LE MILIEU A LA LYSINE DE TAYLOR (LDC)

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1 LE MILIEU A LA LYSINE DE TAYLOR (LDC)
Composition Source N Peptone g Extrait de viande 5 g L-Lysine g Glucose 0,5 g Pyridoxal phosphate 0,005 g Pourpre de Bromocrésol 0,01 g Rouge de crésol 0,005 g ED qsp 1 L Source de C, N Acide aminé indispensable à la recherche de la LDC Source de C Vitamine PP , coenzyme des décarboxylases Indicateurs de pH violet pH basique ou neutre, jaune pH acide pH = 6,8 à 7 Ensemencement 1- Introduire une goutte de suspension dans le milieu. 2- Agiter. 3- Si le tube n’est pas plein, recouvrir d’un peu d’huile de vaseline. 4- Incuber 24 heures à 37°C

2 LE MILIEU UREE INDOLE pH = 7 Composition Tryptophane 0,3 g Urée 2 g
Acide aminé nécessaire à la recherche de la TDA et de la tryptophanase Tryptophane 0,3 g Urée g Phosphate monopotassique 0,1 g Phosphate bipotassique 0,1 g Chlorure de sodium 0,5 g Ethanol à 95° 1 mL Rouge de phénol à 1% 0,25 mL ED qsp 100 mL Molécule azotée nécessaire pour la recherche de l’uréase Source de P Sels minéraux Solubilisation du tryptophane Indicateurs de pH rouge pH basique ou neutre, jaune pH acide pH = 7 Ensemencement 1- Introduire 1 ou plusieurs colonies identiques dans le milieu. 2- Agiter. 3- Incuber 24 heures à 37°C.

3 Lecture des milieux Milieu LDC
1ère lecture possible 2nde lecture possible Alcalinisation du milieu par formation d’un composé basique issu de la décarboxylation de la lysine par la LDC, la cadavérine : LDC + Le milieu est devenu jaune  le pH est acide par formation de composés acides issus de la fermentation du glucose par les bactéries. Il n’y a pas réalcalinisation du milieu : LDC -

4 Milieu urée-indole Recherche de l’uréase: lecture directe
1ère lecture possible 2nde lecture possible Alcalinisation du milieu par formation d’un composé basique issu de l’hydrolyse de l’urée : UREASE + Le rouge de phénol reste orangé  pH neutre  l’urée n’est pas hydrolysée, absence de l’enzyme chez les bactéries : UREASE -

5 Recherche de la TDA et de l’indole
2 gouttes de FeCl3 10 gouttes du milieu Formation d’un précipité marron  présence d’acide indole pyruvique : TDA + Pas de modification du milieu : TDA - Reste de la culture 2 gouttes de réactif de Kovacs Présence d’un anneau rouge en surface  formation d’indole à partir du Trp sous l’action de la tryptophanase : INDOLE + Présence d’un anneau orangé en surface  absence d’indole : INDOLE -