu de la deuxième hélice transmembranaire. MENLGDLAQG LALLGKYLGA GLCMGIGAIG PGIGEGNIGA HAMDAMARQP EMVGTITTRM LLADAVAETT GIYSLLIAFM ILLVV

35 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Les sous-unités c s'organisent en anneau Seelert et al. 2000, Nature 405: 418-419

36 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique La sous unité a est membranaire a plusieurs hélices, la sous-unité b est allongée avec une hélice transmembranaire

37 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Les sous unités a et b forment un sous complexe

38 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique AB 2 C 10-14 C anneau B batons A canal à protons

39 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Stock et al. (1999) Science, 286: 1700-1705

40 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Suzuki et al. (2002) J. Biol. Chem., 277: 13281- 13285

41 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique A) fluorescence d'ACMA B) Activité ATP'asique.

42 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique

43 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique

44 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique

45 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Stochiométrie par pontage chimique AFM Cristallographie Jones and Fillingame.1998 J. Biol. Chem. 273: 29701-29705

46 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Stochiométrie par pontage chimique AFM Cristallographie Seelert et al. 2003 J. Mol. Biol 333: 337-344

47 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Stochiométrie par pontage chimique AFM Cristallographie Stock, et al. (1999) Science 286: 1700-1705

48 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Stochiométrie: ● Mitochondrie – 10 ● E coli – 12 -(ou 10) ● Chloroplaste – 14 ● Bacterie Na + – 11 Mais est-ce fixe? Ilyobacter tartaricus Vonk et al. 2002 J. Mol. Biol 321: 307-316

49 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique

50 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique

51 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique “Symmetry mismatch” Mesure de rotation de l'holoenzyme Mesures d'elasticité de la jonction Probleme: Comment sont couplés les 10 a 14 protons et les 3 ATP? Il faut stocker les petits rotations (25°-36°) de F 0 avant de faire une grande rotation (120°) de F 1

52 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique “Symmetry mismatch” Mesure de rotation de l'holoenzyme Mesures d'elasticité de la jonction 10 Si la connection entre F 0 et F 1 est rigide certains directions seront plus favorable que d'autres. Plus le joint entre les deux est elastique moins on vera cet effet.

53 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique “Symmetry mismatch” Mesure de rotation de l'holoenzyme Mesures d'elasticité de la jonction

54 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique “Symmetry mismatch” Mesure de rotation de l'holoenzyme Mesures d'elasticité de la jonction

55 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Expérience: une transmission élastique

56 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Expérience: une transmission élastique (c ou b) Permet à ce système d'être robust : résister le “mismatch” et rester active en effort.

57 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Energie electrochimique Energie elastique Energie chimique ATP F1F1 F0F0

58 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Pourquoi les protons veulent traverser le membrane? Voltage. ∆G = F ∆V Difference de concentration, ∆G = RT ln(H + in /H + out ) pmf = F ∆V + 2.303 RT ∆pH ∆V = 100mV et ∆pH = 1 pmf = 9.65 10 3 + 5.74 10 3 J/mole pmf = 15.4 kJ/mole

59 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Combien ca coute a frabriqué une molécule d'ATP? ∆G = ∆G° + RT ln Keq ∆G = ∆G° + RT ln(ATP/ADPxPi) ∆G° = +30.5 kJ/mole typiquement Pi = 25mM ∆G = 30.5+9.2+2.5ln(ATP/ADP) kJ/mol

60 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Le moteur calle quand les deux energies sont égales. (F ∆V + 2,303 RT ∆pH) * Nb(C) = (∆G° + RT ln(ATP/ADPxPi))*3 15,4 * 10 = (30,5+9,2+2,5ln(ATP/ADP))*3 4,65 = ln(ATP/ADP)

61 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Le moteur calle quand les deux energies sont égales. (F ∆V + 2.303 RT ∆pH) * Nb(C) = (∆G° + RT ln(ATP/ADPxPi))*3 Se moment depend de la force protonmotrice, si elle diminue l'ATPsynthase arrete et devienne eventuellement une ATP'ase (typeV)

62 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Fonction ● F1 l'ATP'ase – Structure – Cycle catalytique – Le movie ● F0 une turbine à protons – Structure et dynamique – Variations ● Couplage mécanique – Colle – Élastique et – Energétique Dans certains cas ils existent peut- etre des protéines “cliquet” qui evite que l'ATP synthase devienne une ATP'ase.

63 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Conclusions ● Une nanomachine pompe ● On commence à comprendre comment ça marche ● Le turbine à protons ● Couplé par l'énergie élastique ● Au cycle catalytique par ● Des changements de conformation ● Mais il reste plein de questions. ● Comment passent des protons? ● Comment fonctionnent des cliquets? ● Methodes mise en Oeuvre ● Méthodes structurales ● Résolution des structures cristalines ● Microscopie électronique ● AFM ● Méthodes Biochimiques ● Pontage chimique et ● Par introduction de cystéines. ● Methodes Biophysiques ● Spectroscopie et ● Visualisation des rotations

64 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Conclusions

65 Biochimie et Machines Moléculaires – Un moteur rotatifJames Sturgis1 Reférences – Bibliographie ● Reviews – Junge et al. (1997) FEBS Lett 22: 420-423. – Kühlbrandt (2000) Nature 406: 569-570. – Capaldi et Aggeler (2002) TIBS 27: 154-160 ● Sites web – En francais! – http://www.unine.ch/bota/bioch/cours/ATPsynthase.html – EN Anglais ● Articles de Recherche – Voir citations sur les transparents... il y en a tant!